绿色木霉木聚糖酶的纯化和性质

绿色木霉木聚糖酶经分离纯化后,获得三个组分木聚糖酶,称为XⅠ,XⅡ和XⅢ,它们最反应温度分别为60℃、60℃、50℃,pH分别为5．5、5．0、0、4．5,pⅠ分别为XⅠ3．8,XⅡ3．4,XⅢ3．6。半失活温度分别为XⅠ37℃,XⅡ44℃,XⅢ40℃。     

团头鲂人工同源四倍体、自繁后代、倍间交配后代的染色体组型及形态遗传特征

以2n团头鲂为对照,对诱导产生的同源四倍体、自繁后代(4n-F1)和倍间交配后代(正交3n和反交3n)的染色体组型及形态遗传特征进行比较分析。结果发现:(1)团头鲂四倍体(包括4n和4n-F1)和正反倍间交配三倍体的染色体众数分别为96和72,是2n团头鲂的2倍和1·5倍;在四倍体团头鲂组型排列中,sm1的四条较大的染色体明显可见,可视为标记染色体;(2)9个比例性状的测量结果显示,多倍体的体长/体高、体长/头长比例值显著小于2n团头鲂(P<0·05);而对于背棘长/体长比例值,多倍体则显著大于2n团头鲂(P<0·05);(3)29个参数的主成分分析结果表明,团头鲂同源4n、4n-F1、倍间交配3n及2n团头鲂等5个不同倍性群体的传统形态差别很大部分是由躯干部的形态差异,主要是体长/体高引起的,可作为团头鲂多倍体与二倍体群体鉴别的形态依据;(4)聚类结果显示,正交3n和反交3n相聚类,亲缘关系最近,然后,它们与4n-F1聚类后,再与4n奠基群体聚类,与二倍体群体的聚类关系较远[动物学报51(3):455-461,2005]。     

巴斯德毕赤酵母表达的突变型人白细胞介素-2的发酵条件与纯化研究

在以前的研究中,通过蛋白质工程技术获得了三突变体白细胞介素_2基因(编码125位半胱氨酸→丙氨酸;18位亮氨酸→蛋氨酸;19位亮氨酸→丝氨酸) ,并在毕赤酵母中加以表达。进一步优化表达条件,其最适诱导条件:80 %以上的通气,诱导2d ,初始pH60 ,甲醇终浓度为10%。在上述条件下表达量占菌体总蛋白的30%以上,大约200mg L。建立了一套从毕赤酵母表达上清中分离纯化分泌型表达蛋白IL_2的方法,经离心,超滤浓缩,强阳离子交换S柱和分子筛层析得到纯化的突变型和野生型IL-2 ;其得率为27% ,纯度达电泳纯并且HPLC检测只有一个峰。纯化的突变蛋白对CTLL-2细胞具有刺激性;与野生型IL-2相比,在各种温度条件下储存的突变蛋白保留有更高的活性;突变型IL-2的活力是野生型的4～5倍,具有更高的利用价值。     

应用基因表达谱芯片从不同转移能力的 乳腺癌细胞中筛选转移相关基因

人乳腺癌细胞系 MCF-7 及其转移亚克隆 LM-MCF-7 为肿瘤转移分子机制的研究提供了细胞模型 . 应用基因芯片技术比较两种具有不同转移能力细胞系基因表达谱的差异,寻找乳腺癌转移相关基因 . 提取两种细胞总 RNA ,分别用 Cy5-dCTP 、 Cy3-dCTP 标记 LM-MCF-7 和 MCF-7 的 cDNA ,并与含有 21 329 个基因的芯片进行杂交并扫描,利用 GenePix Pro 4.0 图像分析软件处理数据判断基因是否在两个细胞中存在表达差异 . 经互换荧光标记物重复两次实验,共筛选出差异表达基因 67 个,其中 41 个在 LM-MCF-7 细胞中表达上调, 26 个在 LM-MCF-7 细胞中表达下调 . 应用实时定量 RT-PCR 对 7 个表达差异明显的基因进行了验证 . 生物信息学分析结果提示,上述发现的差异基因编码产物与细胞内信号转导、转录调节、应激反应、新陈代谢、发育、细胞运动、细胞凋亡和细胞粘连等功能有关 . 据文献报道,这些差异表达的基因中有 35 个与肿瘤有关,其中 9 个与乳腺癌转移有关, 6 个可能参与肿瘤浸润和转移过程 . 根据基因芯片检测的结果,从功能上对 LM-MCF-7 细胞和 MCF-7 细胞与细胞凋亡的关系进行了研究,发现具有高转移倾向的 LM-MCF-7 细胞与 MCF-7 细胞相比,抗凋亡能力较强 . 上述与肿瘤转移相关基因在肿瘤转移中的作用及其分子机理有待深入研究 .     

纳豆激酶的分离纯化及生化研究

用固体发酵工艺制得的纳豆中含有大量溶栓活性成分———纳豆激酶。经过生理盐水浸提 ,(NH4 ) 2 SO4 分级沉淀 ,Sephadex柱层析等步骤 ,可以得一层析纯的纳豆激酶。冷冻干燥品经SDS—PAGE电泳显示有二组分存在     

保安湖—湖湾大型水生植物群落格局的研究

用地质统计学中的半方差和双对数半方差图对保安湖-湖湾(黄风口)的大型水生植物群落格局进行了研究,在不同的尺度上对群落及其主要组成种类的空间异质性进行了定量的描述。结果表明:保安湖黄风口大型水生植物群落的双对数半方差图存在线性区域,群落具有分形特征(自相似性).在不同的尺度下,群落和各组成种类空间格局具有不同的分形维数值,异质性程度存在差异。但其异质性程度不高,建议进行群落调查时,样方尺度应取520m;单一种群调查时的样方尺度取380m.       

fMLP诱导的中性粒细胞胞内游离钙离子浓度变化与细胞极性化过程

目的：观察不同浓度的fMLP诱导中性粒细胞的极性变化,并结合胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）变化曲线分析不同时相细胞的极性化变化,探讨二者之间的关系。方法：使用激光共聚焦显微镜对胞内[Ca^2＋]．变化进行监测,细胞极性化情况通过倒置显微镜来分析。结果：胞内[Ca^2＋]i变化主要包括静息期（0s）、快速上升期（10s）、快速下降期（150s）、慢速下降期（250s）和终末期等5个阶段,在这5个阶段的10s时细胞膜开始皱缩,启动细胞极性化过程,之后呈现为不断的极性化和去极性化过程。结论：游离钙离子浓度升高可能启动了中性粒细胞的极性化,但对之后的极性化过程影响不明显。     

全反式维甲酸联合替莫唑胺对胶质瘤U251细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究全反式维甲酸（ATRA）联合替莫唑胺（TMZ）对胶质瘤细胞株U251增殖及凋亡的影响。方法：体外培养胶质瘤细胞株U251,分为ATRA组、TMZ组、ATRA＋TMZ组和空白对照4组,应用MTT法测定U251细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,westernblot法检测细胞维甲酸受体β（RARβ）蛋白和凋亡相关蛋白Caspase．3蛋白的表达情况。结果：对照组、ATRA组、TMZ组及ATRA＋TMZ组的细胞生长抑制率分别为（1．72±0．12）％、（9．87±0．87）％、（23．87＋1．32）％及（35．74±1．44）％,ATRA＋TMZ组的细胞生长抑制率显著高于单独应用TMZ（P〈0．01）。对照组、ATRA组、TMZ组及ATRA＋TMZ组的细胞凋亡率分别为（1．32±0．11）％、（4．16±0．35）％、（8．44±0149）％、（15．27±1．03）％,ATRA＋TMZ组的凋亡率显著高于单独应用TMZ有更高的凋亡率（P〈0．01）。对照组、ATRA组、TMZ组及ATRA＋TMZ组RARp蛋白相对表达量分别0．452±0．054、0．837±0．068、0．195±0．021、0．376±0．039,ATRA＋TMZ组RARβ蛋白相对表达量显著高于TMZ组（P〈0．01）。ATRA＋TMZ组Caspase．的3蛋白表达相对水平为（0．832±0．059）,明显高于ATRA组（0．334±0．041）及TMZ组（0．521＋0．032）,差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论：全反式维甲酸联合替莫唑胺能更有效抑制U251细胞的增殖,增加其凋亡率,这可能与其增加RARβ和Caspase-3蛋白的表达抑制U251细胞增殖、诱导细胞凋亡有关。     

蛋白质组学在妊娠期高血压疾病中的研究进展

蛋白质组学的兴起能快速筛选并鉴定疾病的特异性生物标志物,有助于研究妊娠期高血压疾病的病因、发生机制,通过特异性生物标志物进行早期诊断,从而改善母儿结局,降低母儿严重发病率和死亡率。本文综述近年来与妊娠期高血压疾病相关的蛋白质研究及其在妊娠期高血压疾病患者血液、脑脊液、尿液、羊水、滋养细胞中差异蛋白质谱的分析,为进一步研究提供思路。