一株纤溶酶高产菌株的发酵特性研究

筛选了一株产纤溶酶能力较强的芽孢细菌,本文对其液体发酵条件进行了优化,结果表明菌株产酶最佳条件为:可溶性淀粉4%,蛋白胨2%,柠檬酸铁铵0.1%,磷酸钙0.4%,接种量2%,pH 7.5,发酵时间96 h,装瓶量75/500(mL/mL),摇床温度37℃,转速150 rpm,在该条件下产酶酶活可达581.81 IU/mL。     

丁香脂素的全合成

本文以丁香醛为原料,经过与丙二酸Knoevenagel缩合,甲酯用LiAlH4还原得到了芥子醇。芥子醇在光照下氧化偶联,得到了丁香脂素。总产率为43.68%。     

SARS病毒受体ACE2的克隆、原核表达及其功能区鉴定

ACE2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)是SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome associatedcoronavirus,SARS-CoV)的主要受体。此研究旨在鉴定ACE2的SARS-CoV受体功能区,为进一步阐明SARS-CoV与细胞间的相互作用机制及研制抗病毒药物等提供理论依据。利用RT-PCR从Vero-E6细胞的mRNA中分两段扩增ACE2基因,其中N端片段ACE2A1-367(102~1 210nt)不包括ACE2的酶活性位点(1 223~1 237nt,或374~378aa),而C端片段ACE2B335-805(1 101~2 524nt)包括ACE2的酶活性位点。扩增片段克隆入pMD-18T,并进行测序鉴定。进一步构建与GST基因融合表达的原核表达质粒pGEX-ACE2A与pGEX-ACE2B,IPTG诱导表达。表达的融合蛋白分子量为65kD和77kD,主要以包涵体形式存在。Western blot证实表达产物具有免疫学活性。将纯化的包涵体蛋白质复性后进行Western blot分析,证实pGEX-ACE2A表达的蛋白(~65kD)能与SARS-CoV S1蛋白特异结合,而pGEX-ACE2B表达的蛋白(~77kD)不能与S1蛋白结合。结果表明,ACE2的受体活性与酶活性位点无关,受体功能区在ACE2 N端367个氨基酸内。     

东黑冠长臂猿鸣叫特征及气象因子对鸣叫的影响

鸣叫是长臂猿非常典型的一个特征,并且受到生物因素和非生物因素(如气象因子) 的影响。为了解东黑冠长臂猿的鸣叫特征以及气象因子对鸣叫的影响,2008 年8 月至2009 年10 月,采用全事件记录法对栖息在广西邦亮自然保护区3 个东黑冠长臂猿野生群体的鸣叫行为进行观察。结果表明东黑冠长臂猿倾向于在早晨鸣叫,有91.4% 的鸣叫发生在日出前0.5 h 至日出后3 h 之间,其中53.1% 的鸣叫发生在日出后1 h 内。平均每个群体的鸣叫频次为69.7% ,一个群体平均每天鸣叫1.24 次,鸣叫的平均持续时间为18.3 min。一次二重唱中,雌性平均激动鸣叫4.4 次。长臂猿鸣叫的起始时间在光照强度的影响下差异显著,阴天和雾天鸣叫的起始时间延后,且雾天最迟;降雨致使长臂猿体能的损失和光照强度减弱,从而引起鸣叫起始时间的延后和持续时间缩短;温度对长臂猿鸣叫的影响并不显著。     

微生物学检验实验教学的改革与实践

改革传统的微生物学检验实验教学,组织学生到大型医院和医学检验类企业开展实验。按照微生物检验室工作流程,分接种、培养、鉴定3大项目进行实验教学。同时,让学生与企业员工进行深入交流,体验企业文化氛围,感受人文关怀,提高了实验教学质量,让学生树立更科学合理的就业观和择业观。     

Lacking chloroplasts in guard cells of crumpled leaf attenuates stomatal opening: both guard cell chloroplasts and mesophyll contribute to guard cell ATP levels

Controversies regarding the function of guard cell chloroplasts and the contribution of mesophyll in stomatal movements have persisted for several decades. Here, by comparing the stomatal opening of guard cells with (crl‐ch) or without chloroplasts (crl‐no ch) in one epidermis of crl (crumpled leaf) mutant in Arabidopsis, we showed that stomatal apertures of crl‐no ch were approximately 65–70% those of crl‐ch and approximately 50–60% those of wild type. The weakened stomatal opening in crl‐no ch could be partially restored by imposing lower extracellular pH. Correspondingly, the external pH changes and K⁺ accumulations following fusicoccin (FC) treatment were greatly reduced in the guard cells of crl‐no ch compared with crl‐ch and wild type. Determination of the relative ATP levels in individual cells showed that crl‐no ch guard cells contained considerably lower levels of ATP than did crl‐ch and wild type after 2 h of white light illumination. In addition, guard cell ATP levels were lower in the epidermis than in leaves, which is consistent with the observed weaker stomatal opening response to white light in the epidermis than in leaves. These results provide evidence that both guard cell chloroplasts and mesophyll contribute to the ATP source for H⁺ extrusion by guard cells.     

丹酚酸A对大鼠脑缺血/再灌注损伤及抗氧化酶活性的影响

目的:探讨丹酚酸A对大鼠脑缺血/再灌注(cerebral ischemia/reperfusion,CI/R)损伤及抗氧化酶活性的影响。方法:采用大鼠脑中动脉闭塞(middle cerebral arteryocclusion,MCAO)2 h再灌注24 h模型。实验终末,检测脑梗死面积,脑水肿以及评价神经功能损伤,并进一步分析脑组织中三种抗氧化酶的活性水平。结果:与模型组相比,丹酚酸A组大鼠脑梗死面积显著减少(P0.05),水肿程度显著减轻(P0.05),神经功能学评分显著下降(P0.05)。模型组再灌注24 h后,SOD,GSH-PX及CAT活性显著下降(P0.05);丹酚酸A组SOD,GSH-PX及CAT活性则显著升高(P0.05)。结论:丹酚酸A对大鼠CI/R损伤具有保护作用,可能与CI/R损伤时的脑组织SOD,GSH-PX及CAT活性显著升高相关。     

右美托咪定预处理对小鼠肠缺血再灌注损伤的作用研究

目的:右美托咪定(Dexmedetomidine,Dex)属于α-2肾上腺素能受体激动剂具有抗焦虑、催眠、镇痛和交感神经阻滞作用。最新研究发现右美托咪定对心脏和肺的缺血再灌注损伤具有显著的保护效应,但是右美托咪定是否对肠缺血再灌注损伤具有保护作用,迄今为止还没有相关研究。因此,本研究以小鼠为模型,观察右美托咪定预处理对小鼠肠缺血再灌注损伤的影响。方法:建立肠缺血再灌注损伤小鼠模型,并分为假手术组、缺血再灌注组和右美托咪定与处理组。不同剂量(10,25,50和100μg/kg)右美托咪定预处理小鼠。提取小鼠肠组织,用不同的试剂盒分别测定超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD),丙二醛(Malondialdehyde,MDA),谷胱甘肽(Glutathione,GSH),一氧化氮(Nitric Oxide,NO)和髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)的水平变化。结果:右美托咪定预处理可以显著提高肠缺血再灌注损伤小鼠的存活率并呈剂量依赖性。右美托咪定预处理(100μg/kg)抑制由肠缺血再灌注损伤引起的不良效应,包括SOD水平降低,MDA水平升高,GSH水平降低,NO水平升高和MPO水平升高。结论:我们的研究表明右美托咪定可以提高小鼠肠缺血再灌注损伤的生存率,并且抑制氧化应激反应,炎症细胞的活化和侵润以及NO的水平,对肠缺血再灌注损伤具有显著的保护效应。本研究不仅进一步证实了右美托咪定的广泛的药理活性,而且为肠缺血再灌注损伤的治疗提供了潜在的治疗药物,其进一步的药理效应和作用机制值得进一步的研究。     

传输靶向COX-2 siRNA联合化疗药物对大鼠胃癌细胞生长

目的：通过动物实验探讨传输靶向COX-2 siRNA联合化疗药物对大鼠胃癌细胞生长的抑制作用。方法：24 只健康SD 大鼠 平分为三组,治疗组用COX-2-siRNA转染的胃癌SGC7901 细胞接种,同时进行环磷酰胺、丝裂霉素C 化疗治疗;阴性对照组,用 阴性对照siRNA 转染的胃癌SGC7901 细胞接种,同时进行环磷酰胺、丝裂霉素C 化疗治疗;对照组(n=8),用未经转染的胃癌 SGC7901 细胞接种,不进行化疗治疗;三组转染后都接种了裸鼠。结果：治疗组、阴性对照组及对照组胃癌细胞凋亡率分别为 （22.28± 0.12）%、（1.23± 0.17）%和（1.03± 0.14）%,治疗组与阴性对照组和对照组比较差异都有统计学意义(t=18.152,17.555, P<0.05)。治疗组的抑瘤率为76.7%,阴性对照组和对照组分别为12.8%和6.89%,治疗组的抑瘤率明显高于其他两组(x2=15. 211,13.899,P<0.05)。Western blotting检测结果显示治疗组的COX-2 蛋白表达含量得到了明显抑制。结论：传输靶向COX-2 siRNA和化疗药物的配合应用可有效抑制COX-2 蛋白的表达,从而抑制胃癌细胞的生长,从而起到更好的治疗效果。     

藏红花素对C6胶质瘤细胞生长及Survivin和Livin表达的影响

目的:研究藏红花素对大鼠C6胶质瘤细胞生长及凋亡蛋白抑制因子Survivin和Livin表达的影响。方法:体外培养C6胶质瘤细胞,加入不同浓度的藏红花素培养液,并于不同时间点进行观测,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,观察C6细胞的生长活性;通过相差显微镜和Hoechst荧光染色法观察C6细胞的形态学变化;采用Western blot法检测Survivin和Livin蛋白的表达水平。结果:C6胶质瘤细胞经藏红花素作用后细胞生长受到明显抑制,用含2、4和8 mg/ml藏红花素的培养液作用48h后各组C6细胞的OD值分别为0.732±0.013、0.421±0.010和0.289±0.017,细胞生长抑制率分别为26.8±0.01%、58.0±0.02%和71.1±0.02%,其中4 mg/ml和8 mg/ml藏红花素实验组细胞生长抑制率与阴性对照组均有显著性差异(P均0.05);相差显微镜和Hoechst荧光染色法观察显示实验组C6细胞出现典型的凋亡形态学改变;Western blot检测显示实验组C6细胞Survivin和Livin蛋白表达明显下调。结论:藏红花素能明显抑制C6胶质瘤细胞的体外生长,其抑制作用与诱导C6细胞发生凋亡和下调凋亡蛋白抑制因子Survivin和Livin的表达有关。