水稻细胞质1，6—二磷酸果糖酶基因1195bp的上游调控序列的克隆及其在转基因水稻中的表达研究

1,6－二磷酸果糖酶（EC3．13．11）催化1,6－二磷酸果糖分解为6－磷酸葡萄糖和无机磷酸。在高等植物的光合作用细胞中,存在两种1,6－二磷酸果糖酶：即叶绿体型1,6－二磷酸果糖酶和细胞质型1,6－二磷酸果糖酶。由于细胞质型1,6－二磷酸果糖酶在植物碳水化合物代谢中起重要作用,且具有表达特异性,本试验通过Genome Walking分离了水解细胞质型1,6－二磷酸果糖酶基因的上游序列,并将其与β－葡糖醛酸酶（GUS）报告基因建成嵌合表达载体。采用基因枪法转化水稻,在转基因水稻中分析了GUS的表达活性和特异性。组织化学检测表明,在转基因水稻的成熟叶片中,GUS基因只在叶肉细胞中表达,在表皮细胞,泡状细胞,维管组织中均无表达,在叶鞘中的表达与叶片中相似,仅仅在叶肉细胞中表达,在根,茎所有细胞中均没有蓝色反应,为进一步研究1,6－二磷酸果糖酶基因启动子在水稻中的表达量,对12株独立来源的转基因水稻的GUS活性进行了荧光定量分析。结果显示,水稻成熟叶片中的GUS活性平均值为7031．5pmol4-MU^-1.min^-1.mg蛋白。在不同器官及组织中表达活性有差异,在转基因水稻的叶片,叶鞘中GUS均有较强的表达,在根、茎中未检测到GUS活性,实验结果表明,ATG上游1195bp调控区足以导致GUS基因在水稻中的特异性表达,因此该片段包含有使报告基因在叶肉细胞中特异性表达的所有顺式调控元件。     

葡萄球菌肠毒素A全长基因的克隆和序列测定

分析和克隆超抗原（SAg）葡萄球菌肠毒素A（SEA）全长基因,为进行SAg基因应用于肿瘤导向治疗和基因治疗的研究奠定基础。设计并合成一对针对SEA全长基因的特异性引物,用PCR反应从产SEA的标准葡萄球菌菌株的基因组中扩增出SEA全长基因。PCR产物与克隆载体pGEM-T连接后进行基因序列测定。成功地从标准葡萄球菌菌株的基因组中扩增出一条约770bp的条带。基因序列测定表明,与巳发表的SEA全长基国序列完全一致。     

HPV16L1核浆运输的动力学过程

利用增强型绿色荧光蛋白(Enhancegreenflurenscentprotein,EGFP)标记不同的截短型HPV16L1蛋白(Humanpapillomavirustype16L1protein,HPV16L1),分析HPV16L1蛋白核定位信号(Nucleuslocationsignal,NLS)的作用。构建重组pFB-EGFP、pFB-EGFP-HPV16L1、pFB-EGFP-HPV16L1△NLS和pFB-EGFP-NLSHPV16L1p转移载体;在DH10Bac宿主菌内经Tn7转座子介导的同源重组后转染Sf-9细胞,获得重组Ac-EGFP、Ac-EGFP-HPV16L1、Ac-EGFP-HPV16L1△NLS和Ac-EGFP-NLSHPV16L1杆状病毒,感染Sf-9昆虫细胞表达相应截短型HPV16L1融合蛋白;利用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察不同融合蛋白的荧光特性和核浆转运动力学过程。结果发现Ac-EGFP杆状病毒感染的Sf-9细胞内明亮的绿色荧光均匀分布;重组Ac-EGFP-HPV16L1和Ac-EGFP-NLSHPV16L1杆状病毒感染的Sf-9细胞,明亮的绿色荧光主要位于细胞核内;重组Ac-EGFP-HPV16L1△NLS杆状病毒感染的Sf-9细胞,绿色荧光局限于细胞浆内,细胞核内无绿色荧光。说明HPV16L1蛋白羧基端的23个氨基酸(GKRKATPTTSSTSTTAKRKKRKL)具有完全核定位作用,能引导HPV16L1蛋白和EGFP突破核膜屏障进入Sf-9细胞核内。     

Convergent actions of I kappa B kinase beta and protein kinase C delta modulate mRNA stability through phosphorylation of 14-3-3 beta complexed with tristetraprolin

Regulation of gene expression at the level of mRNA stability is a major topic of research; however, knowledge about the regulatory mechanisms affecting the binding and function of AU-rich element (ARE)-binding proteins (AUBPs) in response to extracellular signals is minimal. The beta1,4-galactosyltransferase 1 (beta4GalT1) gene enabled us to study the mechanisms involved in binding of tristetraprolin (TTP) as the stability of its mRNA is regulated solely through one ARE bound by TTP in resting human umbilical vein endothelial cells. Here, we provide evidence that the complex formation of TTP with 14-3-3beta is required to bind beta4GalT1 mRNA and promote its decay. Furthermore, upon tumor necrosis factor alpha stimulation, the activation of both Ikappabeta kinase and protein kinase Cdelta is involved in the phosphorylation of 14-3-3beta on two serine residues, paralleled by release of binding of TTP and 14-3-3beta from beta4GalT1 mRNA, nuclear sequestration of TTP, and beta4GalT1 mRNA stabilization. Thus, a key mechanism regulating mRNA binding and function of the destabilizing AUBP TTP involves the phosphorylation status of 14-3-3beta.     

窄带成像内镜、染色内镜及常规内镜模式诊断结直肠增生性病变的应用价值比较研究

目的:探讨窄带成像内镜(NBI)、染色内镜及常规内镜模式鉴别诊断非肿瘤性、肿瘤性结直肠增生性病变的应用价值。方法:选择2017年2月至2019年3月西安市中心医院消化科收治的结直肠增生性病变患者,均行NBI、染色内镜、常规内镜检查。比较三种模式图像清晰度以及鉴别诊断非肿瘤性、肿瘤性结直肠增生性病变的效能。结果:NBI、染色内镜模式图像质量评分分布优于常规内镜(P<0.05),NBI图像质量评分分布优于染色内镜模式(P<0.05)。以病理结果为准,常规内镜结直肠增生性病变检出率73.13%,NBI 91.04%,染色内镜96.26%,NBI、染色内镜结直肠增生性病变检出率高于常规内镜(P<0.05),NBI、染色内镜比较无统计学差异(P>0.05)。NBI模式下检测NBI分型与病理组织学结果一致性较好(kappa值=0.801,P<0.05)。NBI、染色内镜诊断肿瘤性结直肠增生性病变的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度均明显高于常规内镜,染色内镜、NBI、常规内镜诊断肿瘤性结直肠增生性病变的曲线下面积(AUC)分别为0.844(95%CI:0.812~0.956)、0.921(95%CI:0.860~0.982)、0.750(95%CI:0.651~0.848)。结论:NBI、染色内镜在鉴别非肿瘤性和肿瘤性结直肠增生性病变方面效能相似,均优于常规内镜,NBI分型与病理组织学结果一致性高,更适合结直肠增生性病变的鉴别诊断。     

非洲爪蟾胚胎细胞核移入花背蟾蜍成熟卵后的细胞学研究

This paper reports the development of the nuclear transplanted eggs obtained by transplanting Xenopus laevis blastomere nuclei to Bufo raddei. The formation of the donor nuclei is similar to that of the male pronuclei in the normal development egg in the early stage while shows degradation in the late stage after transplanting. The chromosome complement formes in some eggs 30 minutes after transplantation, which is assumed to contribute to the development of the transplanted eggs [Acta Zoologica Sinica 51 （5） ： 924 - 931, 2005].     

用EP-9方案对两台尿液干化学分析仪进行比对及评价

目的:探讨用EP-9方案对尿干化学分析仪进行比对的可行性.方法:以不久前刚进行过定标和校准,参加江苏省临检中心室间质评获得优秀成绩、平日工作状态良好,日常工作精密度高的H-300仪器作为实验仪器,另一台仪器与其比对.采用EP-9方案的方法,连续5天,每日随机选取8份阳性新鲜尿样本,共40个标本,分别双次测试,进行统计学分析.同时对5日阳性室内质控结果功例进行符合率统计.结果:质控结果符合率为100％.仪器比对结果均符合一致性要求.结论:实验仪器与比对仪器间的结果高度一致,EP-9方案方法可适用于尿液干化学仪器的比对.     

Revision of the Eastern Asian genera Ambrostoma Motschulsky and Parambrostoma Chen (Coleoptera: Chrysomelidae: Chrysomelinae)

The leaf beetle genera Ambrostoma Motschulsky, 1860 and Parambrostoma Chen, 1934 have been revised and now include 14 species. Two new species from Nepal are described, Parambrostoma kippenbergi sp.n. and P. medvedevi sp.n. Three new synonymies are established: Ambrostoma rugosopunctatum Chen = Ambrostoma (Parambrostoma) laosensis Kimoto & Gressitt, syn.n. , Ambrostoma rugosopunctatum Chen = Ambrostoma daccordii Medvedev, syn.n., Ambrostoma fortunei (Baly) = Ambrostoma quadriimpressum chusanica Gruev, syn.n . One species was transferred from Chrysomela Linnaeus to Ambrostoma Motschulsky: A. superbum (Thunberg), comb.n . All the species now included are described and illustrated. Microcomputer tomography was applied for the first time in a study on chrysomelid beetles. A cladistic analysis based on morphological characters of adults was conducted to reconstruct the intergeneric and interspecific phylogeny of Ambrostoma and Parambrostoma. The results show that the monophyly of both genera is well supported. Ambrostoma is widespread in East Asia, whereas Parambrostoma is restricted to the southern slope of the Himalayas, where a relatively recent and modest speciation took place.     

桑螵蛸挥发油的提取及对MRSA体外抑菌效应的初步研究

目的研究桑螵蛸挥发油提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抑菌效应。方法采用索氏提取法提取桑螵蛸中挥发油成分,在鉴定耐药基因基础上,再采用纸片扩散法(K-B法)、试管稀释法(MIC法)、吸光度值测定法来观察桑螵蛸挥发油提取物对MRSA的体外抑菌效应。结果桑螵蛸挥发油提取物对MRSA的生长表现出抑制效应。结论桑螵蛸挥发油提取物对MRSA具有一定的抑菌效应,为下一步研究其详细有效成分及开发提供数据和理论依据。     

用扫描仪及Image J软件精确测量叶片形态数量特征的方法

传统的纸样称重法用来测量离体叶片的面积,烦琐、耗时、精度不高。为寻求一种适合的方法,我们对离体叶片采用扫描仪获取叶片的数字图像,利用Image J软件测量叶片的长、宽、周长、面积及叶柄的长,并与传统的纸样称重测定叶面积法进行比较。结果表明,此方法具有低成本、快速、精确等特点,适用于植物形态学、植物生理生态学、林学及农业等对叶片形态特征的测量研究工作。