CD19 CAR-Targeted T Cells Induce Long-Term Remission and B Cell Aplasia in an Immunocompetent Mouse Model of B Cell Acute Lymphoblastic Leukemia

Although many adults with B cell acute lymphoblastic leukemia (B-ALL) are induced into remission, most will relapse, underscoring the dire need for novel therapies for this disease. We developed murine CD19-specific chimeric antigen receptors (CARs) and an immunocompetent mouse model of B-ALL that recapitulates the disease at genetic, cellular, and pathologic levels. Mouse T cells transduced with an all-murine CD3ζ/CD28-based CAR that is equivalent to the one being used in our clinical trials, eradicate B-ALL in mice and mediate long-term B cell aplasias. In this model, we find that increasing conditioning chemotherapy increases tumor eradication, B cell aplasia, and CAR-modified T cell persistence. Quantification of recipient B lineage cells allowed us to estimate an in vivo effector to endogenous target ratio for B cell aplasia maintenance. In mice exhibiting a dramatic B cell reduction we identified a small population of progenitor B cells in the bone marrow that may serve as a reservoir for long-term CAR-modified T cell stimulation. Lastly, we determine that infusion of CD8+ CAR-modified T cells alone is sufficient to maintain long-term B cell eradication. The mouse model we report here should prove valuable for investigating CAR-based and other therapies for adult B-ALL.     

Continental scale patterns in mangrove litter fall

Litter fall was monitored in stands of the mangrove species Rhizophora stylosa Griff., Ceriops tagal (Perr.) C. B. Robinson and Avicennia marina (Forsk.), Vierh. at approximately monthly intervals over a single annual cycle at selected locations around the coastline of Australia and throughout the distribution of each species. Concurrent data were obtained from a single location near Port Moresby in Papua New Guinea. The materials recovered in sub-canopy catchers were sorted into major categories and dried and weighed as leaves, petiolar stipules, twigs and other woody tissues, reproductive parts (flowers, flower buds, fruit and propagules) and residual detritus. This paper considers the principal findings of the study among which it may be reported that the highest total annual litter recoveries at individual catchers were 1598 g dry wt m^–2 for A. marina, 2369 g dry wt m^–2 for R. stylosa and 1290 g dry wt m^–2 for C. tagal. Significant regional differences in litter fall emerged when data from major climatic zones were compared. The outcome of this analysis is detailed in the body of the paper.     

Vergleichende Untersuchungen an haploiden und durch Colchicineinwirkung diploid gewordenen Stämmen vonOedogonium cardiacum

Zusammenfassung Durch die Behandlung gut teilungsfähiger Fäden vonOedogonium cardiacum mit einer 1%igen Colchicinlösung während 36 Stunden läßt sich Polyploidie auslösen.Die Bestimmung des Zuwachses von je 65 fünfzelligen haploiden und diploiden Keimlingen nach 1, 2 und 3 Wochen ergibt für haploide und diploide Zellen eine weitgehend übereinstimmende Vermehrungsrate.Die haploiden Keimlinge reagieren auf eine leichte Veränderung der Außenbedingungen im Zuge der Überimpfung mit einer höheren Absterberate als die diploiden (31 gegenüber 9).Die Bestimmung der Zellzahl von 500 beliebigen Keimlingen aus Massenkulturen in Abständen von 10, 20 und 30 Tagen nach dem Überimpfen ergibt nach den ersten beiden Zeiträumen eine höhere Zahl für die haploiden, nach 30 Tagen aber eine merkbar höhere für die diploiden Keimlinge. Dabei ist nach 10 und 20 Tagen der Anteil Einzelliger bei den diploiden Keimlingen viel höher als bei den haploiden; ob dies auf verzögerter oder wiederholter Schwärmerbildung beruht oder an einem Keimverzug liegt, ist fraglich. Jedenfalls wird das anfängliche Nachhinken der diploiden Keimlinge nach 20–30 Tagen völlig ausgeglichen.Im Konkurrenzversuch erweist sich unter den gegebenen Kulturbedingungen die diploide der haploiden Sippe hinsichtlich der Vermehrungsrate überlegen; denn bei Beimpfung der Kulturgefäße mit je zehn haploiden und zehn diploiden 40zelligen Fäden (vier Parallelversuche) finden sich in 35 Tage nachher entnommenen Proben ungefähr 2/3 diploide und 1/3 haploide Zellen.Die Mittelwerte des Zellvolumens von haploiden und diploiden Keimlingen verhalten sich wie 14,6, die des Kernvolumens wie 14,0.Die Anzahl der Pyrenoide ist bei den diploiden Zellen erhöht (100 haploide Zellen enthielten 306, 100 diploide 584 Pyrenoide), das einzelne Pyrenoid ist etwas vergrößert.Hinsichtlich der Breite der Chromatophorenlamellen ergeben sich zwischen haploiden und diploiden Zellen keine wesentlichen Unterschiede.Die Chromosomenzahl vonOedogonium cardiacum beträgt n=19. Im haploiden Satz liegen drei verschiedene, charakteristisch gestaltete SAT-Chromosomen vor.Mit Hilfe der Colchicin-Behandlung lassen sich auch tetraploide Zellen und kurze Fadenstücke erzielen, doch zeigt sich bei diesen eine verminderte Vitalität.     

Vergleichende karyologische untersuchungen an antipoden

Zusammenfassung Es wurden je 3 Vertreter der Ranunculaceen, Papaveraceen und Kompositen in Hinblick auf ihren Antipodialapparat genau untersucht, wobei der Kernstruktur spezielles Augenmerk galt.Die Kerne in den Antipoden von Eranthis hiemalis, Helleborus niger, Corydalis cava, Corydalis nobilis, Dicentra spectabilis, Kleinia ficoides und Othonna crassifolia machen — nach Fertigstellung des haploiden Embroysackes — eine Periode des endomitotischen Wachstums durch. Die Antipoden von Anemone hepatica werden infolge von Restitutionskernbildung polyploid, bei Eupatorium glabratum bleiben die an Zahl vermehrten Kerne haploid. Durch — zum Teil nur stichprobenartige — Kernvolumenbestimmungen läßt sich für Eranthis 64-Ploidie, für Helleborus Oktoploidie, für Kleinia 64-Ploidie, für Othonna 16-Ploidie und für Anemone 32-Ploidie der Kerne in den Antipoden feststellen, wobei eine Antipodenzelle bei Eranthis stets zwei, bei den übrigen Arten nur einen endopolyploiden Kern enthält; bei Anemone ist die aus dem Volumen der Teilkerne errechnete Gesamtpolyploidie angegeben.Neben einer mit dem Bau endopolyploider Kerne aus anderen Geweben übereinstimmenden annähernd homogenen, chromatischen Struktur findet sich in der Mehrzahl der endopolyploiden Kerne von Eranthis und Helleborus noch eine weitere, die ebenfalls einen Ruhekernzustand verkörpert: die Chromosomen sind mehr minder spiralisiert und zu lockeren Bündeln vereinigt; diese können bei Eranthis deutliche Reliktspiralen bilden oder aber auch mehr gestreckt sein und lassen dann an einzelnen solchen Stellen einen Querscheibenbau nach dem Muster der Riesenchromosomen der Dipteren erkennen.Bei Corydalis cava finden sich — entsprechend der haploiden Chromosomenzahl — acht, meist lockere, heterochromatische Endochromozentren, von denen das Euchromatin in deutlich fädiger Form ausstrahlt, wobei stets 2 Fäden eine Lagebeziehung aufweisen. — Bei Corydalis nobilis sind im weitaus häufigsten Fall acht (n=8) abgegrenzte Bündel aus endomitotisch entstandenen Tochterchromosomen vorhanden. Selten findet sich ein anderer Bautypus: von einem Zentrum aus sehr locker gebautem Heterochromatin strahlen merklich spiralisierte Tochterchromosomen radiär aus.Bei Dicentra sind in den endopolyploiden Kernen ausschließlich acht (n=8) deutlich abgegrenzte, riesenchromosomen-ähnliche Bündel aus Tochterchromosomen mit proximalem Heterochromatin aufzufinden.An Hand der Strukturanalyse an Kernen von verschiedenem Typus wird auf die Zusammenhänge zwischen Spiralisierung und Hervortreten des Heterochromatins verwiesen: je deutlicher die Chromosomen spiralisiert sind, desto weniger eng ist der Zusammenhalt der endomitotisch entstandenen Tochterchromosomen. In Kernen mit deutlich spiralisierten Chromosomen tritt das Heterochromatin weniger hervor als in solchen mit undeutlich (wahrscheinlich eng) spiralisierten Chromosomen.Der für die Endomitose charakteristische Strukturwechsel konnte in einzelnen Kernen bei Eranthis, Helleborus und Corydalis cava aufgefunden werden.Regelmäßiges Auftreten von Restitutionskernbildung wird für die Antipoden von Anemone hepatica und A. pulsatilla festgestellt. Brückenbildungen, Spindelverschmelzungen und Vereinigung zwischen Telophasegruppen verschiedener Teilungsfiguren führen anfangs zu einer Reihe serial liegender, untereinander verbundener Teilkerne, sowie zur Bildung zweier größerer Teilkerne oder eines mittleren, größeren, der von kleineren flankiert ist; später kommen häufig unförmige, aus verschieden großen Teilstücken zusammengesetzte Kerne zustande. Volumenbestimmungen an den Teilkernen ergeben, daß das Volumen meist ein Vielfaches des haploiden Wertes beträgt, so daß man annehmen muß, daß die Aufteilung der Chromosomensätze einigermaßen regelmäßig erfolgt.Bei Kleinia ficoides (stichprobenartig wurde auch Kl. spinulosa und glaucophylla untersucht) und bei Othonna crassifolia treten im Laufe des endomitotischen Wachstums in den Ruhekernen keine bemerkenswerten Strukturen auf. Bei Kleinia ficoides wird meist die ursprüngliche Anzahl von drei hintereinanderliegenden Antipoden bis zu acht vermehrt. Es wurde eine spontane oktoploide Mitose aufgefunden.Für Kleinia ficoides wird als diploide Chromosomenzahl 2n 100 angegeben.Bei Eupatorium glabratum wird im haploiden Embryosack stets eine chalazale, einkernige und darüber eine zweikernige Antipodenzelle abgegrenzt. Endomitotische Polyploidisierung fehlt, doch wird die chalazale Antipode gewöhnlich zweikernig, die darüberliegende vier(selten acht)kernig.Zwischen Restitutionskernbildung und Endopolyploidie in den Kernen der Antipoden und der systematischen Gliederung der Ranunculaceen ergeben sich keine systematischen Beziehungen.     

Über die Teilungsfolge in den Fäden von zwei Grünalgen

Zusammenfassung In den Fäden der GrünalgenMicrospora amoena undSpirogyra crassa wechseln geschlossene Abschnitte von eigentlich ruhenden Zellen mit Abschnitten von präprophasischen, das sind Mitose-bereiten, mitotisch aktiven und posttelophasischen, also unmittelbar nach der Mitose stehenden Zellen ab. Nur ausnahmsweise schieben sich Zellen des einen Typus in Abschnitte von Zellen des anderen Typus ein.Dieses Verhalten wird hypothetisch mit dem Auftreten und der Weiterleitung teilungsinduzierender Hormone erkärt. Daß die Teilungsstadien einschließlich der vor- und nachmitotischen Stadien nicht entsprechend einem Gefälle streng geordnet aufeinanderfolgen, beruht wahrscheinlich auf der Verschiedenartigkeit der äußeren und inneren Faktoren, die auf die einzelnen Zellen einwirken. Genealogische Faktoren spielen offenbar eine untergeordnete Rolle.     

Glucose and amino acid metabolism in rat brain during sustained hypoglycemia

The metabolism of glucose in brains during sustained hypoglycemia was studied. [U-14C]Glucose (20 microCi) was injected into control rats, and into rats at 2.5 hr after a bolus injection of 2 units of insulin followed by a continuous infusion of 0.2 units/100 g rat/hr. This regimen of insulin injection was found to result in steady-state plasma glucose levels between 2.5 and 3.5 mumol per ml. In the brains of control rats carbon was transferred rapidly from glucose to glutamate, glutamine, gamma-aminobutyric acid and aspartate and this carbon was retained in the amino acids for at least 60 min. In the brains of hypoglycemic rats, the conversion of carbon from glucose to amino acids was increased in the first 15 min after injection. After 15 min, the specific activity of the amino acids decreased in insulin-treated rats but not in the controls. The concentrations of alanine, glutamate, and gamma-amino-butyric acid decreased, and the concentration of aspartate increased, in the brains of the hypoglycemic rats. The concentration of pyridoxal-5'-phosphate, a cofactor in many of the reactions whereby these amino acids are formed from tricarboxylic acid cycle intermediates, was less in the insulin-treated rats than in the controls. These data provide evidence that glutamate, glutamine, aspartate, and GABA can serve as energy sources in brain during insulin-induced hypoglycemia.     

Some observations on the carbon dioxide burst in chlorella and chlamydomonas

In the course of mass spectrometer studies with the algae Chlorella and Chlamydomonas, data were obtained which indicate that the CO₂ burst and gulp are sensitive to oxygen. Furthermore, the CO₂ burst was found to be strongly suppressed when wave lengths shorter than 460 nanometers were blocked at intensities adequate to saturate photosynthesis. Under appropriate conditions at 30°, the CO₂ burst was interrupted by a brief CO₂ gulp and the post illumination gulp by a brief burst of CO₂. The post illumination gulp of CO₂ could be induced during illumination by interposition of a filter blocking wave lengths shorter than 460 nanometers. These data are discussed in relation to earlier reports of the phenomenon and briefly as they affect the detection of photorespiration.     

ULTRASTRUCTURAL OBSERVATIONS OF VITELLOGENESIS IN THE SPIDER CRAB, LIBINIA EMARGINATA L

Ovaries from the spider crab, Libinia emarginata L. were studied to learn more of vitellogenesis in crustaceans. Oogonia and previtellogenic oocytes were found in the core of the ovaries. Vitellogenic oocytes are located more peripherally. Profiles of the endoplasmic reticulum are abundant in the vitellogenic oocytes. The granular and agranular reticulum as well as the Golgi complex are active in yolk synthesis. As vitellogenesis proceeds, yolk precursors are incorporated into the egg by micropinocytosis at the egg surface. Thus, in Libinia, yolk materials appear to be derived from both intra- and extraoocytic sources.     

OBSERVATIONS ON PHOTOHETEROTROPHY IN A MARINE DIATOM1

An unidentified species of the diatom genus Cocconeis has been isolated from the sediments of Biscayne Bay, Florida. The organism is capable of utilizing a range of organic substrates, including lactate, in the light but not in the dark, as shown by growth studies. Information is included on changes in cell carbon, nitrogen, and chlorophyll a during growth in batch culture. Data obtained on the kinetics of uptake of lactate and glucose raise questions on the possible ecological significance of photoheterotrophy among marine microalgae, particularly those in estuaries.     

Peptides isolated from human liver with specific inhibitory effects on reassociation/reactivation of in vitro dissociated lactic dehydrogenase (LDH-M4 and −H4) isozymes

Two different peptides have been purified from human liver, similar to those previously reported (Schoenenberger, G.A., and Wacker, W.E.C. (1966) Biochemistry 5, 1375–1379) to be present in human urine, which may serve as metabolic regulators of lactate dehydrogenase (EC 1.1 1.27) isoenzymes (LDH-M₄ = muscle type; LDH-H₄ = heart type). By trichloroacetic acid precipitation, ultrafiltration, Sephadex G-25 and Bio-Gel P-2 columns, affinity chromatography on immobilized LDH-isozymes and HPLC two peptides which differed with respect to molecular weight, retention on the affinity columns and amino acid composition were isolated. No effect was observed when native, tetrameric lactate dehydrogenase was incubated with these peptides. However, when lactate dehydrogenase was dissociated to monomers at low pH and allowed to reassociate by adjusting the pH to 7.5 complete inhibition of the reactivation occurred when the inhibitors were incubated together with respective reassociating monomeric isozymes. The two peptides showed no cross-specificity, i.e. each peptide exhibited inhibitory activity only on one of the two isozymes LDH-M₄ or LDH-H₄. From the amino acid analyses, gel-filtration and PAGE + SDS, molecular weight of 1800 for the M₄ and ≈2700 for the H₄ inhibitor were calculated. An apparent K_i of ≈3 × 10^?5 mM for the H₄ and ≈7 × 10^?5 mM for the H₄ inhibitor was estimated. The interaction of the inhibitors with the enzyme system showed strong cooperativity with Hill coefficients of 2.9 (LDH-M₄-specific) and 2.4 (LDH-H₄-specific). Mathematical modelling of the reassociation and reactivation of lactate dehydrogenase and its specific inhibition by the peptides led to the conclusion that the peptides reacts with monomers, dimers or a transition state during the tetramerisation process. k₁ for the dimerisation step of M₄ = 2.0 × 10⁵ M^?1 · s^?1 and of H₄ = 8.2 × 10⁴ M^?1 · s^?1; k₂ for the tetramerisation step of M₄ = 2.8 × 10⁵ M^?1 · s^?1 and of H₄ = 1.2 × 10⁵ · M^?1 · s^?1, were calculated, the second step still being the faster one.