AdEasy重组腺病毒系统对Ad-HIF1α的构建和鉴定

目的:采用AdEasy重组腺病毒系统构建重组腺病毒Ad-HIF1α并进行鉴定。方法:使用高保真PCR从EST克隆中扩增HIF1α基因编码区,并用限制性内切酶BamH I和Xba I对PCR片段限制性酶切,用T4 DNA连接酶将其连接至同样经BamH I和Xba I限制性酶切的穿梭载体pAdtrace-TO4,构建穿梭载体pAdtrace-HIF1α;将pAdtrace-HIF1α与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌BJ5183中同源重组,得到重组腺病毒质粒pAd-HIF1α;pAd-HIF1α经Pac I酶切后转染至E1表达包装细胞系HEK293中进行HIF1α基因表达腺病毒包装,重复扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化,获得高滴度Ad-HIF1α;感染干细胞株C3H10T1/2,通过荧光蛋白的表达了解其感染效率,并应用PCR及Western blot验证目的基因的表达,并通过检测下游靶基因VEGF的表达,了解该载体表达的目的蛋白的生物活性。结果:重组腺病毒质粒pAd-HIF1α,经PCR及酶切分析验证构建正确;在HEK293中进行HIF1α基因表达腺病毒包装,经反复冻融4次使细胞裂解,获得高滴度重组腺病毒载体;通过红色荧光蛋白(Red fluorescence protein,RFP)表达,观察到Ad-HIF1α能够高效感染C3H10T1/2细胞,并通过PCR证实了HIF1α在C3H10T1/2细胞较对照组明显高表达;在感染Ad-HIF1α的C3H10T1/2细胞中,HIF-1α下游靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达明显增高,证实表达的目的蛋白具有生物活性。结论:应用AdEasy重组腺病毒系统成功构建Ad-HIF1α,并证实其具有生物活性,为后续研究奠定了基础。     

吸湿率和上浮率在枸杞产地检测中的可行性分析

宁夏枸杞（Lycium barbarum）是我国西北地区的一种重要的药食同源的经济作物。为探索一种可行的枸杞产地溯源的方法,对西北地区24个产区枸杞的干果吸湿率和上浮率进行验证。结果表明,枸杞的吸湿率受品种、树龄和果实采收时期的影响,上浮率不受采收季节、干燥方式和树龄的影响。不同地区的枸杞干果吸湿率和上浮率均有差异,产自固原的枸杞干果吸湿率分别为1.47%,显著低于除靖远、玉门、武威外的其他地区（P<0.05）,而产自瓜州地区的枸杞干果吸湿率（2.87%）显著高于其他产区（P<0.05）。产自乌拉特前旗、惠农、靖远、中宁的枸杞干果上浮率分别高达95.56%、95.00%、94.44%、93.29%,显著高于产自共和、格尔木、武威、尉犁、精河、瓜州、阿尔泰地区的（分别为76.67%、73.89%、73.13%、71.67%、67.67%、66.39%、65.00%）（P<0.05）。PCA分析表明,同一产区的枸杞分布集中,产自瓜州、固原和武威等地区的枸杞能与大部分地区区分。因此,吸湿率和上浮率可应用于枸杞的产地检测。     

负压封闭引流结合网状植皮术治疗蝮蛇咬伤后肢体坏死1例

2010年7月我院收治1例蝮蛇咬伤导致肢体局部严重感染坏死的患者,经清创加负压封闭引流后,择期行自体网状植皮术,创面愈合满意,现报告如下。1临床资料患者,女,42岁,农民,左足被蝮蛇咬伤10天。患者曾在当地私人诊所治疗,给予抗炎、药物外敷后包扎,致局部感染坏死,范围逐渐扩大,大片皮肤坏疽剥脱。治疗天病情继     

自噬途径在低氧暴露诱导骨骼肌萎缩中的调节作用机制

该研究拟通过在体和离体实验观察低氧暴露诱导肌萎缩现象,并探究其作用机制是否与自噬途径有关.SD大鼠进行低氧(氧浓度为12.4％)暴露干预.4周后,测量体质量、瘦体质量、体成分、趾长伸肌(EDL)湿重,观察肌纤维形态,计算肌纤维横截面积(FCSA),PCR芯片分析自噬差异表达基因功能.在低氧环境下使用自噬抑制剂3-MA干...     

细胞可溶性蛋白质的流式微球技术定量检测

体细胞合成和分泌的可溶性蛋白质在机体生命活动过程中发挥重要作用,实时、准确的定性、定量检测,对评价机体的生理病理状态具有重要意义。常规ELISA方法存在标本用量大,检测结果重复性差等缺点,近年利用类似ELISA双抗体(包被抗体、检测抗体)夹心法建立的流式细胞仪CBA(cytomet     

结直肠癌术后并发腹腔感染患者的病原学特点、危险因素分析及对患者预后的影响

目的:分析结直肠癌患者术后并发腹腔感染的常见病原菌及其耐药性,探讨其危险因素及对患者预后的影响。方法:回顾性纳入2012年1月至2015年1月于我院行结直肠癌根治手术治疗的225例患者为研究对象,根据术后是否出现腹腔感染,将患者分为感染组(31例)和未感染组(194例),疑似感染患者进行病原菌培养鉴定以及药敏试验,分析影响结直肠癌根治术后腹腔感染的危险因素,对比两组病死率、无进展生存期(PFS)以及复发率。结果:结直肠癌根治术后腹腔感染发生率为13.77%,共检出菌株67株,革兰阴性菌检出率最高,其次是革兰阳性菌、真菌。大肠埃希菌对亚胺培南敏感,耐药率为0.00%。克雷伯菌对亚胺培南、阿米卡星、妥布霉素敏感,耐药率均为0.00%。铜绿假单胞菌对妥布霉素较为敏感,耐药率为11.11%。表皮葡萄球菌对左氧氟沙星、妥布霉素、环丙沙星、亚胺培南较为敏感,耐药率分别为0.00%、0.00%、12.50%、12.50%。单因素分析显示:结直肠癌根治术后并发腹腔感染与术前血红蛋白水平、术前血清白蛋白水平、是否合并糖尿病、TNM分期、Dukes分期、手术类型、手术时间、术中出血量、是否联合脏器切除、是否术后造口、有无吻合口瘘、术后引流管留置时间有关(P0.05)。多因素Logistic回归分析显示:合并糖尿病、联合脏器切除、术前血清白蛋白水平35 g/L、手术时间≥160 min、术后造口、吻合口瘘、术后引流管留置时间≥11d是结直肠癌根治术后并发腹腔感染的独立危险因素(P0.05)。与未感染组相比,感染组3年病死率、复发率升高,PFS显著缩短(P0.05)。结论:结直肠癌根治术后并发腹腔感染受多种因素影响,感染率较高,预后较差。感染病原菌以革兰阴性菌为主,并对抗生素有一定耐药性。临床应对合并糖尿病、术前血清白蛋白水平过低、术中联合脏器切除、手术时间过长、术后造口、吻合口瘘、术后引流管留置时间过长患者做好预防术后感染工作,亚胺培南、妥布霉素可用于防治结直肠癌根治术后耐药菌引起的腹腔感染。     

植物生长调节剂对降香黄檀种子萌发的影响

用6-BA、IBA、GA 3等3种植物生长调节剂对降香黄檀种子进行萌发处理,测定降香黄檀种子中可溶性糖、淀粉、蛋白质和脂肪含量的变化。结果表明,降香黄檀种子在不同的萌发处理过程中,可溶性糖含量均呈下降趋势,萌发结束时淀粉含量由第3 d的0.6%下降至0.2%以下,其中6-BA处理后种子萌发前期（3～6 d）淀粉含量变化不大,后期则有一个显著的下降趋势;3种植物生长调节剂对降香黄檀种子蛋白质、脂肪含量变化影响不明显。     

基于RNA测序分析不同低氧暴露模式对大鼠胫骨前肌差异基因表达的影响

目的 筛选慢性间歇低氧暴露和急性低氧暴露对大鼠胫骨前肌差异表达基因及其相关通路分析.方法 SD大鼠24只,分为常氧对照组(C组)、慢性间歇低氧组(IH组,氧浓度为12.4％,每天8 h,共4周)和急性低氧组(AH组,氧浓度为12.4％,每天24 h,共3 d).干预后,测试抓力和瘦体重,取胫骨前肌(TA)进行HE染色后...     

分离自青海湖可培养耐盐真菌的多样性研究

青海湖位于青藏高原东北部,属于典型的高原盐湖沉积环境。作者以常规的分离培养方法对青海湖中的耐盐真菌多样性进行了研究。从黑马河、耳海和尕海共分离得到617株耐盐真菌,结合形态学和分子生物学的方法将菌株鉴定到18个属和45个种。子囊菌的菌株数比接合菌和担子菌多,枝孢菌和青霉菌为优势耐盐真菌。在这45种耐盐真菌中,轻度、中度和极端嗜盐真菌分别有19、25和1种。分离自黑马河地区的耐盐真菌,其物种丰富度指数Ma（3.12）、多样性指数H′（1.11）和均匀度指数J（0.267）均比耳海和尕海的高。从1.5%浓度下     

观察植物减数分裂的好材料--紫竹梅

植物花粉母细胞减数分裂是植物学、遗传学和高中生物学教学中一个重要的实验,以往文献资料介绍比较多的是用一些农作物的花来观察、如小麦、水稻、棉花、蚕豆等材料。现将介绍另一种减数分裂的好材料——紫竹梅。