短发夹 RNA 介导 RNA 干扰的时间 和剂量效应研究

用 RNA 干扰 (RNA interference , RNAi) 技术抑制哺乳动物细胞中外源报告基因的表达,以探讨该过程中 RNAi 作用的剂量和时间效应 . 应用 Lipofectamine 2000 将外源报告基因的表达载体与编码短发夹 RNA (short hairpin RNA , shRNA) 的质粒共转染 HEK293H 细胞,观察 shRNA 载体对报告基因的抑制效应 . 转染后, shRNAs 的瞬时表达可特异地抑制细胞内报告基因的表达 . 在共转染后 12 , 24 , 48 , 60 , 72 , 96 h 时检测 EGFP (enhanced green fluorescent protein , EGFP) 基因 mRNA 及蛋白质表达水平,结果显示, EGFP mRNA 及蛋白质表达在 12 h 时略有降低, 24~48 h 时表达逐渐降低, 48~72 h 时降低最明显,其后 EGFP 表达水平逐渐恢复 . 提示该过程中 RNAi 效应呈现由弱到强、又由强到弱的逐渐消逝趋势 . 共转染一系列剂量比例的 EGFP 干扰载体与靶载体的结果表明,在一定剂量范围内, RNA 干扰载体所介导的抑制效应与干扰载体剂量大小有关,当其剂量进一步加大足以抑制外源基因表达时,抑制效应则维持在一“平台期” . 此外,通过 RNAi 抑制 HeLa 细胞、 HEK293 细胞中荧光素酶基因的表达, 荧光素酶活性变化也表现出上述类似的效应 . 这些结果表明,在体外哺乳动物细胞中,基于表达载体的 RNAi 作用呈现剂量和时间依赖性效应 . 这为基于载体表达的 RNAi 技术应用研究提供了一定的理论参考及依据 .     

慢性病毒性肝炎研究进展

近年,慢性病毒性肝炎研究领域有较大进展,慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染,虽然有了应用广泛、历史较久、且效果较好的疫苗,但迄今仍是世界范围肝硬化和肝癌的主要诱因。传染途径可经产道、性接触和非肠道途径（包括静脉吸毒、血制品等）。成年病人有少有变慢性,但一岁以下患儿90％变成慢性肝炎。慢性肝损伤的临床表现可以是轻微的炎症重到晚期肝硬化,程度不等。α干扰素（IFNα）是治疗活动性肝炎的产宰药物,单核苷酸类药物（lamivudine和adefovir）也具有同样的疗效。晚期肝病和肝癌患者可进行移植,但异常伴发移植物的感染。乙型肝炎免疫球蛋白和新型抗病毒药物联合应用,可降低移植物感染的严重性。丙型肝炎病毒（HCV）在20世纪后期感染了大约1％的世界人口。这中RNA病毒非经口传播,绝大多数病人变成慢性肝炎,约20％逐渐演变成肝硬化或肝癌。用IFNα和病毒唑（Ribavirin）联合治疗,约40％病人的病理表现有所改善。肝移植对某些病例是适宜的,但移植物感染仍是悬而未决的问题,新发现的庚型肝炎病毒（HGV）和TT病毒目前认为并不引起严重的肝损害。     

两个弥漫性掌跖角化病家系的病理特征与基因突变分析

为了明确两个弥漫性掌跖角化病家系的临床、病理特征、角蛋白9在局部组织中的表达情况及KRT9基因的突变, 对2名先证者的手掌皮肤进行组织病理学、免疫组织化学分析, 并用聚合酶链反应技术及直接测序分析的方法, 对家系中46名成员的KRT9基因进行突变分析。发现两名先证者的表皮都呈显著的角化过度, 颗粒层和棘层明显增厚, 真皮浅层有轻度的炎症细胞浸润, 上基底的棘层和颗粒层的角质形成细胞中都有特征性的空泡变性存在; 角蛋白9只在棘层和颗粒层的角质形成细胞中特异性表达; 两个家系患者分别存在KRT9基因的点突变N160S和L167S; 说明这两个家系都属于表皮松解性掌跖角化病家系, KRT9基因N160S和L167S突变分别导致这两个家系发病。     

蛋白质序列与EST序列的反翻译联配

随着大规模技术的进步,收录到数据库中的序列很快,其中大多是未知功能的ＥＳＴｓ（表达序列标签,Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｔａｇｓ）,一般通过蛋白南－ＥＳＴ序列联配来实验ＥＳＴ的功能提示。由于ＥＳＴ含有５％左右的误差,特别严重的是其中的移框误差,用通常的方法将ＥＳＴ按６个框翻译为蛋白南序列再进行联配难以处理移框误差问题。通过考虑ＥＳＴ序列各种可能的误差,将氨基酸序列反翻译为核苷酸序列,在核     

脑缺血损伤时脑片细胞内Ca2+及脂质过氧化物的测定

用插细法制作局灶性脑缺血／再灌损伤模型,激光共聚焦扫描显微镜观察活体脑片细胞内Ｃａ＾２＋的分布及脂质过氧化物水平的动态变化,结果表明：缺血１ｈ时只有纹状体Ｃａ＾２＋含量增加,而缺血４ｈ时梗塞侧皮质、纹状体区域的Ｃａ＾２＋与脂质过氧化物含量均进一步增高,且与缺血时间相关,而与再灌持续时间无明显关系;轻度缺血／再灌损伤时细胞内脂质过氧化物增加的发生较增钙反应为早;纹状体对缺血／再灌损伤比皮质敏感。     

应用ATR-FTIR研究二种皮肤渗透促进剂的作用机理

应用衰减全反射傅立叶红光谱（ＡＴＲ－ＦＴＩＲ）为检测手段,通过测定人体在体皮肤表面不同深度角质层的ＣＨ２－收缩振动峰的波数位移和角质层中脂质的分布,来考察二常用皮肤渗透促进剂油酸（ＯＡ）和月桂氮卓酮（Ａｚｏｎｅ）对角层固有脂质的影响。以探索渗透促进剂在人体皮肤角质层中的作用机理。二种渗透促进剂均使得ｖａｓＣＨ２－和ｖｓＣＨ２－发生蓝移,但Ａｚｏｎｅ的作用更强。ＯＡ和Ａｚｏｎｅ对皮肤角质层深部的脂质     

江苏泰县五通组观山段胞石Grahnichitina pilosa的发现及其意义

根据江苏泰县Ｎ－４井五通组观山段顶部的胞石Ｇｒａｈｎｉｃｈｉｔｉｎａ ｐｉｌｏｓａ的发现,确定观山段的时代为中泥盆世吉维特期。据此认为：擂鼓台段的两层暗色泥岩,应分别对比为南洞页岩、长顺页岩;中泥盆世大海侵时,华南海沿苏皖河经皖南、苏南入侵苏北。对Ｇｒａｈｎｉｃｈｉｔｉｎａ ｐｉｌｏｓａ进行描记和讨论。     

中国厉螨科二新种记述(蜱螨亚纲:革螨股)

记述厉螨科Ｌｅａｌａｐｉｄａｅ Ｂｅｒｌｅｓｅ,１８９２二新种：拟巴阳厉螨Ａｎｄｒｏｌａｅｌａｐｓ ｓｕｂｐａｖｌｏｖｓｋｉｉ Ｌｉｕ,Ｍａ ｅｔ Ｄｉｎｇ,ｓｐ．ｎｏｖ．和峡江广厉螨Ｃｏｓｍｏｌａｅｌａｐｓ ｘｉａｊｉａｎｇｅｎｓｉｓＬｉｕ ｅｔ Ｍａ,ｓｐ．ｎｏｖ．,文中详细描述了新种形态特征,并与相近种作比较。     

鱼呼肠孤病毒诱导草鱼肾细胞凋亡

采用荧光显微镜、电子显微镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪分析等技术研究鱼呼肠孤病毒诱导草鱼细胞（ＣＩＫ）调亡。结果显示,鱼呼肠孤病毒感染ＣＩＫ细胞后,光镜下可见空斑形成;荧光染色观察到细胞调亡碎裂核;且电镜下呈现细胞核裂解,核周裂隙增大,细胞膜内陷并出泡形成调亡小体现象;琼脂糖凝胶电泳出现１８０－２００ｂｐ整数倍的ＤＮＡ梯形带;流式细胞仪检测到典型的细胞调亡峰,在病毒感染４８ｈ,细胞调亡百分率达１５     

植物叶片蛋白质双向电泳技术的改进与优化

通过对传统的双向电泳方法进行改进与优化,得到了一种适合于分析植物叶 片蛋白质的双向电泳新方法。用改进后的方法对水稻不同时期成熟叶片蛋白质进行双向电泳分离,结果显示其稳定性和重复性好,分辨率较高,经考马斯亮蓝染色后可分辨出300多个蛋白质(肽)点。它们的等电点和分子量主要分布于pI4.1-8.2和10-100kDa之间。本文还就实验过程中出现的一些技术问题进行了讨论。 Abstract:Base on the method of O farrell,an improved procedure for the two-dimensional gel electrophoresis of leaf proteins is presented.The two-dimensional separation of proteins from the mature leaves of different developmental stages of rice provides distinct and steady results.The detected protein(peptide)spots stained by Coomassie brilliant blue R-250 are more than 300,with isoelectric points(pI)ranging from 4.1 to 8.2 and molecular weights(MW)from 10 kDa to 100 kDa.