Mass spectrometric determination of a novel modification of the N-terminus of histidine-tagged proteins expressed in bacteria.

Two proteins, FKBP, and Spo0F, were expressed in bacteria as histidine-tagged fusion proteins and isolated under native conditions. MALDI-TOF-MS analysis revealed that each protein preparation contained two components, neither of which corresponded to the molecular weights predicted from DNA sequences. The difference in molecular weight between the two FKBP components and two Spo0F components was approximately 178 +/- 14 Da. Site-specific proteolytic cleavage resulted in the release of histidine-tagged peptide from the recombinant proteins. MALDI mass spectra of the cleaved proteins showed a single molecular ion peak for each species with the predicted molecular weights. The histidine-tagged peptide released from both fusion proteins displayed two distinct peaks by MALDI-FT-MS corresponding to monoisotopic molecular weights of 2269. 027 Da and 2447.087 Da, respectively, which were both inconsistent with the predicted peptide sequence M-G-H-H-H-H-H-H-H-H-H-H-S-S-G-H-I-E-G-R of 2400.055 Da. The peptide at 2269.027 Da was sequenced by ESI-MS-MS and found to be a truncated histidine tag resulting from an initiator methionine deletion. ESI-MS-MS analysis of the peptide at 2447.087 Da indicated a moiety of 178.0 Da attached to the second residue glycine of the histidine tag. This alteration of the N-terminus does not fit any known modifications. A synthetic peptide with the identical sequence of the isolated his-tag M-G-H-H-H-H-H-H-H-H-H-H remained unmodified during the protein purification process, suggesting that modification of the initiator methionine was carried out in vivo, rather than the result of a chemical reaction from the isolation procedure.     

Candida (Nectaromyces) Reukaufii als Fettbildner

Zusammenfassung Die in Blütennektarien vorkommende Candida (Nectaromyces) Reukaufii verändert bei Lüftungskultur ihre Form völlig. Statt der dort vorhandenen Kreuzform treten Sproßzellen auf (nur bei gewissen Stämmen werden auch in Kultur noch Kreuzzellen gebildet), die unter geeigneten Bedingungen stark verfetten und ein dem Olivenöl ähnliches Öl enthalten. Diese Bedingungen sind: Gute Versorgung mit Wirkstoffen (in erster Linie Biotin), dürftige Ernährung mit Stickstoff, sehr kräftige Lüftung, p h-Wert nicht unter 5 bis 4,5. Es werden dann Fett-Koeffizienten bis zu 15 (gelegentlich noch wenig darüber) erzielt. Als Wirkstofflieferanten können Molke und die verschiedenartigsten Pflanzenextrakte herangezogen werden, als Zuckerquellen Holzzucker und Rübenzucker; Xylose wird ebenfalls zur Fettbildung verwertet.Die Begleiterscheinungen guter Fettbildung sind: Hohe absolute Trockensubstanzbildung, hoher ökonomischer Koeffizient, geringer prozentiger Eiweißgehalt und geringer Eiweiß-Koeffizient. Fett- und Eiweiß-Stoffwechsel verlaufen in diesem Sinne stets gegensätzlich. Die Fettbildung schließt sich an die vollendete Eiweißbildung an, ist somit ein Spätstadium der Entwicklung, das durch die geeigneten Kulturbedingungen offenbar erzwungen wird.     

Induction of proliferation by high molecular weight B cell growth factor or low molecular weight B cell growth factor is associated with increases in intracellular calcium in different subpopulations of human B lymphocytes

The activation of resting B cells with anti-surface Ig is associated with transient increases in intracellular calcium. In the present study, we demonstrate that stimulation of B cells which have already been activated by Staphylococcus aureus Cowan I (Sac), with high molecular weight B cell growth factor (HMW-BCGF) or low molecular weight B cell growth factor (LMW-BCGF), but not IL-2, IL-4, or interferon-gamma, is associated with an increase in intracellular calcium, which is modest compared to that seen with anti-Ig (approximately 100 nM vs approximately 400 nM). The increases in intracellular calcium induced by HMW-BCGF or LMW-BCGF occur in distinct but overlapping subpopulations of B cells. Thus, increases in intracellular calcium in human B cells occur not only upon activation but also upon the induction of proliferation by certain (but not all) B cell growth factors. Presumably, the effect of increasing intracellular calcium during the induction of proliferation is to modify a different group of intracellular molecules than those induced during activation.     

Eisen-, Agar- und Humuswirkung bei Azotobacter

Zusammenfassung Durch Agarzusatz (0.1%) läßt sich die Wirkung anorganischen Eisens auf Wachstum und Stickstoffbindung von Azotobacter chroococcum sehr schön nachweisen. Das Optimum liegt bei 5 bis 10 mg % FeSO₄ 7 H₂O. Diese Wirkung ist beim Vorhandensein von Mclybdän weit stärker als die Wirkung von Humuspräparaten, die erst bei längerer Kulturdauer eine gewisse Überlegenheit des Humus über das anorganische Eisensalz zeigten. Die Agarwirkung kann keine Wirkung des Eisens an sich, etwa einer besonders günstigen Verteilungsform sein, sondern beruht auf den Kolloideigenschaften des Agars. Auch bei den Humuswirkungen ist Eisen nicht der alein wirksame Faktor, tritt sogar bei genügender Versorgung mit anorganisch gebundenem Eisen gegenüber der Wirkung anderer Stoffe, wie etwa Molybdän, zurück.     

Neoflavanoids of Dalbergia parviflora

Besides two arylbenzofurans, parvifuran and isoparvifuran, the heartwood extract of Dalbergia parviflora yielded four neoflavanoids: R(?)-latifolin, R(?)-5-O-methyllatifolin, R(+)-4-methoxydalbergione, 2,5-dihydroxy-4-methoxybenzophenone (cearoin) and the new R(+)-dalbergiphenol. The structures of these compounds have been elucidated by physical methods.