SARS—CoV N蛋白与病毒mRNA相互作用的初步研究

SARS冠状病毒(SARS-CoV)是一种新型的冠状病毒,其基因组大小约为30,000 nt,为单股正链RNA。病毒基因中的1-72个核甘酸为前导序列。核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白是冠状病毒的主要结构蛋白,它在病毒基因转录,翻译以及病毒颗粒包装中起重要作用。在本研究中,我们通过PCR的方法从SARS-CoV cDNA中克隆N基因,将基因克隆到大肠杆菌表达载体中,经表达纯化获得大量重组蛋白,通过亲和层析和凝胶过滤层析获得高纯度的N蛋白。同时构建前导RNA的转录模板,经体外转录得到地高辛标记的RNA。使用Northwestern分析技术,我们证实纯化的N蛋白在体外可以与RNA发生特异性的结合。N蛋白与病毒RNA的结合特性及其在病毒生活周期中的所起作用的初步研究,为下一步设计出有效的阻断病毒周期从而达到抗病毒目的的药物或疫苗奠定了基础。     

应急大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞颗粒数目与其钙含量的关系

采用电镜细胞立体形态计量法及电镜Ｘ射线显微定量分析术,对制动应急大鼠的肾上腺髓质细胞内嗜铬颗粒数密度和颗粒内Ｃａ浓度变化进行测量。结果显示,两者在制动过程中均呈进行性下降,但颗粒内钙浓度的下降快于颗粒数目的减少（Ｐ〈０．０１）。该结果支持颗粒内钙释放入胞质,参与胞质内游离钙浓度的升高,进而激发颗粒胞吐的假设,为主宰嗜铬颗粒是一种细胞内钙库并参与细胞分泌提供了实验依据。     

异双核配合物[(PhPPy_2)_2PdCuCl_2]ClO_4(PhPPy_2为二(2-吡啶基)苯基膦)的合成与晶体结构

反式单核钯(Ⅱ)配合物[-Pd(PhPPy2)2Cl2](1)与ECu(CH3CN)4]ClO4反应得到异双核配合物[(PhPPy2)2PdCuCl2]ClO4·2CH3CN(2),其中金属离子由两个PhPPy2配体以一种新的模式所桥联。配合物2属于P21/c空间群,晶胞参数a、b、c分别为1.294 7(1)nm,0.914 2(1) nm和3.345 4(2)nm,β为99.698(1)°。2中的Pd(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)离子分别为扭曲的四面体和平面正方构型。室温下,该配合物的溶液发光。     

5-羟甲基胞嘧啶的研究进展

CpG二核苷酸中胞嘧啶的甲基化形式5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)在哺乳动物中是一种常见的表观遗传修饰,在基因表达调控、发育调节、基因组印迹等方面发挥重要作用。近3年来研究发现,除了5mC外,胞嘧啶碱基的另一种修饰—5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)在哺乳动物的多种组织中有着丰富的表达,它可能与5mC有着不同的生物学功能。文章就近年来5hmC的研究进展进行了综述。     

人骨保护素(OPG)重组腺病毒的制备及其生物活性研究

采用RT-PCR法得到人OPG的编码区cDNA,克隆至穿梭质粒pShuttle,构建重组有OPG编码区cDNA的腺病毒DNA,经Pac I 酶切线性化,在脂质体介导下转染HEK293细胞,制备重组腺病毒并测定病毒滴度约为5×10⁶～1.5×10⁷ pfu/mL。体外感染小鼠成肌细胞C2C12,Western blot及ELISA检测证实有OPG蛋白的表达,并可在细胞培养上清中持续表达6周。感染OPG重组腺病毒的C2C12细胞生长状态良好、细胞周期无明显变化。将重组腺病毒加入体外培养的小鼠骨髓细胞的培养基中,诱导形成的破骨细胞数量及在象牙片上形成的吸收陷窝的数量显著减少（P<0.01）。      

Responses of Hedysarum Laeve , a guerrilla clonal semi-shrub in the Mu Us sandland, to local sand burial

In arid and semi-arid inland deserts, one of the environmental stresses for plants is recurrent sand burial, which can influence the physical and biotic microenvironments of the plants and soil. Previous studies have shown that different levels of sand burial have different effects on plants. Slight sand burial could increase the height increment, leaf biomass and the number of new ramets of the plants while heavy sand burial could impair the growth of the plants and even decrease their chances of survival. In other words, below a certain threshold level of burial, the growth of plants is stimulated probably because of multiple factors. However, as the level of burial increases, the positive response starts to decline until it becomes a negative value. Arid and semi-arid inland deserts are frequently colonized and stabilized by many rhizomatous clonal plants. Clonal physiological integration often helps clonal plants buffer local environmental stress encountered by ramets. A rhizomatous clonal semishrub, Hedysarum laeve (H. laeve), is the dominant plant species and important for vegetation restoration in the Mu Us sandland. To investigate whether clonal integration can increase the threshold of sand burial and help rhizomatous H. laeve tolerate heavy sand burial, we conducted a field experiment. The results showed that slight sand burial could accelerate ramet growth and enhance leaf biomass, stem biomass and shoot biomass, while heavy sand burial reducesed the biomass of the plant and impairs survival and growth of the ramets. Clonal integration increased the threshold of sand burial. Under heavy sand burial, ramets connected to other ramets not buried in sand were more in terms of height increment, stem biomass, leaf biomass and shoot biomass compared to the ramets encountering sand burial but disconnected from other ramets. It suggested that clonal physiological integration could help H. laeve ramets tolerate relatively heavy sand burial. We also discussed that clonal integration plays a role in H. laeve presence in the Mu Us sandland. __________ Translated from Journal of Plant Ecology (formerly Acta Phytoecologica Sinica), 2006, 30(2): 278–285 [译自: 植物生态学报]     

应用叶绿素荧光法测定微藻生物量的方法

为了探求叶绿素荧光值与海洋微藻生物量的关系,利用TD-700型叶绿素荧光仪测定了6种典型海洋赤潮藻在不同生长期(指数生长期和稳定生长期)时的叶绿素荧光值,同时用传统方法测定细胞密度,且利用Leica Qwin软件测量细胞大小。结果显示:微藻在同一生长时期细胞密度与叶绿素荧光值存在极显著的正相关关系,不同生长时期细胞密度也与单位叶绿素荧光值存在较显著正相关关系。因此,利用叶绿素荧光仪测定微藻生物量的方法是切实可行的,具有快捷方便、灵敏度高、可靠性强的优点。     

1981～2005年中国H1N1甲型流感病毒血凝素基因的HA1演变特征

为了解1981~2005年我国H1N1甲型流感病毒血凝素基因的HA1演变特征,选取H1N1甲型流感病毒370株,提取病毒RNA,经逆转录和聚合酶链反应扩增HA1并测序,测定的序列用生物信息软件分析,与GenBank中相关序列比较,并对推导的编码氨基酸序列进行基因特性分析。结果表明:HA1氨基酸的变异表现为抗原决定簇4个区均有变异,Sb区和Ca区变化较大;HA1受体结合位点(RBS)的前壁130环的第134位赖氨酸从1991年起在部分毒株HA1序列上开始缺失,以后缺失株逐步增多,自2000年起测定的所有毒株上该氨基酸全部缺失,同时这些缺失株的第137位氨基酸也全部由苏氨酸替换为丝氨酸;糖基化位点从增多到减少,最后稳定在7个;1981~2004年我国H1N1甲型流感病毒血凝素HA1编码的氨基酸在种系发育树上同年代基本呈现集中分布,与时间和地域无关,2005年毒株分成两个分支在时间上有明显差异。     

人GDNF基因在昆虫细胞中的高效表达

应用昆虫杆状病毒表达系统在昆虫细胞Ｔｎ－５Ｂ１－４中高效表达了人胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）,ＰＡＧＥ分析表达量占细胞可溶性蛋白质的３０％左右,表达产物经亲和层析纯化后纯度达８０％以上,活性研究表明,昆虫细胞表达的ＧＤＮＦ蛋白能显著促进多巴胺能神经元的存活,此研究为进一步研究ＧＤＮＦ结构与功能打下了良好的基础。