辽东山区典型人工针叶林土壤细菌群落多样性特征

为揭示不同人工林树种对土壤养分和土壤微生物群落的影响,采用Illumina MiSeq高通量测序和OTU分析法比较辽东山区白石砬子自然保护区落叶松人工林(LGe)和红松人工林(PKe),以及辽宁省森林经营研究所实验林场落叶松人工林(LGd)和红松人工林(PKd)土壤细菌群落结构的差异,同时测定土壤理化性质,探讨土壤细菌群落结构、树种和土壤环境因子的相关性。研究结果表明:(1) LGe和PKe土壤全碳、全氮和碱解氮的含量无显著差异,LGd显著高于PKd。(2)从群落组成来看,该地区落叶松和红松人工林中土壤主要由34个门类群的菌群组成,优势菌群包括变形菌门、放线菌门、酸杆菌门、绿弯菌门、疣微菌门和芽单胞菌门。(3)从群落结构来看,LGe和PKe土壤细菌的多样性和丰富度指数无显著差异,PKd的多样性指数显著极高于LGd,丰富度指数无显著差异,且Metastats分析结果表明,较LGd和PKd相比,LGe和PKe在门水平和属水平上显著差异的个数较少,表现为趋同性。(4)优势细菌类群相对丰度和土壤理化性质的RDA和相关性分析表明,土壤p H、全氮、碱解氮的含量以及C/N是本区针叶林细菌群落结构的主要影响因子。综合分析表明,在保护区选择单一树种落叶松或红松造林对改善土壤养分及优化微土壤细菌群落结构无显著差异,而在实验林场选择落叶松更有利于提高土壤肥力。     

广东南岭国家级自然保护区大东山昆虫名录(Ⅰ)

报道广东南岭国家级自然保护区大东山管理站所辖林区蜻蜓目、蜚蠊目、螳螂目、等翅目、竹节虫目、直翅目和革翅目等7目昆虫名录,计有53科169属253种,其中蜻蜓目1种、竹节虫目8种、直翅目1种为本研究发现的新种。     

慢性乙型肝炎病毒耐药突变体研究

在治疗慢性乙型肝炎的核苷类似物的用药过程中,筛选耐药突变体.选定1名从未接受抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者,用抗病毒核酸类药物治疗,不同治疗时期提取血清HBV DNA,用引物P1(5′-AAGGG-TATCTTGCCCGTTTGTCGTA-3′)和P2(5′-AAGCAGGATAGCCACAGA-3′)为第1轮,P3(5′-AAGGCACTTGTAT-TCCCATCCGAG-3′)和P4(5′-AAGGTCTATTTACAGGGGA-3′)为第2轮引物扩增筛选耐药突变体.在18周和22周分别检测到突变体LMV rtH69T(YMDDlocus)和LMV rtT184T(YMDDlocus)、LMV rtM204I(YMDDlocus).在60周和70周分别检测到ADV T213S、ADV T222A、ADV K212T和ADV S196L、ADV S242H,其中ADV S196L和ADV S242H 2种突变体是首次检测到.HBV核苷酸类似物耐药突变体筛选,对研究HBV耐药的分子机制有帮助.     

RNA结合域决定JDV Tat具有较强的激活能力

为分析JDV与BIV、HIV-1 LTR和Tat相互激活能力差异的原因,在氨基酸序列对比及HIV-1 Tat功能域划分的基础上构建了JH、HJ、JB、BJ几种嵌合Tat蛋白,并克隆到真核表达载体.将上述表达质粒与以JDV、BIV和HIV-1 LTR为启动子,以luc为报告基因的质粒共转染Hela细胞,证实了三种不同Tat激活能力的差异主要来自其结合域RNA结合能力的差异,排除了结构域不完整和细胞因子缺乏造成JH不激活HIV-1 LTR的可能性.     

恩诺沙星对蛭弧菌生长及吸附的影响

本实验通过观察不同浓度恩诺沙星对固体培养条件下蛭弧菌产生噬斑和液体培养条件下蛭弧菌增殖的情况,以及蛭弧菌在不同浓度恩诺沙星下吸附到载体上的情况,研究了恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16生长及吸附的影响.实验发现:2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL和50μg/mL恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16噬斑的产生及增殖均具有抑制作用(P<0.05).在固体培养72 h后.随着恩诺沙星浓度逐渐增大,蛭弧菌BDF-H16产生的噬斑数目逐渐减少;在液体培养72 h后,随着恩诺沙星的浓度逐渐增高,蛭弧菌BDF-H16的增殖浓度不断减少,但10μg/mL恩诺沙星并没有改变蛭弧菌BDF-H16的生长趋势.此外,以沸石作为吸附载体,2μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL和50 μg/mL恩诺沙星降低了蛭弧菌BDF-H16吸附量,随着恩诺沙星浓度的增大,蛭弧菌BDF-H16的吸附量逐渐降低,而蛭弧菌BDF-H16的吸附率却在一定恩诺沙星浓度(2 μg/mL～20μg/mL)下却有所升高(P<0.05).以上结果表明,恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16噬斑的产生及增殖具有抑制作用,但在有载体存在的情况下,蛭弧菌的吸附能力在一定恩诺沙星浓度范围内有所增强,添加载体沸石有助于降低恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16的不良影响.     

特异性卵黄抗体(IgY)对小鼠内毒素血症的保护作用

目的:研究特异性卵黄抗体(Egg yolk immunoglobulin,IgY)对小鼠内毒素血症的保护作用.方法:以灭活的E.coli O111免疫产蛋母鸡制备特异性IgY抗体.ELISA法检测对E-coli O111及内毒素(Lipopolysaecharide,LPS)的结合活性.腹腔注射LPS(2mg/m1),0.1 ml/10g体重,建立小鼠内毒素血症模型.小鼠随机分为5组,分别给药保护:空白组(生理盐水)、阴性对照组(非特异性IgY,20mg/ml)、阳性对照组(头孢哌酮钠,20mg/ml)、高剂量组(特异性IgY,40mg/m1),低剂量组(特异性IgY,20mg/ml).给药剂量为:攻毒前,0.15 ml/l0 g体重,24 h一次,共两次;攻毒后,0.25 ml/10 g体重,24 h一次,共7次.观察小鼠一般情况,体重变化,外周血中白细胞(WBC)和血小板(PLT)数的变化及各组小鼠的死亡率.结果:特异性IgY与E.coli O111及LPS均有体外结合活性.LPS感染后,各组小鼠外周血中WBC和PLl均有不同程度的下降,体重下降.特异性抗体保护组各指标较快恢复到正常水平,其他组恢复缓慢.各组小鼠七天内死亡率分别为:空白组,100%;阴性对照组,85%;阳性对照组,30%;低济量组,30%;高剂量组,0%.结论:特异性IgY对内毒素血症小鼠有保护作用.     

基于SOS反应及氧化应激反应相关启动子的辐射生物传感器研究

近年来的动物实验结果表明电磁辐射的危害主要是具有神经系统毒性、诱发肿瘤和生殖系统损伤等,广域、隐蔽和累积效应是辐射的特点,除对机体进行直接损伤外,还可导致间接损伤,即通过产生活性氧(ROS)和自由基攻击生物大分子。为了迅速和简便地检测辐射毒性的大小建立了新型的辐射生物传感器,构建了携带SOS反应和氧化应激反应相关的SulA、RecA、Cda和SoxR四种启动子融合经过密码子简并性优化的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告因子的工程菌传感器,并对这些生物传感器进行了γ射线辐照处理,筛选出了针对γ射线响应较好的,优选RecA工程菌传感器。利用PCR和Overlap PCR克隆获得了启动子-报告因子融合基因,并插入表达载体PUC19中,转化入宿主大肠杆菌DH5α,通过提取质粒进行双酶切和测序验证后,将构建成功的工程菌传感器首先进行化学毒性试剂刺激,一旦化学试剂刺激结果阳性便进行物理辐射刺激。结果显示,构建成功的4种工程菌传感器均对物理辐射产生应答,且随物理辐射剂量的增加(0～30Gy),绿色荧光强度逐渐增强。运用合成生物学手段,成功建立基于生物损伤修复效应和氧化应激反应的辐射生物传感器,具有制备简便、结果可视性等优点,能满足快速、广范围、在线监测的需求,在细胞毒性物、辐射环境乃至空间射线的损伤能力测定方面具有良好的应用前景。     

驱虫斑鸠菊对人黑素瘤细胞增殖酪氨酸酶及黑素生成影响的研究

探讨驱虫斑鸠菊对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成以及细胞内酪氨酸酶的作用。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定药物对细胞增殖的影响;采用酶学方法研究药物对酪氨酸酶活性的影响;475nm比色法测定黑素含量。结果表明驱虫斑鸠菊可以增强A375人黑素瘤细胞增殖,提高酪氨酸酶和黑色素合成能力。说明驱虫斑鸠菊治疗白癜风是通过增强酪氨酸酶活性及促进黑素合成而发挥作用的。     

人脑内-含有ACP样结构域新基因的发现

为寻找脑内新基因,以正常成人全脑cDNA为模板,采用锚定PCR方法进行扩增,将经琼脂糖DNA电泳 鉴定获得的一约1200bp大小的特异性条带回收,并克隆入Teasy载体.用310 Genetic Analyzer进行自动测序. 所得序列进行生物信息学分析BLAST相似性分析结果证明所得序列为新序列,读框分析表明,该序列中存在 一完整编码区,编码含357个氨基酸的蛋白质.ProDom软件分析发现其含有酰基携带蛋白(ACP)样结构域. 随后,经3'RACE法克隆到该基因的全长cDNA,其全长为2024bp,染色体定位在14q11.2,含有16个外显子, 15个内含子,该基因已登录到GenBank.经设计编码区引物,从Teasy载体扩增出编码区后再克隆入pGEX-4T1 表达载体,经异丙基硫代-D-乳糖苷(IPTG)化学诱导表达.其编码区克隆人pGEX-4T1表达载体后,转入 JM109宿主菌,经IPTG诱导已得到表达.点杂交及RNA印迹表明,该基因在正常成人脑内广泛高表达.     

孕小鼠注射海洛因对仔鼠体重、行为及肺中相关活性物质表达的影响

为了探讨海洛因对仔鼠行为、体重及肺发育中KGF、c-Fos蛋白和Bax蛋白表达的影响,对4组共48例受孕小鼠(Mus musculus)从第8 d开始,每天早晚分别注射0.2 ml浓度为1.0 g/L、1.5 g/L和2.0 g/L的海洛因溶液和等量的生理盐水直到小鼠分娩,观察测量仔鼠行为及体重变化,采用免疫组织化学染色和体视学半定量方法检测15 d胚胎、出生后1 d.7 d、15 d仔鼠的肺中KGF、c-Fos蛋白和Bax蛋白表达情况.结果表明,海洛因影响仔鼠的行为活动,实验组各发育期仔鼠的体重明显低于对照组,海洛因组各发育期仔鼠肺中KGF、c-Fos蛋白和Bax蛋白的表达强度与对照组相比显著增强(P＜0.01或P＜0.05),且随海洛因浓度的增大表达越强,但随着发育的进行,海洛因组仔鼠肺中KGF、c-Fos蛋白和Bax蛋白的阳性表达减弱.海洛因影响仔鼠的行为与体重,海洛因对各发育期仔鼠肺的损伤可能与肺组织中KGF、c-Fos蛋白和Bax蛋白表达的增强有关.