利用短短小芽孢杆菌启动子和信号肽编码序列构建穿梭分泌表达载体

以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板,利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列,测序分析后提交GenBank,登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点,将PCR产物双酶切后克隆至穿梭载体pP43NMK的相应位点构建分泌表达载体pP15MK,插入片段置于该载体中mpd基因的上游,并使信号肽编码序列与去除了自身信号肽编码序列的mpd基因阅读框恰好融合。将pP15MK导入枯草杆菌构建表达菌株1A751(pP15MK),在短短小芽孢杆菌启动子和信号肽元件的带动下,mpd基因能够在表达菌株的对数生长期和稳定期持续性高效分泌表达,表达产物结合在细胞膜上;发酵液在48h酶活达到最高值7.79U/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的8.1倍。     

胸腺素α原体外诱导小鼠胸腺细胞凋亡的初步探讨

胸腺细胞经ProTα和/或氢化考的松处理以后,采用PI染色法检测亚二倍体细胞百分率、荧光光度计检测细胞内游离Ca~(2 )浓度及琼脂糖凝胶电泳定性检验DNA片段化。结果发现单独或与氢化考的松联合应用,ProTα均可明显促进DNA片断化、提高亚二倍体细胞百分率并且也明显提高细胞内游离Ca~(2 )浓度。本实验说明ProTα能促进胸腺细胞的凋亡。     

质膜Ca2+-ATPase的结构与功能

质膜Ca2+-ATPase (PMCA)是P型ATPase家族的一员,在真核细胞中主要负责信号刺激后胞内高浓度Ca2+的清除扫尾工作,并对维持静息状态下较低Ca2+浓度起着重要的调节作用.PMCA的一级结构已被确定,拓扑学结构显示,它有10个跨膜区和3个胞浆功能区.它的4个编码基因可产生4种亚型(PMCA 1~4),这些亚型在功能与分布上存在差异.PMCA的活性可被钙调蛋白等多种因素调节,这与其结构特征息息相关.近年来,PMCA已被证实与脂筏结构有一定关联,它在信号传导和细胞凋亡中的作用也成为目前科学研究的焦点.本文主要对PMCA的结构、亚型和功能的研究现状进行综述.     

早期人胚胎cDNA文库构建及目的基因筛选

收集受精后３、４和５周龄药物流产胚胎,用改良一步法提取总ＲＮＡ,ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素柱纯化ｍＲＮＡ,逆转录合成一链ｃＤＮＡ,完成二链ｃＤＮＡ的合成后,经碱变性电泳检测,合成ｃＤＮＡ的大小为０．４～９．０ｋｂ之间,且主要集中在１．０～２．０ｋｂ。除去多余的接头,收集大于４００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,与载体ｐＳＰＯＲＴ１和和γＺｉｐＬｏｘ连接,分别得到３、４、５周龄人胚胎质粒文加和噬菌体文库。另外,采     

孢子丝菌复合体分子分型研究进展

孢子丝菌复合体属于双相真菌,全球分布,可引起人类及动物的慢性深部感染。不同地域的菌株在致病力、传播途径及药物敏感性等方面均存在差异。孢子丝菌病作为一种人兽共患病,其发病率逐年上升,出现多次暴发流行。分子分型不仅是明确感染源和传播途径、预防和控制疾病流行的有力手段,同时有助于了解孢子丝菌基因型与表型的相关性,在研究其致病机制以及临床诊治过程中都具有十分重要的意义。本文对孢子丝菌的分子分型方法的研究进行综述。     

干预措施对噪声污染大鼠脑组织基因表达及去甲肾上腺素水平的影响

为了探索干预措施对噪声污染大鼠脑组织基因表达水平的影响, 将50只SPF级Wistar大鼠随机分为空白对照组、噪声污染组(分为30、60、80 dB三个组)、干预组(利血平+80 dB), 每组10只动物。每天刺激1次, 每次刺激30 min, 连续刺激15 d。第16天解剖出脑组织用酶联免疫吸附法(ELISA)检测基因表达水平。结果发现, 噪声污染组大脑前额叶皮质(PFC)和海马(Hipp)组织中去甲肾上腺素(noradrenaline,NA)水平比对照组分别升高了22.87%、50.35%、94.65%和 12.00%、31.76%、61.83%; 干预组NA水平比对照组分别降低了33.66%和52.06%; 去甲肾上腺素转运蛋白(noradrenaline transporter, NAt)水平比对照组分别升高了22.87%、50.35%、94.65%和12.00%、31.76%、61.83%, 干预组NAt水平比对照组分别降低了33.66%和52.06%; 脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)水平比对照组分别升高了24.87%、39.27%、67.41%和44.97%、80.81%、95.84%, 干预组BDNF水平比对照组分别升高了16.36%和14.34%, 升高程度明显低于噪声污染组; 酪氨酸激酶受体B(Tyrosine kinase B, TrkB)水平比对照组分别升高了32.64%、59.95%、82.64%和31.02%、57.31%、80.23%, 干预组TrkB水平比对照组分别升高了4.75%和10.52%, 升高程度明显低于噪声污染组。结果显示, 噪声污染使动物体内去甲肾上腺素等水平升高, 去甲肾上腺素是噪声污染引起组织器官损伤的主要因素, 脑源性神经营养因子和酪氨酸激酶受体B防止神经元受损死亡, 改善神经元的病理状态, 利血平使去甲肾上腺素耗竭, 保护组织器官免受噪声污染的损伤。     

miRNA-20a促进卵巢癌细胞OVCAR3的转移

目的检测miRNA．20a对卵巢癌细胞系OVCAR3转移能力的影响。方法通过实时定量RT-PCR验证反义寡核苷酸与小干扰RNA封闭与过表达的效果,然后利用MTF、软琼脂集落形成和transwell侵袭实验检测封闭和过表达miRNA．20a对OVCAR3细胞增殖及转移能力的影响。结果封闭内源性miRNA-20a后,细胞活性基本不受影响,但集落形成能力和细胞的转移能力明显降低。过表达miRNA-20a后,细胞活性基本不受影响,但集落形成能力和细胞的转移能力明显升高。结论miRNA-20a可能参与了卵巢癌细胞OVCAR3的转移。     

Nicotianamine,a Novel Enhancer of Rice Iron Bioavailability to Humans

Background

Polished rice is a staple food for over 50% of the world''s population, but contains little bioavailable iron (Fe) to meet human needs. Thus, biofortifying the rice grain with novel promoters or enhancers of Fe utilization would be one of the most effective strategies to prevent the high prevalence of Fe deficiency and iron deficiency anemia in the developing world.

Methodology/Principal Findings

We transformed an elite rice line cultivated in Southern China with the rice nicotianamine synthase gene (OsNAS1) fused to a rice glutelin promoter. Endosperm overexpression of OsNAS1 resulted in a significant increase in nicotianamine (NA) concentrations in both unpolished and polished grain. Bioavailability of Fe from the high NA grain, as measured by ferritin synthesis in an in vitro Caco-2 cell model that simulates the human digestive system, was twice as much as that of the control line. When added at 1∶1 molar ratio to ferrous Fe in the cell system, NA was twice as effective when compared to ascorbic acid (one of the most potent known enhancers of Fe bioavailability) in promoting more ferritin synthesis.

Conclusions

Our data demonstrated that NA is a novel and effective promoter of iron utilization. Biofortifying polished rice with this compound has great potential in combating global human iron deficiency in people dependent on rice for their sustenance.