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In the present study, we examined the possible interaction between Rab4 and syntaxin 4, both having been implicated in insulin-induced GLUT4 translocation. Rab4 and syntaxin 4 were coimmunoprecipitated from the lysates of electrically permeabilized rat adipocytes. The interaction between the two proteins was reduced by insulin treatment and increased by the addition of guanosine 5'-O-(3-thiotriphosphate) (GTPgammaS). An in vitro binding assay revealed that the bacterially expressed Rab4 was bound to a glutathione S-transferase fusion protein containing the cytoplasmic domain of syntaxin 4 (GST-syntaxin 4-(1-273)) but not to syntaxin 1A or vesicle-associated membrane protein-2. The interaction between Rab4 and syntaxin 4 seemed to be regulated by the guanine nucleotide status of Rab4, because 1) GTPgammaS treatment of the cells significantly increased, but guanosine 5'-O-(2-thiodiphosphate) (GDPbetaS) treatment decreased the amount of Rab4 pulled down with GST-syntaxin 4-(1-273) from the cell lysates; 2) GTPgammaS loading on Rab4 caused a marked increase in the affinity of Rab4 to syntaxin 4 whereas GDPbetaS loading had little effect; and 3) a GTPase-deficient mutant of Rab4 (Rab4(Q67L)), but not a GTP-binding-defective mutant (Rab4(S22N)), was bound to GST-syntaxin 4-(1-273). Although insulin stimulated [gamma-(32)P]GTP binding to Rab4 in a time-dependent fashion, its effect on the Rab4 interaction with syntaxin 4 was apparently biphasic; an initial increase in Rab4 associated with syntaxin 4 was followed by a gradual dissociation of the GTPase from syntaxin 4. Finally, the binding of Rab4(Q67L) to GST-syntaxin 4-(1-273) was inhibited by munc-18c in a dose-dependent manner, indicating that GTP-loaded Rab4 binds to syntaxin 4 in the open conformation. These results suggest that 1) Rab4 interacts with syntaxin 4 in a direct and specific manner, and 2) the interaction is regulated by the guanine nucleotide status of Rab4 as well as by the conformational status of syntaxin 4. 相似文献
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不饱和脂肪酸在低渗牵张加强豚鼠胃窦平滑肌细胞毒蕈碱电流中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
利用全细胞膜片钳技术在急性分离的胃窦平滑肌细胞上记录离子电流的方法 ,探讨外源性不饱和脂肪酸是否参与低渗牵张加强毒蕈碱电流的过程。在豚鼠胃窦平滑肌细胞上膜电位被钳制在 - 2 0 0mV等渗状态时 ,5 0 μmol/L卡巴胆碱 (carbachol,CCh)引起的毒蕈碱电流 (ICCh)作为对照 ,发现低渗牵张可以使ICCh明显增加到对照的 2 2 6 0±2 1 0 %。当用含 5 μmol花生四烯酸 (arachidacid ,AA)、亚麻酸 (linoleicacid ,LA)或亚油酸 (oleicacid,OA)细胞外液灌流时 ,ICCh分别被抑制在对照的 3 8± 0 6%、3 5 2± 0 8%和 66 6± 0 6%。在这种情况下 ,低渗牵张刺激可以使ICCh分别增加到 10 6 0± 2 5 %、173 2± 6 8%和 2 2 2 1± 11 0 %。 5 μmol/LAA抑制低渗牵张增加的毒蕈碱电流 5 1 2± 3 8% ,而在等渗状态下抑制ICCh为 96 2± 1 6%。上述结果提示 ,不饱和脂肪酸中双键数目越多 ,抑制效应越强 ;但不饱和脂肪酸不参与低渗刺激加强毒蕈碱电流的过程。 相似文献
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通过对文山松毛虫质型多角体病毒(Dendrolimus punctatus Wenshanensis cytoplasmic polyhedrosis virus, DpwCPV)的增殖、纯化,获得一株单一类型的质型多角体病毒。提纯的病毒粒子经SDS热酚法抽提得到基因组dSRNA,使用低熔点琼脂糖凝胶电泳分离并回收纯化第九片段S9。S9 RNA双链经高温变性,逆转录合成cDNA双链。根据DpwCPV与BmCPV1的同源性设计引物,将S9进行PCR扩增后,克隆到PMD18T载体上。最终获得一个977bp的序列,其中包含一个963bp的开放阅读框(ORF)。推测DpwCPV S9基因编码一个320个氨基酸的蛋白,分子量约为35560。 相似文献
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Effect of amino acids on cryopreservation of cynomolgus monkey (Macaca fascicularis) sperm 总被引:3,自引:0,他引:3
The effects of three amino acids (proline, glutamine, and glycine) added to the freezing medium Tes-Tris-egg yolk (TTE) for cryopreservation of cynomolgus monkey (Macaca fascicularis) spermatozoa were studied. This is the first report on the effects of amino acids on nonhuman primate sperm cryopreservation. The addition of 5mM proline, 10mM glutamine, and 10 or 20mM glycine each significantly improved post-thaw sperm motility and membrane and acrosome integrity compared with the control (TTE alone). However, a significant decrease in motility and membrane/acrosome integrity was observed when amino acid concentrations increased to 60mM for proline and glutamine, and 80 mM for glycine. The results suggest that adding a limited amount of amino acids to the freezing media is beneficial for freezing cynomolgus monkey sperm. 相似文献
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农杆菌介导玉米遗传转化体系的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
玉米(Zea maysL.)是世界上三大主要粮食作物之一,至今其遗传转化仍比较困难,目前报道有多种成功的方法,其中农杆菌(Agrobactierium tumefaciens)介导法是当前玉米遗传转化的主要方法。本文综述了农杆菌介导的玉米遗传转化研究的发展历史、存在问题和影响因素等,并对未来发展趋势进行展望。 相似文献
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间断低氧对大鼠下丘脑超微结构及前增食欲素水平的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨睡眠中间断低氧对大鼠下丘脑前增食欲素及受体水平的影响以及下丘脑超微结构的变化。方法大鼠分成对照组、间断低氧组和持续低氧组,分别给予吸入空气,持续低氧和间断低氧气体,并在实验开始后1d、3d、1w和4w应用RT-PCR方法测定大鼠下丘脑前增食欲素及受体水平,分析其间的变化关系,电镜观察下丘脑的超微结构变化。结果与对照组和持续低氧组比较,间断低氧4w后大鼠下丘脑前增食欲素mRNA水平明显降低,受体水平升高,但在持续低氧和对照组之间无明显差异。在低氧后1d、3d、7d后大鼠下丘脑前增食欲素mRNA降低,受体水平升高,在4w后,持续低氧组则接近正常。急性持续低氧大鼠超微结构变化更严重,而慢性间断低氧变化更持久。结论慢性间断低氧可以引起下丘脑前增食欲素下降及受体水平升高,急性持续低氧也可引起上述变化,而慢性持续低氧未引起增食欲素改变;慢性间断低氧大鼠下丘脑超微结构表现为严重而持久的变化。 相似文献
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