PFGE在真菌基因研究中的应用

IPFGE与连锁群从酿酒酵母脉冲电场电泳研究到医学上重要酵母类真菌的分类,人们已逐渐建立了参数随菌种各异的PFGE电泳条件,以适于不同大小染色体的分离,获得了一系列酵母类及丝状真菌,包括四大纲以及非典型真菌的染色体核型及基因组大小（表1）,并利用已知基因探针进行染色体连锁群的定位。1987年,Sndth等l’吩离得到了粟酒裂殖酵母的3条巨大染色体,使PFGE的分辨能力达到Tgmb,极大促进了该菌株的基因图谱工作的进展。紧接着,他们又得到了假丝酵母类具有种特异性的电泳核型,并成为分子流行病学中酵母类致病真菌的分型依据。…     

皮质酮对高钾诱导PC12细胞内钙升高的非基因组调节作用

目的：分析皮质酮快速抑制高钾诱导PC12细胞内钙升高的机制。方法：使用荧光影像系统,实时检测细胞内钙变化。结果：①在预处理PC12细胞5min后,皮质酮可呈量－效关系抑制高钾诱导的PC12细胞内钙升高。②牛血清白蛋白耦联的皮质酮（B－BSA）可模拟皮质酮快速抑制高钾诱导PC12细胞内钙升高的作用,并呈现量－效关系。③糖皮质激素的细胞内受体拮抗剂RU38486对皮质酮快速抑制效应无明显拮抗作用。④蛋白合成抑制剂放线菌酮预处理细胞3h后,皮质酮对高钾诱导PC12内钙升高仍有较强抑制作用。结论：①皮质酮的作用点位于细胞膜上。②皮质酮的快速作用不直接依赖细胞内蛋白合成和不依赖细胞内糖皮质激素受体。③皮质酮对高钾诱导PC12内钙升高的快速抑制作用属非基因组作用。     

不同预处理对大麦花药3种内源激素含量和过氧化物酶活性的影响

研究了大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ Ｌ．）花药－花粉培养中不同预处理对花药内源激素（ＡＢＡ,ＩＡＡ,ＩＰＡ）含量和过氧化物酶活性的影响。结果表明：１． 经甘露醇预处理不同天数,同一种基因型的３种内源激素的变化和不同基因型的同一种内源激素的变化规律十分相似,均是在预处理初期含量急剧增加,最高值在０．５或１ ｄ 处。以后开始逐渐下降;最后,保持在一定的水平上。２． 在甘露醇预处理过程中,两种基因型花药过氧化物酶活性的变化规律也十分相似。在预处理前期（从开始到第３天）活性呈直线上升,第３天达到最大值。从第３天到第５天活性减弱。最后,活性又开始增强。３． 在低温预处理过程的初期（２～５ ｄ） 两种基因型花药过氧化物酶活性都出现第一个小峰。在第１４天（“Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ”）或第２１天（“Ｉｇｒｉ”）又出现第二个峰值,但后者较高。在预处理的后期（从第２８天到第３５天）两种基因型花药过氧化物酶的活性又呈现上升的趋势。同甘露醇预处理后期变化一致     

口蹄疫病毒3A基因在大肠杆菌中的高效表达

将口蹄疫病毒(Foot\|and\|Mouth Disease Virus,FMDV)的3A基因克隆到线形化的原核表达载体pProEX\|HTb中,转化大肠杆菌BL21和DH5α,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆,IPTG诱导表达。SDSPAGE和West bolt结果证实大肠杆菌菌体不可溶性蛋白中富含3A蛋白,说明3A蛋白在表达产物中以包涵体的形式存在,所表达的蛋白含量占菌体蛋白的29.2%。     

应用球孢白僵菌防治马尾松毛虫的策略及其生物多样性基础的研究

对３种不同方式应用球孢白僵菌防治马尾松毛虫的结果表明,３个林场的虫口在连续４年内均被抑制在低水平,但松毛虫种群动态不同：以淹没式施放白僵菌为主,但有时也淹没式施放化学杀虫剂的麻姑山林场平均虫口密度为３．１６±４．９４条·株－１,波动最大;长期接种式应用白僵菌的戴公山林场平均虫口密度只有０．０９±０．１４条·株－１,一直处于低密度状态;以化学农药处理小面积虫源地结合不频繁地淹没式施放白僵菌的金寺山林场平均虫口密度为１．４５±２．２９条·株－１,偶可达防治指标．对群落组成的调查结果表明,从麻姑山、金寺山到戴公山,动物和虫生真菌群落各物种的总个体数递减,而总物种数、总物种数与总个体数的比值,天敌与害虫种数和个体数的比值以及群落多样性指数皆递增,表明群落多样性渐趋丰富,食物链网渐趋复杂,群落稳定性和对害虫的自然控制能力逐渐增强．对群落动态的主成分分析进一步表明,从麻姑山、金寺山到戴公山,动物和虫生真菌群落的演化时序分明,趋于稳定,自我调节力强．     

动物细胞培养用生物反应器及相关技术

动物细胞大量培养是生产生物制品的重要途径,它用到的关键设备是生物反应器。根据培养细胞、培养载体、培养液混合方式的不同,生物反应器主要有搅拌式、气升式、中空纤维式、回转式等,其中搅拌式规模最大。回转式是NASA于20世纪90年代中期开发的一种新型生物反应器,被誉为空间生物反应器,可用于组织工程研究。与生物反应器配套的技术主要有灌注、微载体、多孔微球、转入抗凋亡基因等,可以有效地提高细胞密度,增加生物制品产量,提高质量。今后生物反应器研制主要朝两个方向发展:一是,以高密度培养动物细胞生产蛋白质药物为目的,二是以三维培养动物细胞(主要是人类细胞)再生组织或器官为目的。     

昆虫细胞色素P450基因的克隆及其策略

本记述了目前已克隆的105个昆虫细胞色素P450基因cDNA和片段,它们分属CYP4、CYP6、CYP9、CYP12、CYP18和CYP28等6个家族：同时,综述和分析了克隆这些基因、cDNA和片段所采用的策略及其优缺点。     

Involvement of caveolin‐1 in fibronectin‐induced mouse embryonic stem cell proliferation: Role of FAK,RhoA, PI3K/Akt,and ERK 1/2 pathways

Fibronectin (FN) is the foremost proliferation‐associated extracellular matrix component promoting cell adhesion, migration, and survival. We examined the effect of FN on cell proliferation and the related signaling pathways in mouse embryonic stem (ES) cells. FN increased integrin β1, Src, focal adhesion kinase (FAK), and caveolin‐1 phosphorylation levels in a time‐dependent manner. Phosphorylation of Src, FAK, and caveolin‐1 was attenuated by integrin β1 neutralizing antibody. Integrin β1, Src, and FAK coimmunoprecipitated with caveolin‐1 in the presence of FN. In addition, FN increased RhoA and Rho kinase activation, which were completely blocked by PP2, FAK small interfering RNA (siRNA), caveolin‐1 siRNA, or the caveolar disruptor methyl‐β‐cyclodextrin (MβCD). FN also increased phosphorylation of Akt and ERK 1/2, which were significantly blocked by either FAK siRNA, caveolin‐1 siRNA, MβCD, GGTI‐286 (RhoA inhibitor), or Y‐27632 (Rho kinase inhibitor). FN‐induced increase of protooncogenes (c‐fos, c‐myc, and c‐Jun) and cell‐cycle regulatory proteins (cyclin D1/CDK4 and cyclin E/CDK2) expression levels were attenuated by FAK siRNA or caveolin‐1 siRNA. Furthermore, inhibition of each pathway such as integrin β1, Src, FAK, caveolin‐1, RhoA, Akt, and ERK 1/2 blocked FN‐induced [³H]‐thymidine incorporation. We conclude that FN stimulates mouse ES cell proliferation via RhoA‐PI3K/Akt‐ERK 1/2 pathway through caveolin‐1 phosphorylation. J. Cell. Physiol. 226: 267–275, 2010. © 2010 Wiley‐Liss, Inc.