一种昆虫过冷却点的简易测定装置

在前人的研究基础上改进了利用热敏电阻测定昆虫过冷却点和体液冰点的装置,经检验其准确度与常用的热电偶法基本相同,但其测定成功率较高,使用方便。本装置先录制热敏电阻值变化的全过程,便于随时调出并准确地读出过冷却点与体液冰点的热敏电阻值;开发了操作方便的昆虫夹,明显缩短了测定时间,提高了测定效率,可用于定期的、连续的昆虫过冷却点与体液冰点的批量测定。     

视网膜水平细胞钙离子信号的调节与功能

钙离子是细胞内功能最为广泛的第二信使之一,在为数众多的细胞内信号通路中发挥作用。对细胞内钙离子分布、调控及功能的研究是我们了解细胞生理的重要途径。本文基于我们实验室对视网膜的研究工作,介绍了视网膜水平细胞中钙离子信号的调控与生理功能。     

1999～2005年我国婴幼儿人杯状病毒腹泻研究

人杯状病毒(HuCV)是世界范围内急性腹泻的重要病原。此文收集我国长春、北京、河北卢龙、兰州、昆明等13个地区1999-2005年5岁以下腹泻患儿检测轮状病毒为阴性的粪便标本4426份,用ELISA和RT-PCR方法检测HuCV,结果表明HuCV检测阳性率为19%(8.3%-38.6%)。对其中151株HuCV PCR产物测序进行核苷酸序列比对构建的系统发生树表明,我国流行的HuCV以诺如病毒(NV)为主(146/151,占96.7%),其中绝大多数为GGⅡ/4基因型(99/146),其它依次为GGⅡ/3(22/146)、GGⅡ/5(8/146)、GGⅡ/6(2/146)、GGⅡ/7(2/146)、GGⅡ/8(2/146)和GGⅠ/2(2/146),札如病毒(SV)共5株,均属SGⅡ。此外有9株NV GGⅡ遗传组毒株,尚不能归入现有基因型,可能为我国特有的新基因型,表明我国流行的HuCV毒株存在很高的遗传多样性。我国婴幼儿HuCV腹泻全年都有发生,但秋冬季(10月-次年1月)有一个发病高峰,病例以6-17月龄组最多,至3岁时超过96%的儿童都感染过HuCV。对我国流行的HuCV不同毒株的地区分布,不同年度HuCV检测阳性率的变化趋势进行了讨论。     

内毒素在大剂量顺铂所致大鼠急性肾损伤过程中的变化及意义

目的利用大剂量顺铂（cisplatin,DDP）所致大鼠急性肾功能衰竭的动物模型,观察外周血内毒素（endotoxin）在大鼠急性肾损伤中的变化及其意义。方法SD大鼠36只,雌雄各半,依体重随机分为DDP用药6h、48h、对照组和生理盐水（NS）用药6h、48h、对照组,每组6只。10mg／kgDDP单次腹腔内注射,等量Ns对照。观察并记录用药后对照组大鼠的毒副反应;用药6、48h各组大鼠无菌条件下心脏穿刺取血、肝素抗凝,检测外周血内毒素含量,同时内眦静脉取血,测定血清尿素氮、肌酐浓度,并进行统计学分析。结果DDP用药后6h,大鼠体重开始明显降低,用药48h后,大鼠腹泻逐渐加重,用药3d后大鼠死亡。DDP用药后6h大鼠血尿素氮、肌酐的含量与对照组比较差异无显著性（P〉0．05）;DDP用药后48h血尿素氮升至（18．71±9．9）mmol／L,明显高于对照组（7．48±0．6）mmol／L（P〈0．05）,同时血肌酐含量亦升至（49．6±14．1）μmol／L,与对照组（27．17±1．7）μmol／L比较差异具有显著性（P〈0．05）。DDP用药后6h所有大鼠外周血内毒素含量都低于0．0218Eu／rrd最低检出限,明显低于NS对照组大鼠（0．3141±0．1477）Eu／ml（P〈0．01）;DDP用药后48h大鼠外周血内毒素的含量增高均超过0．70Eu／ml最高检出限,明显高于NS对照组大鼠（0．1661±0．1198）Eu／ml（P〈0．01）。结论外周血内毒素含量的变化与大剂量顺铂所致大鼠急性肾损伤早期的发病机制无关,但与大鼠肾功能衰竭有关的发生相关。     

牛奶中金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立与应用

目的:建立一种直接从牛奶中检测金黄色葡萄球菌的PCR快速诊断方法.方法:根据已发表的金黄色葡萄球菌16-23SrRNA特异性序列设计并合成一对引物,通过优化反应条件建立从牛奶中直接检测金黄色葡萄球菌的PCR方法.结果:与细菌的常规分离方法相比,PCR法敏感性高,与其它型葡萄球菌无交叉反应,特异性迭100%,检测细菌基因组DNA最低浓度为35ng/μL,能在5h内对送检的牛奶样品直接进行金黄色葡萄球菌的测定,可用于乳制品中金黄色葡萄球菌的检测.结论:成功建立了快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌PCR方法.     

布鲁菌致病特点和疫苗的研究新进展

布鲁菌能够干扰宿主细胞发挥固有和适应性免疫应答,这是布鲁菌突出的致病特点。布鲁菌通过减少、修饰或隐藏病原相关分子模式,经由脂筏进入巨噬细胞后形成布氏小体,实现胞内生存复制,从而导致机体的持续性感染。深入了解布鲁菌逃避机体免疫应答的机制有助于研制新型有效的疫苗,如DNA疫苗、重组蛋白疫苗等。     

人三叶因子1大肠杆菌及毕赤酵母表达载体的构建与鉴定

目的:构建人三叶因子1(hTFF1)的大肠杆菌及毕赤酵母表达载体。方法:从人胃窦部提取总RNA,经RT-PCR得到hTFF1 cDNA,用PCR方法扩增hTFF1基因,并将其分别克隆到大肠杆菌的表达载体pET32α及毕赤酵母的表达载体pCAPZαA中,构建原核及真核重组表达质粒pET32α-hTFF1和pGAPZαA-hTFF1。结果:通过双酶切和基因序列分析确定插入pET32α和pGAPZαA中的片段为hTFF1基因片段。结论:重组质粒pET32α-hTFF1和pGAPZαA-hTFF1成功构建,为在比较原核和真核细胞中hTFF1高效表达的情况及下一步的功能研究奠定了基础。     

黄芩苷通过降低活性氧生成抑制血管平滑肌细胞伪足形成和迁移

已知黄芩苷（baicalin）通过削弱肌动蛋白相关蛋白（actin-related protein, Arp）2/3复合物的活性抑制血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell, VSMC）伪足形成和迁移,然而,其抑制该信号途径的机制尚不明确。本研究证明,黄芩苷通过抑制VSMC活性氧（reactive oxygen species,ROS）生成降低Arp2/3活性,发挥阻止细胞伪足形成和迁移的功能。分别利用TRITC 鬼笔环肽和ROS荧光探针标记VSMCs,结果显示,黄芩苷能显著抑制血小板源性生长因子（platelet derived growth factor, PDGF）-BB诱导的VSMC伪足形成和迁移,伴有ROS生成减少。用超氧物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）清除胞内过氧化物后,PDGF-BB引发的VSMC伪足形成被逆转,且该过程与降低皮层肌动蛋白微丝（F-actin）成核蛋白Arp2/3活性有关。免疫沉淀分析结果进一步表明,黄芩苷降低p47phox磷酸化水平,与ROS生成减少相一致。体内的实验也表明,黄芩苷（70 mg/kg/d）能有效抑制球囊损伤诱导的大鼠颈总动脉ROS生成。以上结果表明,黄芩苷通过抑制NADPH氧化酶介导的ROS生成,降低细胞皮质区F-actin成核活性,阻止细胞伪足形成、迁移,进而发挥血管保护作用。     

As2O3干预口腔鳞癌A431 细胞EGFR 表达的研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对人口腔鳞癌A431细胞生长的抑制作用,探讨其抗肿瘤的机制。方法：合成特异性靶向到肿 瘤细胞表面表皮生长因子受体（EGFR）的近红外荧光分子对比剂EGF-Cy5.5,验证试剂合成的靶向特异性。口腔鳞状细胞癌 A431 细胞系暴露于浓度分别为0 滋M,0.5 滋M,2.5 滋M和5.0 滋M的三氧化二砷溶液中0,24 h,48 h和72 h。共聚焦显微镜、流式 细胞仪及免疫组化证实EGFR的表达水平,上述实验均测量三次,结果取平均值。结果：EGF-Cy5.5 靶向荧光对比剂的标记率为 68%~70 %。对比对照组,越高浓度的三氧化二砷处理的肿瘤细胞其获得的细胞荧光信号强度越小,这与药物浓度越高细胞表面表 达EGFR 的量越少相一致。流式细胞仪显示,在72 小时,作用于细胞的三氧化二砷药物浓度分别为0.5 滋M,2.5 滋M,和5.0 滋M, 其相对应获得的细胞EGFR 表达量分别为57.28± 3.2 %(P<0.05), 29.91± 2.2 %(P<0.01) 和10.73± 2.4 %(P<0.01),明显低于对照 组的细胞EGFR 表达量74.42± 1.8 %,（P <0.05)。结论：本研究应用近红外荧光分子成像的方法体外检测口腔鳞状细胞癌A431 的 EGFR表达水平,实验证明三氧化二砷对其EGFR 具有明显的抑制作用,且抑制作用具有时间- 剂量依赖性。     

一种新香菇病毒基因组部分cDNA序列及病毒RT-PCR检测

本文报道从香菇菌丝体和子实体中分离到一种大小约20nm×(100-200)nm的杆形病毒颗粒,病毒基因组是大小约8.0kb的dsRNA。对病毒基因组部分cDNA序列进行克隆,完成1457bp的核酸序列测定(Accession No:GQ372842),该序列含1个不完整ORF,编码314个氨基酸残基,推测为病毒RNA聚合酶部分序列。病毒基因组部分cDNA序列与GenBank中的已知核酸序列无明显同源性,表明它可能是新发现食用真菌病毒。为了对实验室和野外的香菇病毒进行快速检测,我们根据得到的病毒基因组部分cDNA序列设计特异性引物,建立了一种方便、有效检测香菇病毒的RT-PCR方法,对感染病毒异常菌丝体中的病毒成功地进行了检测。