乳腺生物反应器表达的重组人乳清白蛋白的高效分离纯化

利用乳腺生物反应器高效地表达重组人乳清白蛋白,但是目标产物分离纯化的难度较大。通过分子模拟计算比较待分离原料中主要蛋白组分的物化性质,包括表面电势和表面疏水性,在此基础上设计了高分辨率、快速的分离纯化工艺。通过硫酸铵沉淀的正交试验条件优化,有效地去除了干扰层析精制过程的IgG杂质,提高了后续疏水层析的稳定性,从而成功地分离开目标蛋白及与其同源的牛乳清白蛋白杂质,得到纯度>95%的rHLA纯品,工艺回收率48.6%。乳糖合成活性和圆二色谱检测结果表明,纯化rHLA具有调节β-1,4-半乳糖苷转移酶活性和天然的空间结构。     

心肌α肌球蛋白重链启动子驱动的CREG 蛋白表达载体 的构建及鉴定

目的:构建心肌特异性α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)启动子启动E1A基因阻遏子(cellular repressorof E1A-stimulated genes,CREG)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的真核表达载体。绿色荧光蛋白作为报告基因,方便在心肌细胞中直接观察CREG蛋白的表达,为心肌特异性转CREG基因动物模型制备提供载体。方法:用BamH I和EcoR I双酶切pcDNA3.1 myc-His/hCREG质粒得到CREG基因,亚克隆入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-N1中,构建pCREG-EGFP-N1;根据Genebank中公布的α-MHC基因的启动子序列,人工合成pUC57-α-MHC启动子基因序列,经Ase I和Nhe I双酶切得到启动子α-MHC,亚克隆入pCREG-EGFP-N1中替代原CMV启动子,构建pα-MHC-CREG-EGFP-N1,测序鉴定。用脂质体法将该质粒转染体外培养的小鼠原代心肌细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达;Western blot检测CREG蛋白的表达。结果:成功构建pα-MHC-CREG-EGFP-N1质粒,酶切及测序结果正确;成功转染入原代培养小鼠心肌细胞,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测到CREG蛋白的表达。结论:重组质粒pα-MHC-CREG-EGFP-N1体外转染入原代培养小鼠心肌细胞后,目的基因能够在心肌细胞中有效表达,检测方法简便可靠,为下一步建立心肌细胞特异性表达CREG的过表达转基因小鼠、深入探讨CREG在心肌疾病发生中的生物学功能研究奠定了基础。     

内源性儿茶酚胺参与白细胞介素-2对大鼠离体心脏的作用

目的: 研究内源性儿茶酚胺是否参与白细胞介素-2(IL-2)的心脏作用.方法: 采用Langendorff离体心脏灌流模型,观察室性早搏次数、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、心率(HR)和冠脉流量(CF)的变化.结果: ①50 U/ml IL-2增加离体心脏的室性早搏次数,增加LVDP、LVEDP、HR和CF.②利舍平(reserpine)或普萘洛尔(propranolol)预处理后,50 U/ml IL-2对离体心脏的作用消失;phentolamine预处理后,不改变50U/ml IL-2的离体心脏作用.③200 U/ml IL-2增加离体心脏的室性早搏次数,对LVDP、LVEDP、HR和CF无显著增加作用.④reserpine或propranolol预处理后,200 U/ml IL-2增加离体心脏的室性早搏次数作用不明显,LVDP、HR和CF降低、LVEDP增高.结论: 内源性儿茶酚胺介导了IL-2的致离体心脏心律失常、正性变时和变力作用,较高浓度的IL-2抑制离体心脏的功能.     

基于16S rDNA序列探讨中国剑角蝗科的单系性及其六属的系统发育关系

在中国学者夏凯龄的分类系统中,剑角蝗科Acrididae一直被看作是单系群,包含6个亚科。但是,近年来的研究对其单系性争议较大。为探讨其单系性和剑角蝗属等6属的系统发育关系,我们测定了剑角蝗科14种蝗虫的16S rRNA基因部分序列,并从GenBank中下载了1种蝗虫的同源序列。以蚱科的2个种作外群,用NJ、MP及ML法重建系统发生树。由三棵分子系统树中得出的系统发生关系与中国的分类系统差别较大,都不支持剑角蝗科是单系群,但与国外Kevan的系统相一致,提示我们国内的分类系统亟待修改和完善。长腹蝗亚科与斑腿蝗科的亲缘关系要近于与剑角蝗科的其他种类的关系。另外,尽管所测的红足剑角蝗和上海剑角蝗的16S rDNA的片段序列完全相同,我们仍不能断定二者是同一个物种[动物学报52 (2) : 302 -308 , 2006]。     

新型蛋白质修饰剂的合成及修饰牛血红蛋白的初步研究

以L-谷氨酸和己二酸为原料合成了一种新型的四官能团蛋白质修饰剂,并用核磁共振和红外光谱对其结构进行了表征。然后以其为修饰剂,对牛血红蛋白的化学修饰进行了初步的研究,并通过高效液相色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳和血氧分析仪对交联牛血红蛋白的分子量和携氧性能进行了表征。结果表明,该修饰剂可以使牛血红蛋白同时在分子内和分子间发生化学交联,并较好地保持携氧能力（P50:21.7mmHg,Hill系数:2.01）,因此在众多用于开发人工血液代用品的化学修饰剂中该修饰剂具有良好的应用前景。     

维生素B12的光解研究及发酵液中维生素B12检测新方法的建立

采用HPLC检测法研究5,脱氧腺苷钴胺素和甲基基钴胺素的水溶液在不同光源及不同照度下的光解情况,结果表明随着光能量的增加光解速度加快。利用脱氧腺苷钴胺素的光解性质,探索了一种检测发酵液中维生素B12含量的新方法。将含有钴胺素的细胞破碎液完全光解后,测定光解后的产物羟基钴胺素,以此来确定维生素B12产量。此方法简便快速、重复性好,可应用于发酵生产维生素B12的各个环节。     

木荷及其与无患子皂甙抽提物单复配体外抗稻瘟病活性(英文)

来自木荷叶和无患子中果皮的皂甙抽提物对抗稻瘟病原活性被试验。皂甙抽提物体外抑制活性显示了皂甙剂量与抗真菌效果高度相关性。它们的抗稻瘟有效中浓度EC50:木荷叶乙醇抽提物为42.95μg/mL,木荷叶水抽提物为452.91μg/mL,无患子中果皮的甲醇抽提物为95.65μg/mL。一个重要的结果是当上述木荷叶和无患子中果皮醇抽提物以3∶4到15∶8的质量配比时产生了显著的增效抗稻瘟作用,而在其它配比时有相加作用。通过乙醚/丙酮沉析、硅胶柱色谱分离,以及酸水解和薄层过程,检测出木荷抽提物皂甙中含有2种三萜类皂甙元和5种单糖。纯化后的皂甙在150μg/mL时显示了98.28%的抑制率。此研究结果表明:木荷叶抽提物,或木荷叶和无患子中果皮抽提复配物对毁灭性的稻瘟病害具有重要地抗病效果。     

江苏省2008年疑似预防接种异常反应监测数据的分析评价

采用描述性流行病学方法对江苏省2008年疑似预防接种异常反应(Adverse event following immunization,AEFI)监测数据及网络直报系统运转情况进行分析和评价。共收集到AEFI报告个案6197例,其中疫苗引起的反应占98.97%,偶合症占0.95%,不明原因占0.02%,待定占0.06%。临床诊断分布是以发热、局部红肿和局部硬结等一般反应为多见,其次为异常反应中的过敏性皮疹,无菌性脓肿。全省AEFI网络直报系统运行正常,各项考核指标均完成得较好。采用统一的AEFI分类与临床诊断病例定义,通过网络直报系统的三级审核,报告的数据质量有了很大的提高。监测结果显示,全省免疫规划疫苗安全性与预防接种服务质量良好。     

一种蛋白质B细胞表位展示系统的构建及验证

目的:建立一种能够有效展示蛋白质B细胞表位的载体系统,以用于表位特异性抗体的制备和表位疫苗的设计。方法:选用抗体的可变区作为蛋白质B细胞表位展示的骨架蛋白,B细胞表位的展示部位为CDR3区。全基因合成骨架蛋白基因,通过重叠PCR将B细胞表位编码序列插入到骨架蛋白基因中,原核表达目的蛋白,利用Sephacryl S-100层析柱进行蛋白纯化,用纯化的蛋白按常规方法免疫小鼠,采用ELISA法检测免疫血清的滴度及特异性,通过Western blot和间接免疫荧光技术进一步验证免疫血清对目的蛋白的识别。结果:成功构建了3种表位展示蛋白,均表现出了很好的抗原性,表位展示蛋白免疫血清具有较好的特异性,能够特异识别所展示的B细胞表位。结论:抗体可变区作为骨架蛋白能够很好地展示B细胞表位,免疫小鼠后获得的免疫血清表现出了较好的特异性。     

吉林省垂边蚜蝇属二新种记述(双翅目,食蚜蝇科)

在整理吉林省采集的食蚜蝇标本时,发现并记述垂边蚜蝇属2新种,即吉林垂边蚜蝇Epistrophe jilinensis sp.nov.和暗跗垂边蚜蝇E.melatarsis sp.nov.,同时提供其形态特征图。新种模式标本保存在陕西理工学院动植物标本馆及东北师范大学生命科学学院标本馆。