全文获取类型
收费全文 | 11531篇 |
免费 | 1174篇 |
国内免费 | 2497篇 |
出版年
2024年 | 35篇 |
2023年 | 172篇 |
2022年 | 331篇 |
2021年 | 492篇 |
2020年 | 419篇 |
2019年 | 511篇 |
2018年 | 435篇 |
2017年 | 385篇 |
2016年 | 441篇 |
2015年 | 676篇 |
2014年 | 843篇 |
2013年 | 856篇 |
2012年 | 1121篇 |
2011年 | 1071篇 |
2010年 | 714篇 |
2009年 | 689篇 |
2008年 | 785篇 |
2007年 | 707篇 |
2006年 | 617篇 |
2005年 | 576篇 |
2004年 | 460篇 |
2003年 | 424篇 |
2002年 | 391篇 |
2001年 | 251篇 |
2000年 | 273篇 |
1999年 | 180篇 |
1998年 | 149篇 |
1997年 | 86篇 |
1996年 | 99篇 |
1995年 | 98篇 |
1994年 | 82篇 |
1993年 | 67篇 |
1992年 | 78篇 |
1991年 | 67篇 |
1990年 | 62篇 |
1989年 | 46篇 |
1988年 | 51篇 |
1987年 | 48篇 |
1986年 | 37篇 |
1985年 | 42篇 |
1984年 | 36篇 |
1983年 | 30篇 |
1982年 | 33篇 |
1981年 | 24篇 |
1980年 | 15篇 |
1979年 | 19篇 |
1977年 | 18篇 |
1974年 | 16篇 |
1972年 | 16篇 |
1971年 | 14篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 15 毫秒
91.
化学突变具有底物结合部位的单克隆抗体制备含硒抗体酶 总被引:3,自引:1,他引:2
开发了一种制备抗体酶的新方法。用二硝基氯苯(DNCB)专一地与谷胱甘肽(GSH)的巯基反应,合成出半抗原GSH-S-DNP。用戊二醛将半抗原偶联到牛血清白蛋白(BSA)上,制成全抗原。再用标准的单抗制备法获得具有GSH结合部位的单抗(4A4IgG)。用苯甲基磺酞氟(PMSF)和H2Se相继处理该单抗,则将单拉结合部位上的丝氨酸(Ser)突变成硒代半胱氨酸(SeCys,因而在单抗结合部位上引入了谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的催化基团。突变后的单抗具有GPX活性,其活力已达到天然GPX的数量级水平。动力学行为也与天然GPX类似。这种新的含硒抗体酶有优于GPX的一些特点。 相似文献
92.
利用标记N-糖链的凝集素亲和层析法研究了佛波醇肉桂酸乙酸酯(PMA)对人肝癌细胞SMMC-7721表面糖蛋白上N-糖链结构的影响,发现100nmol/L的PMA处理5天后,可使细胞表面N-糖链中高甘露糖型和杂合型以及四天线、C2C2,6三天线复杂型的比例增高,而二天线复杂型降低。此结果与我们曾报道的视黄酸(RA)和双丁配环磷酸腺苷(db-cAMP)对该细胞表面N-糖链的影响相反。因RA和db-cAMP是SMMC-7721细胞的分化诱导剂,可抑制细胞生长;而PMA是该细胞的增殖促进剂,故细胞表面N-糖链的变化与细胞的分化和增殖密切相关。 相似文献
93.
RGDS肽对大鼠主动脉球囊内膜剥脱后血管壁增殖的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
在大鼠主动脉球囊内膜剥脱术后血管壁细胞过度增殖模型上,用合成的血小板膜纤维蛋白原受体(glycoproteinⅡb/Ⅲacomplex,GPⅡb/Ⅲa)拮抗剂RGDS(Arg-Gly-Asp-Ser,50μmol·kg-1·d-1)治疗可有效地抑制损伤血管壁的细胞计数增加和内膜增厚以及血管平滑肌细胞增殖,显著降低其血管组织3H-TdR和3H-Leu的参入增加程度。实验结果提示RGDS肽作为血管成型术的辅佐剂,对于防治血管再狭窄可能具有潜在的临床应用前景。 相似文献
94.
麻疹疫苗生产连续培养多次收获工艺研究 总被引:1,自引:1,他引:0
本研究对连续培养多次收获工艺用于麻疹疫苗生产的可行性、疫苗维持液保护剂、冻干保护剂及冻干过程等进行了大量反复试验,结果表明在现行条件下,本生产工艺具有重复性好、成本低、投入产出率高、易于质量控制等优势。对本工艺生产疫苗进行全面检定,表明成品滴度和稳定性试验指标等均高于90版《生物制品规程》要求,并在试验基础上制定出了生产工艺流程。 相似文献
95.
96.
本文报导了胰腺提取物中两种可被钙/钙调素依赖性蛋白激酶磷酸化的热稳定蛋白。SDS-PAGE测定其表观分子量分别为17.7kD和6kD。经钙/钙调素依赖性蛋白激酶磷酸化后,其最大磷酸参入量为8.8μmol/g蛋白。同时磷酸化作用导致17.7kD蛋白在SDS-PAGE中迁移率发生变化。本文还进一步分析了各种阳离子对磷酸化的影响,并对此两种蛋白可能具有的生理功能进行了初步探讨。 相似文献
97.
Substrate induction and metabolite accumulation during anaerobic toluene utilization by the denitrifying strain T1. 总被引:7,自引:6,他引:1 下载免费PDF全文
The denitrifying strain T1 utilizes toluene anaerobically. We now report that anaerobic toluene degradation is inducible in strain T1. Fluoracetate treatment of cell suspensions inhibited both the rate of toluene metabolism and the formation of the toluene dead-end products benzylsuccinate and benzylfumarate, which is consistent with the pathway proposed by Evans et al. (Appl. Environ. Microbiol. 58:496-501, 1992). In addition, when either nitrate was limiting or fluoroacetate was added, benzoate was detected during toluene metabolism. 相似文献
98.
【目的】葡聚糖酶是饲用添加剂的重要成分,本研究旨在从湖羊消化道微生物中挖掘性质优良的GH9家族葡聚糖酶基因,用于研发新型饲用酶制剂。【方法】从湖羊瘤胃微生物cDNA中扩增IDSGLUC9-25基因,在大肠杆菌中进行异源表达,对重组蛋白进行诱导表达和纯化,研究重组蛋白的酶学性质和底物水解模式。【结果】IDSGLUC9-25基因编码527个氨基酸,包含一个CelD_N结构和一个GH9家族催化结构域;重组蛋白rIDSGLUC9-25分子量约为62.7 kDa,最适反应温度和pH分别为40℃和6.0,在30-50℃下活性较高,在pH 4.0-8.0范围内能够保持较高的稳定性,经pH 4.0-8.0缓冲液处理1 h后残余活性均大于90%;底物谱分析表明,rIDSGLUC9-25能催化大麦β-葡聚糖、苔藓地衣多糖、魔芋胶和木葡聚糖,比活性分别为(443.55±24.48)、(65.56±5.98)、(122.37±2.85)和(159.16±7.73) U/mg;利用薄层色谱法(thin layer chromatography, TLC)和高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)分析水解产物发现,rIDSGLUC9-25降解大麦葡聚糖主要生成纤维三糖(占总还原糖64.19%±1.19%)和纤维四糖(占总还原糖26.24%±0.12%),催化地衣多糖主要生成纤维三糖(占总还原糖78.46%±0.89%)。【结论】本研究报道了一种来自密螺旋体属细菌的内切β-1,4-葡聚糖酶IDSGLUC9-25 (EC 3.2.1.4),能高效催化多糖底物生成纤维三糖和纤维四糖,为研发饲用酶制剂和制备低聚寡糖建立基础。 相似文献
99.
本文就HHT、RA、WB_(852)对HL-60细胞的诱导分化作用及此过程中PKC活力在细胞胞浆部分及膜溶脱部分的变化进行研究。结果表明,在适当的用药浓度下,从细胞生长抑制情况、形态学观察及NBT还原能力测定判断,三种药物对HL-60细胞有明显的诱导分化作用。PKC活力分布变化的研究结果表明,用药组细胞胞浆部分酶活力有不同程度的下降,尤在用药早期(约6h以前)下降显著;而膜部分PKC活力则表现上升、或下降,或活力相差不大的结果。暗示在信息传递过程中起核心作用的PKC对不同的胞外刺激可能采取不同的应答方式。PKC的作用可能主要发生在信息传递的早期。 相似文献
100.
轮状病毒(RV)的细胞培养问题的尚未完全解决,其原因之一可能与敏感细胞较少有关。为此,我们进行了RV新敏感细胞的筛选,发现恒河猴胚肾传代细胞Frhk-4感染不同血清型的人和动物RV标准株Wa、DS-1、YO、ST-3、SA-11和UK,37℃旋转或静止培养均能产生明显CPE。培养物经ELISA测定含RV抗原,用PAGE检测有特征性RV核酸图型,电镜超萍切片检查感染细胞可见RV颗粒,证实Rrhk-4是RV的敏感细胞,这在国内外尚未见报道。同时与MA104-CV-1细胞的比较研究证明,三种细胞对Wa和DS-1的敏感性及增殖滴度,以CV-1最高,Frhk-4次之,MA-104最低。 相似文献