SARS-CoV Sars7a和EGFP融合蛋白真核表达载体构建及其表达

根据SARS-CoV sars7a基因设计并化学合成部分重叠引物,经二轮PCR获得sars7a基因片段,以此片段为模板并利用一对带有Kozak序列及删除终止密码的引物进行PCR,获得产物与pEGFP-N1载体连接,使sars7a基因位于EGFP的基因上游,得到含编码Sars7a-EGFP融合蛋白基因的哺乳动物细胞表达载体.采用细胞核转染技术将重组表达载体转染K562细胞,以流式细胞仪和共聚焦显微镜分析,可检测到EGFP的绿色荧光,表明Sars7a-EGFP得到表达,该蛋白分布于整个细胞,提示Sars7a并非膜蛋白,更可能是胞浆蛋白.此外,该蛋白的表达对K562细胞凋亡无明显影响.     

放射性粒子碘125插置组织间治疗晚期肿瘤的临床疗效

目的:探讨放射性粒子碘125插置组织间治疗晚期肿瘤的疗效。方法:选择2008年7月至2011年4月经我院收治的晚期肿瘤患者95例,全部患者均经放射性粒子碘125插置组织间治疗,观察患者疗效、不良反应、免疫指标及肿瘤标志物水平,并随访6-24月观察患者生存率。结果:95例患者临床有效率为83.15%,其中CR 23例(24.21%),PR 56例(58.94%),PD 9例(9.47%),SD 7例(7.37%)。在碘125插置过程中出现7例气胸,术后出现2例咳血、1例排便困难和3例出现发热并伴穿刺处疼痛。全部患者治疗前后IgG、IgA和IgM水平无显著性变化(P0.05),而治疗后4周各病种晚期肿瘤患者相应肿瘤标志物水平显著低于治疗前,差异有统计学意义(P0.05)。53例肺癌患者中,半数生存期为20个月,术后1、2年生存率分别为86.79%和41.51%;而同期行姑息手术且未接受放射性粒子碘125插置组织间治疗的40例肺癌患者,半数生存期仅为12个月,术后1、2年生存率分别为57.50%和22.50%,两组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:放射性粒子碘125插置组织间治疗晚期肿瘤具有适应症广、安全性高、临床效果好和不良反应少等优点,还可提高晚期肿瘤患者的生存期。     

黑龙江省部分地区非综合性耳聋的分子病因学调查

目的:采用基因诊断的方法调查和分析黑龙江省部分地区非综合性耳聋(NSHL)的分子病因学。方法:调查对象为哈尔滨医科大学附属第四医院耳鼻咽喉科门诊收治的116例来自黑龙江省部分地区的散发非综合征型耳聋患者和29例听力正常样本,均经过纯音听阈、声导抗、耳声发射、听性脑干诱发电位等检查,其中51例属于重度或极重度感音神经性耳聋,采集其外周血并提取DNA行GJB2、Slc26A4、GJB3、SrRNA1555基因编码区测序。结果:与耳聋相关的基因突变位点主要为GJB2-235、Slc26A4-IVS7-2和GJB2-299,其中GJB2-235基因变异为最主要方式,约占总检出耳聋患者的45.2%,其次为该基因的299位点,突变比率为16.1%。另一个主要突变基因是Slc26A4,主要在IVS7-2位点发生突变,约占Slc26A4基因位点突变的84.6%,在整个耳聋基因突变群体中约占17.7%。但上述基因突变位点在29例听力正常样本中无发生。结论:黑龙江省部分地区NSHL患者存在GJB2-235、Slc26A4-IVS7-2和GJB2-299位点突变。     

一株奇异变形杆菌对铜绿假单胞菌多细胞行为的抑制作用

目的：抗生素耐药性成为了全球性的健康问题。研究发现病原菌的多细胞行为在抗生素的耐药性中起着至关重要的作用（尤其是生物膜）,因而通过抑制多细胞行为而控制耐药性成为当务之急。本文以奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）为研究对象,考察它的发酵滤液对一种机会致病菌——铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）多细胞行为的作用,以期得到一株多细胞行为抑制菌：在不影响Paerugiliosa生长的前提下,抑制生物膜形成、EPS产生以及定向丛集运动,解除保护,减缓扩散,为降低Paemgi—nosa耐药性,增强抗生素作用效果提供可能。方法：采用结晶紫生物膜测定法、蒽酮一硫酸法、平板检测法,探究Pmirabilis发酵滤液对Paemginosa生物膜、胞外多聚物、定向丛集运动和生长的影响。结果：Pmirabilis发酵滤液能显著抑制Paeruginosa生物膜量,在体积百分比浓度为1％时,抑制率可达60．9％。该菌的发酵滤液还能阻碍Paeruginosa的定向丛集运动,减弱它的吸附和扩散运动;同时,也减少了Pacrugillosa胞外多聚物的产量,在滤液体积百分比浓度为1％时,抑制率达到45．9％。更重要的是,固体平板实验证明该发酵滤液对P．aemginosa的生长没有影响。结论：Pmirabilis在不影响病原菌生长的前提下,对病原菌的多细胞行为有一定的控制作用。其发酵滤液中存在着抑制微生物膜、定向丛集运动等的成分,在治疗细菌感染性疾病和降低抗生素耐药性方面有潜在应用价值。     

中国的2个子囊菌新记录种

笔者在土壤中分离得到2株真菌,经培养、形态观察及rDNA序列分析,鉴定其为Aspergillus neobridgeri和Cladorrhinum bulbillosum,均为我国新记录种。文中对它们进行了详细的描述,并提供了显微结构图版。     

龙脑型阴香截顶采收技术研究

以2年生龙脑型阴香Cinnamomum burmannii chvar. Borneol幼林为研究对象,开展截顶采收技术试验,试验设置4个截顶高度,每个截顶高度内又采用3种下部枝条处理模式。通过对2个年度3次调查数据进行分析,结果表明树高、地径、冠幅和可蒸生物量4个性状不同区组间本底差异不大,处理后4个性状不同处理间差异显著加大,且均达极显著水平;多重比较也从本底的2个DUNNCAN分组提升至3～4个分组,且可以看出随着截干高度的提升,4个性状指标逐渐提升;在留枝方面,保留枝条越少,4个性状指标数值越小。因此,采收以120 cm高度截顶后保留下部枝条(H4-T1组合)为最佳处理。     

SNP分型前的PAGE检测

目的：探讨单核苷酸多态性(single nucleotide polymmphism,SNP)分型前聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyaerylamide gel electro—phoresis,PAGE)的作用。方法：对3个DNA片段(DAOA基因的片段E1和E2、RGS4基因的片段S4)的PCR产物先用PAGE分析,然后用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)分型,并比对结果。结果：PAGE能将片段E1、E2和S4中同一位点的SNP杂合子样本和纯合子样本区分开来,还能进一步将片段S4中SNP位点的2种不同纯合子样本区分开来。结论：PAGE能提高SNP的检测效率,而且具有成本低,操作简便的特点。     

白灵菇液体发酵工艺

以菌丝生物量为指标,探讨了白灵菇最适的液体发酵培养基和培养条件,结果表明:最适培养基为葡萄糖1.0%,玉米粉3.0%,酵母粉0.1%,黄豆粉2.0%,磷酸二氢钾0.15%,硫酸镁0.1%;摇瓶装液量80mL,接种量10%,起始pH为6.5,摇瓶转速160r/min。     

三峡水库及香溪河库湾理化特征的比较研究

根据2003年6月三峡水库初期蓄水后对香溪河库湾的常规监测,对该水域的理化特征及其动态进行了分析,并与三峡水库库首的数据进行了比较研究。结果显示库湾TN、NO3-N浓度要显著低于库首,前者两周年平均值为1.29mg/L,0.88mg/L,后者两周年平均值为1.62mg/L,1.22mg/L。而PO4-P则是库湾显著高于库首,并且在7—9月库首的TP/PO4-P有显著提高。结果同时表明库首的水土流失较严重,而库湾则有较好的水土保持。最后对TSIM的计算结果表明,由于TP、TN都处于高水平,库首呈现中营养化(TSIM>37),而库湾则呈现严重富营养化(TSIM>53)。     

广藿香精油对檀香粉蝶和荔枝卷叶蛾生物活性研究

试验采用不同浓度广藿香(Pogostemon cablin(Blanco)Benth.)精油,研究其对檀香粉蝶和荔枝卷叶蛾幼虫拒食和忌避作用。使用2.5~40 mg/mL广藿香精油分别对檀香粉蝶和荔枝卷叶蛾幼虫进行饲喂试验,檀香粉蝶幼虫的选择性和非选择性拒食率都为100%,荔枝卷叶蛾的选择性拒食率为18.36%~100%,24 h和48 h非选择性拒食率分别为51.45%~100%和53.34%~100%。忌避试验发现,随着浓度提高,忌避作用越强,其中最大忌避率分别为80.30%和93.81%;随着时间推移,各浓度精油对檀香粉蝶和荔枝卷叶蛾幼虫的忌避效应呈现不同程度的下降趋势。试验表明,广藿香精油对檀香粉蝶和荔枝卷叶蛾幼虫有较好的防治作用。