Atorvastatin-induced activation of Alzheimer's alpha secretase is resistant to standard inhibitors of protein phosphorylation-regulated ectodomain shedding

Studies of metabolism of the Alzheimer amyloid precursor protein (APP) have focused much recent attention on the biology of juxta- and intra-membranous proteases. Release or 'shedding' of the large APP ectodomain can occur via one of two competing pathways, the alpha- and beta-secretase pathways, that are distinguished both by subcellular site of proteolysis and by site of cleavage within APP. The alpha-secretase pathway cleaves within the amyloidogenic Abeta domain of APP, precluding the formation of toxic amyloid aggregates. The relative utilization of the alpha- and beta-secretase pathways is controlled by the activation of certain protein phosphorylation signal transduction pathways including protein kinase C (PKC) and extracellular signal regulated protein kinase [ERK/mitogen-activated protein kinase (MAP kinase)], although the relevant substrates for phosphorylation remain obscure. Because of their apparent ability to decrease the risk for Alzheimer disease, the effects of statins (HMG CoA reductase inhibitors) on APP metabolism were studied. Statin treatment induced an APP processing phenocopy of PKC or ERK activation, raising the possibility that statin effects on APP processing might involve protein phosphorylation. In cultured neuroblastoma cells transfected with human Swedish mutant APP, atorvastatin stimulated the release of alpha-secretase-released, soluble APP (sAPPalpha). However, statin-induced stimulation of sAPPalpha release was not antagonized by inhibitors of either PKC or ERK, or by the co-expression of a dominant negative isoform of ERK (dnERK), indicating that PKC and ERK do not play key roles in mediating the effect of atorvastatin on sAPPalpha secretion. These results suggest that statins may regulate alpha-secretase activity either by altering the biophysical properties of plasma membranes or by modulating the function of as-yet unidentified protein kinases that respond to either cholesterol or to some intermediate in the cholesterol metabolic pathway. A 'phospho-proteomic' analysis of N2a cells with and without statin treatment was performed, revealing changes in the phosphorylation state of several protein kinases plausibly related to APP processing. A systematic evaluation of the possible role of these protein kinases in statin-regulated APP ectodomain shedding is underway.     

腾冲嗜热厌氧菌热休克蛋白60及其基因表达的热激动态变化分析

热休克蛋白60(HSP60)是细菌体内一种非常重要的分子伴侣,其可以协助蛋白质或肽链的正确折叠和构型,防止变性和降解。基于本实验室的早期观察,腾冲嗜热厌氧菌的HSP60是一个典型的温度相关蛋白质,在80℃的表达水平最高。为了进一步了解嗜热菌应急的分子机制,继续进行了在热激后HSP60基因表达的动态研究。将最适温度(75℃)下培养的腾冲嗜热厌氧菌迅速地转移至80℃继续培养,然后在不同的时间点上分别取样,并通过双向电泳、Western blot和Real_time PCR等方法,分析了HSP60在mRNA和蛋白质水平上的表达量的改变。试验结果表明,在80℃热处理4h内的短期应急过程中,HSP60蛋白水平一直呈上升趋势,而它的mRNA水平则表现为先升高后下降的一个非对称性的峰形变化。HSP60的mRNA和蛋白质的对温度的应答快慢程度是不同的。HSP60的mRNA水平的显著变化在1h内便可观察到,而蛋白质水平的显著改变要延迟3h左右。此外,HSP60的mRNA和蛋白质对温度的应答量变大小也是不同的。     

菲菊头蝠回声定位信号特征及下丘神经元频率调谐

研究了菲菊头蝠自由飞行状态下的回声定位信号和下丘神经元的声反应特性。菲菊头蝠在自由飞行时发射的CF/FM型回声定位叫声含2-3个谐波,主频为105.3±1.7kHz,时程为39.5±9.6ms,脉冲间隔为73.9±16.0ms。在所记录到的159个下丘神经元中,E型(Echolocation)神经元为32.7%(52/159),其中CF1型(Constantfrequency)占11.3%(18/159),FM1型(Frequencymodulated)占20.1%(32/159),FM2型占1.3%(2/159);NE型(Nonecholocation)神经元的比例为67.3%(107/159)。这些神经元的最佳频率(Bestfrequency,BF)与记录深度之间存在线性关系(r=0.9471,P<0.01)。E型神经元的深度范围为349-1855(1027.5±351.6)μm,阈值范围为6-74(43.1±14.5)dBSPL,潜伏期范围为10.0-26.0(14.6±3.8)ms。NE型神经元的分别为93.0-1745.0(733.3±290.3)μm、2-70(36.5±23.8)dBSPL、5.0-23.0(13.5±3.7)ms。记录到的53个IC神经元的调谐曲线(Frequencytuningcurve,FTC)均为开放型,51个为单峰型,2个为双峰型。单峰型神经元中大部分为狭窄型(Q10dB>5),占70.6%(36/51),E型神经元全部为狭窄型,Q10dB为10.4±7.1(5.5-31.6),其中CF1型为18.3±11.2(5.5-31.6),FM1型为8.7±4.7(5.5-24.3),FM2型为6.9±0.3(6.7-7.1);NE型神经元既有宽阔型也有狭窄型,Q10dB为6.6±5.1(1.6-25.6)。两个双峰型FTC主、副峰分别偏向高、低频区,高频边对应的是E型神经元。     

运用微生物法测定保健食品中的维生素B6

介绍运用微生物法测定保健食品中维生素B6的含量。GB／T5009．154—2003将微生物法规定为测定食品中维生素B6的国家标准方法Ⅲ。其原理为卡尔斯伯酵母菌需在有维生素B6存在的条件下才能生长,在一定条件下维生素B6的量与其生长量成正比关系。用分光光度仪在550nm波长下测定该菌的生长．与标准曲线相比较,从而得出该样品中维生素B6的含量。通过对国标方法作较详细的注解,并对有些地方作适当的修改,以期对需要开展此项工作的实验室及其人员会有较大的帮助。     

黑曲霉中内切菊粉酶基因及其全合成基因在解脂耶氏酵母中表达的比较

利用酵母密码子偏爱性将黑曲霉(Aspergillus niger)中的内切菊粉酶(Endoinu linase)基因通过基因全合成的方式合成为酵母密码子偏爱性的内切菊粉酶基因。然后将原始和全合成的内切菊粉酶基因克隆到解脂耶氏酵母表达载体PINA1296上,得重组解脂耶氏酵母表达载体pHBM2020、pHBM2021,将两种质粒分别转化解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)CLIB725,筛选得到重组解脂耶氏酵母CLIB725(pHBM2020)、CLIB725(pHBM2021),将两种重组酵母摇瓶培养,经SDS-PAGE、测酶活检测表明两种基因在解脂耶氏酵母中都有表达,全合成菊粉酶比原始菊粉酶酶活要高。     

双歧杆菌DNA对巨噬细胞PKC的影响

目的探索青春型双歧杆菌的DNA对巨噬细胞PKC家族的影响.方法以激光共聚焦显微镜定量测定小鼠腹腔巨噬细胞PKCα、PKCβⅠ、PKCβⅡ、PKCγ、PKCε和PKCζ的含量.结果双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞PKCα和PKCβⅡ的平均荧光强度明显高于对照组（P＜0.01）,而PKCβⅠ、PKCγ、PKCε和PKCζ的平均荧光强度在2组间则差异无显著性（P＞0.05）.结论青春型双歧杆菌的DNA能活化巨噬细胞的PKCα和PKCβⅡ.     

裂胸螨科3新种(蜱螨亚纲:革螨股)

记述裂胸螨科Aceosejidae3新种：修长蠊螨Blattisocius dolichussp．nov．,长江副加螨Paragarmania changjiangensis sp．nov．和江西肛厉螨Proctolaelaps jiangxiensis sp．nov．     

SARS康复患者血浆蛋白谱的双向凝胶电泳分析

以蛋白质双向凝胶电泳（2-DE）比较了不同中和抗体效价的SARS康复患者血浆样本（试验组）与正常人单采血浆样本（对照组）蛋白谱的异同。结果显示：对照组9份样本的2-DE 图谱出现蛋白斑点338±24个,试验组9份样本出现蛋白斑点348±45个,二者主要斑点的位置与数量基本一致;对照组中少量蛋白斑点的出现频度不同,且有4个蛋白点群的灰度值存在明显的差异;试验组有6个蛋白点群与对照组出现差异,并在相同区域Ⅲ内有4个蛋白斑点的灰度值出现变化,且灰度值与样本的中和抗体效价呈正相关性。结果表明,试验组与对照组的蛋白谱存在差异,且与SARS病毒中和抗体效价呈现相关性。     

用鞘磷脂作为标志分子鉴定脂筏

脂筏是质膜双层中富含鞘脂、胆固醇及特殊蛋白质的质膜微区.对其功能的研究,首先要对其进行分离和鉴定.常利用密度梯度超速离心将其分离,然后以脂筏中富含的神经节苷脂GM₁作为标志分子,利用荧光或生物素标记的霍乱毒素-B亚基进行亲和标记来鉴定脂筏.但这一鉴定方法操作复杂、费时、易对环境造成污染,所用关键试剂霍乱毒素不易获得,再加上一些组织GM₁含量甚微或不含GM₁,使其应用受到局限.为建立一个特异性高又对各种组织广泛适应的脂筏鉴定方法.对两种细胞系脂筏的脂类组分进行了分析.结果发现,可用鞘磷脂作为脂筏的特异性标志分子,采用高效薄层层析技术对脂筏进行鉴定.     

TAT-凋亡素融合蛋白的表达及其抗肿瘤活性

凋亡素(apoptin)由鸡贫血病毒vp3基因编码,能特异地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞 没有毒性,为了获得可转导入细胞内部的凋亡素,将人工合成的编码TAT蛋白转导结构域的DNA片段与凋亡素编码基因克隆入质粒pET-28a内,构建出表达融合蛋白TAT-apoptin的原核表达载体pET-28a-TAT-apoptin.在大肠杆菌Rosetta（DE3）中表达融合蛋白,利用IDA -Ni2+ 亲和柱纯化,葡聚糖凝胶G 25除去尿素后得到可溶的变性蛋白.纯化后的TAT apoptin加入体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人肺癌Anip973细胞,对照组加入TAT-麦芽糖结合蛋白（TAT-MBP）. 经免疫组化检测,转导1 h后TAT-MBP分布于以上两种细胞的胞浆和胞核,TAT-apoptin则主要分布于2种细胞的胞浆内,转导24 h后TAT-MBP的亚细胞定位没有变化,TAT-apoptin分别定位于HUVECs的胞浆和Anip973的胞核中.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）显示转导48 h后,TAT-MBP处理过的 HUVECs和Anip973细胞、TAT-apoptin处理过的HUVECs没有明显改变,而TAT-apoptin处理过的Anip973细胞大量凋亡.以上结果表明TAT apoptin融合蛋白在肿瘤治疗上有潜在的应用价值.