幽门螺杆菌HspA融合蛋白口服疫苗的构建

构建表达幽门螺杆菌的保护性抗原分热休克蛋白A亚单位(HspA）和霍乱毒素B亚单位（CtxB）的重组融合蛋白的生物工程菌株,以此制备幽门螺杆菌的口服疫苗。用PCR方法扩增hspA和ctxB两个目的的基因片段,将它们分别克隆至pSK（＋）质粒上,然后插入含T7启动子ET－22b（＋）的表达载体中,构建嗓基因的表达质量pET－hct,转化E.coliBL21(DE3）,经IPTG诱导表达融合蛋白HCT。经测序,hspA-ctxB(hct)融合基因片段由726bp组成,可以编码242个氨基酸残基的多肽。经SDS－PAGE和免疫印迹分析检测发现,融合基因表达的蛋白质相对分子质量约为30kD。融合蛋白经镍离子柱纯化、复性后,和HspA共同标记同位素^125I,然后给小鼠灌胃,结果观察到HCT组小鼠血清中的^125I的放射量要明显高于HspA组（P＜0．001）,且吸收峰值时间明显提前。融合蛋白中的CtxB可明显促进小鼠对HspA的吸收,HCT融合蛋白可以作为预防和治疗幽门螺杆菌感染的侯选口服疫苗。     

Effects of nutrient levels in surface water and sediment on the growth of the floating-leaved macrophyte Trapa maximowiczii: implication for management of macrophytes in East Bay of Lake Taihu, China

Trapa maximowiczii is a floating-leaved macrophyte common in China. The plant population in East Bay, Lake Taihu, has been expanding rapidly in recent years. In order to better understand the mechanisms controlling the population dynamics in this species, two outdoor experiments were conducted from 9 May to 8 July 2007, evaluating the effect on the growth of T. maximowiczii of different nutrient levels in water column and sediment. Results showed that high concentration of nutrients (nitrogen and phosphorous) in water led to significant increases in rosette diameter and plant dry weight, dry weight of aquatic roots and anchoring roots, but had no effect on plant height or main stem node count. Phosphorus enrichment resulted in increases in plant dry weight and seed number. However, no such difference was observed between the nitrogen enrichment treatment and the control. Sediment fertility had significant effects on plant growth. Plant height, plant dry weight, dry weight of aquatic and anchoring roots, and maximum rosette diameter were significantly greater in high-nutrient sediment than those in low-nutrient sediment. This study suggests that eutrophication of water (especially increasing phosphorus loading) and accumulated nutrients in sediment may be among the causes leading to increasing biomass of the floating-leaved macrophyte T. maximowiczii in East Bay of Lake Taihu.     

豚草的剪叶实验研究

豚草的剪叶实验研究结果表明:不剪叶的豚草株高可达222.3cm,单次剪叶平均株高为212.1cm,而连续多次剪叶时株高为184.0cm,连续6次全剪叶处理的植株在株高为130cm时死亡。不剪叶的植株结实枝条为14.9条。营养生长早期剪叶及重剪叶明显抑制枝条的形成,而后期剪叶有促进分枝的作用。剪叶对花穗数的影响与对分枝数的影响基本一致。不剪叶植株可产生1873.2粒种子,经剪叶处理后,种子量明显降低。大多数处理的种子减少率在40—70％之间,连续6次全剪叶的种子量减少率达100％。早期剪叶以及剪叶次数愈多,剪叶愈重,对豚草株高、结实枝、花穗数及种子量的抑制作用愈明显。     

花椒总生物碱镇痛、抗炎、止痒作用研究

目的:研究花椒生物碱镇痛、抗炎及止痒作用。方法:分别采用热板法考察其镇痛作用二甲苯致炎法考察其抗炎作用、低分子右旋糖酐-40诱发小鼠皮肤瘙痒研究其止痒作用。结果:中、高浓度的花椒生物碱对小鼠热刺激引起的疼痛具有较强的镇痛作用;高浓度的花椒生物碱能较强抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀,并能缓解分子右旋糖酐-40诱发的小鼠皮肤瘙痒。具有较强的抗炎、止痒作用。结论:花椒生物碱具有较强的镇痛、抗炎、止痒作用。     

丙型肝炎病毒依赖于RNA的RNA聚合酶基因克隆与原核表达

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）依赖于ＲＮＡ的ＲＮＡ聚合酶（ＲｄＲｐ）是参与病毒基因组ＲＮＡ复制的一个关键蛋白因子,是研究抗ＨＣＶ新型药物的重要靶标,获得纯化的ＲｄＲｐ产物是建立靶向ＲｄＲｐ药物高通量筛选体系和抗病毒药物研究的关键步骤。以ＨＣＶ病毒基因组全长ｃＤＮＡ质粒（ｐ９０／ＨＣＶ ＦＬ－ｌｏｎｇ ｐＵ）为模板,设计了特异性扩增ＲｄＲｐ的引物,通过ＣＰＲ扩增获得编码ＲｄＲｐ的基因。将该基因克隆到Ｔ载体中     

两种测试方法对DPPH分光光度法测试结果的影响

目的:比较固定反应时间法和动力学监测法的准确性。方法:用固定反应时间法和动力学监测法分别测定维生素C(Vc)、二丁基羟基甲苯(BHT)对二苯代苦味酰自由基(DPPH)的清除作用,通过F检验和t检验来揭示两种方法的差异。结果:通过动力学监测法得到的测试结果更能准确的反映测试样品对DPPH自由基的清除能力。结论:建议在用DPPH分光光度法过程中使用动力学监测法。     

生物转化生产D-塔格糖的食品级菌种选育及L-阿拉伯糖异构酶的克隆表达

L-阿拉伯糖异构酶(L-arabinose isomerase,L-AI)是一种可以催化D-半乳糖为D-塔格糖的胞内异构化酶。随着塔格糖在食品工业中越来越广泛的应用,能够将半乳糖转化为塔格糖的食品级微生物以及食品级来源的L-AI受到更大的关注。文中从各种酸奶制品、泡菜及其他一些食品中采集不同的样品,筛选出1株具有L-AI酶活的食品级菌株,经过生理生化鉴定以及16S rDNA序列测定,确定该菌株为戊糖片球菌,命名为Pediococcus pentosaceus PC-5。以该菌基因组为模板,克隆L-AI基因,并在大肠杆菌BL21成功地异源表达。表达产物经粗提取后,在40℃下加入Mn2+,使D-半乳糖转化为D-塔格糖的转化率为33%。     

一株解磷细菌的筛选、鉴定及其溶磷培养条件的优化

从土壤作物根际筛选分离出的一株解磷能力较强的溶磷菌P0417,对其进行16S r DNA基因水平上的初步鉴定,测定其溶解磷的能力,并对该菌的溶磷培养基条件进行优化。结果表明,经序列分析,确定该菌株P0417为洋葱伯克霍尔德氏菌。且其溶磷能力与培养液p H呈显著相关性,当培养基条件为葡萄糖10 g/L、草酸铵0.5 g/L、Na Cl 1.0 g/L时,菌株P0417对Ca3(PO4)2盐培养基具有较好的解磷能力,其解磷能力可达791.84μg/m L。     

人脐血间充质干细胞分离培养方法的优化

目的探讨人脐血间充质干细胞（MSCs）体外培养纯化的最佳方法,为脐血MSCs在临床的广泛应用奠定基础。方法无菌条件下采集足月分娩和早产儿脐血,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,比较胎龄、不同培养基、接种密度、首次换液时间对脐血MSCs原代培养过程的影响,通过免疫荧光方法检测表面标记物的表达情况,观察脐血MSCs的生物学特性。结果足月分娩脐血,采用MesencultTM培养基,以5×106/cm2的密度接种,首次换液时间为7d时,脐血MSCs原代培养成功率较高。相同培养条件下,早产儿脐血培养成功率高于足月分娩脐血。人脐血MSCs强表达CD29、CD44和CD90,不表达造血干细胞表面标志CD34。结论优化筛选到一种合适的人脐血MSCs培养纯化条件。     

高强度酒精连续发酵

从多株酒精酵母菌株中筛选出S.cerevisiaeKG作为酒精生产菌株。该菌株具有较好的酒精发酵活力和絮凝性。使用具有细胞循环的连续发酵双罐系统,酒精生产强度达到30.5（g／1.h）。根据该系统的动力学模型,讨论了获得高强度酒精连续发酵的途径。