Releases of Norepinephrine and Dopamine in Ventriculocisternal Perfusions in Hepatectomized and Laparotomized Rats

Abstract: The completely hepatectomized rat has frequently been used as a model to study changes in the economy of norepinephrine (NE) and dopamine (DA) in hepatic coma. Hypothermia characteristically develops in hepatectomized rats and also occurs in patients in hepatic coma and is associated with improved survival in both. The aims of the present study were to measure both release and uptake of NE and release of DA in brain in warm (37°C) and cool (30–32°C) rats at 3–5 h after laparotomy or hepatectomy. Ventriculocisternal perfusions of the brain were performed on rats under basal conditions and during releases evoked by 40 m M K⁺. Basal releases of NE and DA and evoked release of DA were greater in the warm hepatectomized rats than in all other groups. In some studies, 10⁻⁵ M amitriptyline was added to the perfusates to assess whether neuronal uptake was changed after hepatectomy. Uptake of released NE was equally robust in cool hepatectomized as in cool laparotomized rats but could not be measured in warm hepatectomized rats because of amitriptyline toxicity in these rats. Decreases in NE and increases in DA content were found in most areas of the brain after perfusion. Increased releases of NE and DA may contribute to the pathogenesis of hepatic encephalopathy.     

Über Schollen- und Kristallaggregatbildung im extraplasmatischen Raum vitalgefärbter Zellen

Ohne Zusammenfassung     

Best practices in cell culture: an overview

This overview describes a series of articles to provide an unmet need for information on best practices in animal cell culture. The target audience primarily consists of entry-level scientists with minimal experience in cell culture. It also include scientists, journalists, and educators with some experience in cell culture, but in need of a refresher in best practices. The articles will be published in this journal over a six-month period and will emphasize best practices in: (1) media selection; (2) use and evaluation of animal serum as a component of cell culture medium; (3) receipt of new cells into the laboratory; (4) naming cell lines; (5) authenticating cell line identity; (6) detecting and mitigating risk of cell culture contamination; (7) cryopreservation and thawing of cells; and (8) storing and shipping viable cells.     

Myelin basic protein-dependent plasma membrane reorganization in the formation of myelin

During vertebrate development, oligodendrocytes wrap their plasma membrane around axons to produce myelin, a specialized membrane highly enriched in galactosylceramide (GalC) and cholesterol. Here, we studied the formation of myelin membrane sheets in a neuron-glia co-culture system. We applied different microscopy techniques to visualize lipid packing and dynamics in the oligodendroglial plasma membrane. We used the fluorescent dye Laurdan to examine the lipid order with two-photon microscopy and observed that neurons induce a dramatic lipid condensation of the oligodendroglial membrane. On a nanoscale resolution, using stimulated emission depletion and fluorescence resonance energy transfer microscopy, we demonstrated a neuronal-dependent clustering of GalC in oligodendrocytes. Most importantly these changes in lipid organization of the oligodendroglial plasma membrane were not observed in shiverer mice that do not express the myelin basic protein. Our data demonstrate that neurons induce the condensation of the myelin-forming bilayer in oligodendrocytes and that MBP is involved in this process of plasma membrane rearrangement. We propose that this mechanism is essential for myelin to perform its insulating function during nerve conduction.     

Removal of pattern-breaking sequences in microtubule binding repeats produces instantaneous tau aggregation and toxicity

Aggregated and highly phosphorylated tau protein is a pathological hallmark of Alzheimer's disease (AD) and other tauopathies. We identified motifs of alternating polar and apolar amino acids within the microtubule-binding repeats of tau which were interrupted by small breaking stretches. Minimal mutation of these breaking sequences yielded a unique instantly aggregating tau mutant containing longer stretches of polar/apolar amino acids without losing its microtubule-binding capacity. These modifications produced rapid aggregation and cytotoxicity with accompanying occurrence of pathologic tau phosphoepitopes (AT8, AT180, AT270, AT100, Ser(422), and PHF-1) and conformational epitopes (MC-1 and Alz50) in cells. Similar to pathological tau in the pretangle state, toxicity appeared to occur early without the requirement for extensive fibril formation. Thus, our mutant protein provides a novel platform for the investigation of the molecular mechanisms for toxicity and cellular behavior of pathologically aggregated tau proteins and the identification of its interaction partners.     

Effect of hormones on growth rates of malignant and nonmalignant human mammary epithelia in cell culture

Summary The individual effects of seven hormones on the in vitro growth rate of different classifications of human mammary epithelium were compared. Hormones used were: 17β-estradiol, estriol, progesterone, hydrocortisone, testosterone, prolactin, and growth hormone. Cell cultures included three established breast cell lines and primary monolayer cultures established form breast fluids and excised mammary tissue from 40 women and 4 men. Specimens comprised three classifications: normal, nonmalignant atypical, and malignant. Growth was quantitated in situ and expressed as population doubling time. Principal findings were: (a) estrogens, prolactin, and growth hormone stimulated growth of normal cells more frequently than growth of malignant cells, whereas testosterone and hydrocortisone stimulated growth of malignant cells more frequently than growth of normal cells; (b) cells cultured from nonmalignant atypias generally showed hormone response profiles intermediate between those of normal and malignant cells; (c) progesterone stimulated the growth of cells from malignant specimens but not the growth of cells from normal and nonmalignant atypical samples. This research was supported by NIAID Research Training Grant 5-TO1-A1-00332-06.     

Biochemical analysis of related,independently arising histocompatibility mutants: bm17 and KB-98 enlarge the “bg series” of H-2Kb mutants

The “bg” series of MHC mutations is the most prevalent type of mutations of K^b in C57BL/6 mice screened by reciprocal tail skin grafting. The basis for identification of this series of mutations is the incompatibility of grafts between the parental B6 and the mutant. This series takes the longest to reciprocally reject the skin grafts. The series can be subdivided into “bg 1” and “bg 2” groups based on K^b-restricted recognition of virus-infected mutant target cells. The biochemical basis for these mutations are amino acid substitutions at residues 116 and 121 of the K^b transplantation antigen. These substitutions do not alter monoclonal antibody binding sites. The structural basis of MAb binding and the genetic basis of the mutation are discussed. This study was supported in part by USPHS Grants AI-07289, AI-10702, NCI P30-CA-13330, American Cancer Society Grant IM-236, and American Cancer Society Fellowship PF-2126. Stanley G. Nathenson is a member of the Irvington House Institute for Medical Research.     

Vergleichende karyologische untersuchungen an antipoden

Zusammenfassung Es wurden je 3 Vertreter der Ranunculaceen, Papaveraceen und Kompositen in Hinblick auf ihren Antipodialapparat genau untersucht, wobei der Kernstruktur spezielles Augenmerk galt.Die Kerne in den Antipoden von Eranthis hiemalis, Helleborus niger, Corydalis cava, Corydalis nobilis, Dicentra spectabilis, Kleinia ficoides und Othonna crassifolia machen — nach Fertigstellung des haploiden Embroysackes — eine Periode des endomitotischen Wachstums durch. Die Antipoden von Anemone hepatica werden infolge von Restitutionskernbildung polyploid, bei Eupatorium glabratum bleiben die an Zahl vermehrten Kerne haploid. Durch — zum Teil nur stichprobenartige — Kernvolumenbestimmungen läßt sich für Eranthis 64-Ploidie, für Helleborus Oktoploidie, für Kleinia 64-Ploidie, für Othonna 16-Ploidie und für Anemone 32-Ploidie der Kerne in den Antipoden feststellen, wobei eine Antipodenzelle bei Eranthis stets zwei, bei den übrigen Arten nur einen endopolyploiden Kern enthält; bei Anemone ist die aus dem Volumen der Teilkerne errechnete Gesamtpolyploidie angegeben.Neben einer mit dem Bau endopolyploider Kerne aus anderen Geweben übereinstimmenden annähernd homogenen, chromatischen Struktur findet sich in der Mehrzahl der endopolyploiden Kerne von Eranthis und Helleborus noch eine weitere, die ebenfalls einen Ruhekernzustand verkörpert: die Chromosomen sind mehr minder spiralisiert und zu lockeren Bündeln vereinigt; diese können bei Eranthis deutliche Reliktspiralen bilden oder aber auch mehr gestreckt sein und lassen dann an einzelnen solchen Stellen einen Querscheibenbau nach dem Muster der Riesenchromosomen der Dipteren erkennen.Bei Corydalis cava finden sich — entsprechend der haploiden Chromosomenzahl — acht, meist lockere, heterochromatische Endochromozentren, von denen das Euchromatin in deutlich fädiger Form ausstrahlt, wobei stets 2 Fäden eine Lagebeziehung aufweisen. — Bei Corydalis nobilis sind im weitaus häufigsten Fall acht (n=8) abgegrenzte Bündel aus endomitotisch entstandenen Tochterchromosomen vorhanden. Selten findet sich ein anderer Bautypus: von einem Zentrum aus sehr locker gebautem Heterochromatin strahlen merklich spiralisierte Tochterchromosomen radiär aus.Bei Dicentra sind in den endopolyploiden Kernen ausschließlich acht (n=8) deutlich abgegrenzte, riesenchromosomen-ähnliche Bündel aus Tochterchromosomen mit proximalem Heterochromatin aufzufinden.An Hand der Strukturanalyse an Kernen von verschiedenem Typus wird auf die Zusammenhänge zwischen Spiralisierung und Hervortreten des Heterochromatins verwiesen: je deutlicher die Chromosomen spiralisiert sind, desto weniger eng ist der Zusammenhalt der endomitotisch entstandenen Tochterchromosomen. In Kernen mit deutlich spiralisierten Chromosomen tritt das Heterochromatin weniger hervor als in solchen mit undeutlich (wahrscheinlich eng) spiralisierten Chromosomen.Der für die Endomitose charakteristische Strukturwechsel konnte in einzelnen Kernen bei Eranthis, Helleborus und Corydalis cava aufgefunden werden.Regelmäßiges Auftreten von Restitutionskernbildung wird für die Antipoden von Anemone hepatica und A. pulsatilla festgestellt. Brückenbildungen, Spindelverschmelzungen und Vereinigung zwischen Telophasegruppen verschiedener Teilungsfiguren führen anfangs zu einer Reihe serial liegender, untereinander verbundener Teilkerne, sowie zur Bildung zweier größerer Teilkerne oder eines mittleren, größeren, der von kleineren flankiert ist; später kommen häufig unförmige, aus verschieden großen Teilstücken zusammengesetzte Kerne zustande. Volumenbestimmungen an den Teilkernen ergeben, daß das Volumen meist ein Vielfaches des haploiden Wertes beträgt, so daß man annehmen muß, daß die Aufteilung der Chromosomensätze einigermaßen regelmäßig erfolgt.Bei Kleinia ficoides (stichprobenartig wurde auch Kl. spinulosa und glaucophylla untersucht) und bei Othonna crassifolia treten im Laufe des endomitotischen Wachstums in den Ruhekernen keine bemerkenswerten Strukturen auf. Bei Kleinia ficoides wird meist die ursprüngliche Anzahl von drei hintereinanderliegenden Antipoden bis zu acht vermehrt. Es wurde eine spontane oktoploide Mitose aufgefunden.Für Kleinia ficoides wird als diploide Chromosomenzahl 2n 100 angegeben.Bei Eupatorium glabratum wird im haploiden Embryosack stets eine chalazale, einkernige und darüber eine zweikernige Antipodenzelle abgegrenzt. Endomitotische Polyploidisierung fehlt, doch wird die chalazale Antipode gewöhnlich zweikernig, die darüberliegende vier(selten acht)kernig.Zwischen Restitutionskernbildung und Endopolyploidie in den Kernen der Antipoden und der systematischen Gliederung der Ranunculaceen ergeben sich keine systematischen Beziehungen.