在林可霉素生物合成过程中铵离子调控作用的酶学研究

在FUS-50L发酵罐内,用林可链霉菌发酵生产林可霉素。研究发现,NH4^＋对林可霉素发酵过程具有显著的调控效应：补入硫酸铵前,发酵液中的NH4^＋浓度由3．0mmol／L消耗至1．0mmol／L以下的控制过程非常关键,这样可能使林可霉素合成酶大量合成,同时,解除了NH4^＋对谷氨酰合成酶（GS）的阻遏效应;20～24h,尽可能提高硫酸铵的平均补入速率,但最高NH4^＋的瞬时浓度应控制在19．0mmol／L以下,一方面可缩短生物量的积累时间,另一方面可避免过高浓度的NH4^＋对GS的抑制作用;24h后逐渐降低NH4^＋的平均补入速率,使主代谢流转入次级代谢;在发酵中期和后期,应将最低NH4^＋浓度控制在3．0～4．0mmol／L的范围内,避免铵离子对GS的阻遏效应,GS比活力与林可霉素的产量呈正相关关系。最终建立了动态的硫酸铵补加工艺。     

我国盾叶薯蓣居群遗传结构分析

利用随机扩增多态DNA(RAPD)标记,分析研究了中国11个盾叶薯蓣居群82个个体的遗传多样性与遗传结构,15个寡聚核苷酸引物扩增共得到108条带,其中96条为多态带,占88．89％。Shannon多样性指数(I)为0．3093,居群水平的变异从0．1564到0．3098,物种水平的Nei基因多样度(h)为0．2499,居群水平的变化范围为0．1607到0．2137。遗传变异分析表明,物种水平的基因分化系数Gst为0．3415,居群间的基因流Nm为0．9641,居群间遗传交换小。分子方差分析(AMOVA)表明,居群内变异为68．96％,地区间变异为19．45％,居群问变异为11．58％。聚类结果以长江为界,将盾叶薯蓣分为南北两个大类群。研究结果对盾叶薯蓣种质的迁地保护有重要意义。     

重组人血清白蛋白发酵过程表达期的定量研究

结合元素平衡和代谢平衡,建立了重组人血清白蛋白发酵过程表达期的数学模型,按单纯形多变量最优化方法估算了模型的未知参数,并探讨了导致表达期不同阶段产物形成速率存在差异的可能原因。该模型能较好地描述重组人血清白蛋白发酵过程表达期中各宏观反应速率之间的关系,为重组人血清白蛋白的高效表达提供了线索。     

沙田柚优质高产的土壤改良与施肥及修剪控梢技术

通过3年在梅州柚园的土壤作物营养与施肥试验研究,结合当地生产实际,总结出梅州沙田柚种植实现高产优质的土壤改良、培肥地力、施肥和修剪控梢的一整套栽培技术措施.     

猪十二指肠组织灌流培养与静态培养比较

组织灌流培养和静态培养是肠道组织体外培养最常见的两种方法,但目前尚不清楚这两种培养方法哪种更适合用于体外胃肠激素分泌的研究.以猪十二指肠组织为研究对象,首先比较L-精氨酸下两种体外培养方法对组织胆囊收缩素(Cholecystokinin,CCK)分泌和组织活性乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LD...     

非洲猪瘟病毒CP204L基因的原核表达与单抗制备

由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的非洲猪瘟(ASF)给我国养猪业带来了不可估量的经济损失,严重阻碍了我国养猪业的发展,研发ASFV快速诊断试剂是目前最重要的内容之一。CP204L基因编码ASFV结构蛋白p30。本研究以克隆ASFV的CP204L基因为基础,通过基因重组技术,加入His标签,将构建的重组质粒命名为pET-28a-CP204L。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,37℃经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达6h,表达蛋白进行SDS-PAGE鉴定和Western Blot检测。重组蛋白纯化后免疫小鼠制备筛选单克隆抗体,Western Blot和IFA验证单抗的结合特异性。结果表明,重组的pET-28a-CP204L诱导后表达蛋白为30kD,以不可溶性包涵体形式存在;表达蛋白利用His标签进行纯化,获得纯化蛋白2mg,单克隆抗体筛选获得5株IgG亚型的ASFV p30蛋白的单抗,且均具有良好的结合活性。本研究为发展ASFV检测方法提供了基础。     

抗鸡白痢益生菌株的筛选

利用从健康蛋鸡和肉鸡肠道内分离的菌株以及本实验室保存菌,在体外分别与鸡白痢沙门菌强毒株作用48h后,以涂片染色镜检法和菌落计数法筛选出对鸡白痢沙门菌有抑制作用的5株细菌,即鸡粪肠球菌、鸡非致病性大肠埃希菌、环状芽胞杆菌、酵母菌和乳酸菌,抑制率分别为97.8%、99％、99.9％、98.2％和78％。     

昂立一号~优菌多颗粒人群试食研究

昂立一号○R优菌多颗粒是“昂立一号”家庭新成员,其人群试食研究结果表明,昂立一号○R优菌多颗粒在短时间(4 d)内就能显著改善食欲、胃肠道及代谢排便功能,随着服用时间的延长,改善作用越强;20 d服用后可极显著地提高人体肠道菌群中的益生菌(双歧杆菌和乳杆菌)数量,却极显著地抑制肠道有害菌产气荚膜梭菌数量,可调节人体肠道菌群平衡,腹泻便秘双重调节,促进肠道健康。     

婴儿肠道双歧杆菌种群多样性分析

使用分子生物学方法,对4例出生时间为17～120h婴儿的肠道双歧杆菌种群多样性进行分析。肠道中剖腹产婴儿在出生17h后,双歧杆菌就已定植;另外,婴儿肠道中双歧杆菌群有短双歧杆（Bifidobacterium breve）和长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）,分别占双歧杆菌种群的65％和35％。     

人乳头瘤病毒16型E7密码子优化后的原核表达及免疫原性研究

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因密码子优化后的原核表达系统,通过特异性抗体制备评价E7融合蛋白的免疫原性。方法人工合成优化后的HPV16 E7基因,利用特异引物扩增HPV16 E7基因。将E7基因连接至原核表达载体构建重组表达质粒pMAl-c2X-E7,转化至感受态细胞DE3后,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表达产物E7融合蛋白。纯化后的E7融合蛋白免疫动物,采用ELISA检测动物血清效价。结果 E7基因PCR产物的测序结果与优化后的目的基因序列比对一致。表达的E7融合蛋白经SDS-PAGE分析表明:在相对分子质量50 000处有特异性表达带,与预期相符。以E7融合蛋白制备的多克隆抗体其血清效价可达1∶64 000。结论成功构建的重组表达质粒pMAl-c2X-E7可有效表达MBP-E7融合蛋白,E7融合蛋白具有良好的免疫原性。