H9N2禽流感病毒反向遗传系统转录／表达载体的构建和验证

设计带有BsmBI、BsaI或AarI酶切位点的引物,用RT-PCR扩增H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的8个基因全长片段,克隆入双向转录/表达载体pHW2000,并在PB2、PB1和NA基因中共引入了3个沉默突变标签。将其2个表面基因(HA和NA基因)加上任意1个内部基因,而其它5个内部基因来自A/WSN/33,进行了6种3 5组合形式的基因重排,把相应组合的转录/表达质粒共转染COS-1细胞,均产生了预期组合、有感染性的H9N2亚型流感病毒,表明亲缘关系遥远的流感病毒可以互相获取基因片段产生重组病毒,提示表面结构基因和单个内部基因不足以限制H9N2AIV在哺乳动物细胞上的宿主范围,同时也验证了构建的8个转录/表达载体均能有效工作,为进一步研究H9N2亚型AIV基因结构与功能、AIV与宿主之间的关系打下了基础。     

填充床反应器中酶法连续合成甘油二酯的研究

近年来,1,3-甘油二酯(DAG)由于其广泛用途及健康作用日益受到人们的重视。报道了一种无溶剂条件下填充床反应器中连续酶促合成1,3-DAG的方法。研究了填充柱的长径比、进料体积流速、温度、底物摩尔比对酯化率和1,3-DAG产量的影响。结果表明固定化酶填充柱长径比7.8,亚油酸、甘油摩尔比1∶2 ,进料速度1.2mL/min ,65℃条件下酯化反应可实现脂肪酸酯化率、1,3-DAG纯度及生产效率的统一。填充床反应器中固定化酶连续催化酯化反应的一个主要问题即体系水分清除困难。实验研究了采用过量甘油吸附脱水的可行性,亚油酸、甘油摩尔比为1∶2时,可明显改善固定化酶的稳定性,增加LipozymeRMIM的使用寿命。连续运行10d ,残余酶活仍保持在80 %以上,而对照组则仅为52%。     

小麦低分子量麦谷蛋白亚基与面团流变学特性关系的研究

采用十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离方法,以牛血清蛋白(67kD)和卵清蛋白(43kD)为分子量标记,对甘肃河西灌区近几年选育的17个小麦品系以及大面积栽培的2个春小麦品种的低分子量麦谷蛋白亚基组成以及不同亚基对面团流变学特性(面团韧性P、延伸性L、面团筋力W)的影响进行分析。19个试验材料中共标记出从35．2～60．5kD的LMW-GS共32条谱带;通过单因素方差分析(ANOVA)和逐步回归分析确定出对面团流变学特性P、L、W值影响显著的7个LMW-GS,分子量由高到低为：52．7kD、52kD、49．3kD、46．7kD、44．8kD、44．2kD、35．2kD。其中35．2kD和46．7kD亚基能显著地增加面团P值,44．8kD亚基能显著地降低面团P值;44．2kD和49．3kD亚基显著增加面团L值,52．7kD亚基降低面团L值;44．8kD、52．7kD亚基能显著降低面团的W值,52．0kD和46．7kD亚基能显著提高面团W值。     

山东太原组煤核中鳞木类茎--三点"鳞木"的解剖构造

描述了一种产自山东省南部的陶枣煤田和兖州煤田太原组煤核中的鳞木类茎的解剖构造特征.根据叶座的形态,该种茎曾被归入大青山"鳞木"("Lepidodendron"tachingshanense Lee)种,但此次重新仔细研究后转归三点"鳞木"("Lepidodendron",tripunctatum Stock.et Math.)种内.与欧美植物区和华夏植物区已有的具解剖构造的鳞木类茎进行了详细对比,认为与奇木属Diaphorodendron很接近,但叶座的形态和解剖差别较大.此外,当前标本的分枝方式还不清楚,因此,还不能将当前标本归入奇木属内.当前标本与奇木属的关系及其分类位置有待于今后对更多更好的标本进行深入研究.     

损伤神经自发放电节律分岔与频率变化的非线性特征

为了研究神经放电节律回周分岔与放电频率变化之间的关系,采用大鼠坐骨神经慢性结扎模型,记录损伤区的自发放电,观察放电节律转化的动力学规律,分析相应的放电频率的变化,并用理论模型进行数值模拟。结果表明,与放电节律加周分岔相对应,放电频率的变化呈现非线性的特征,数值模拟支持实验的发现。研究提示：神经放电的频率变化与刺激强度的改变并非呈简单的线性相关,可能具有更复杂的关系。     

普通离子交换剂用于HPLC柱层析法快速分离眼镜王蛇毒

目的　为了经济快速分离眼镜王蛇(Ophiophagushannah,Oh)蛇毒中的毒素成分。　方法　用普通离子交换剂于高效液相色谱柱 (HPLC) TSKgel SP-Toyopearl 65 0 SF (4× 1 5 0 mm)层析法 ,实验取得最佳分离条件后 ,将蛇毒样品上柱后进行梯度洗脱 ,各洗脱峰收集后在 Cosmosil 5 C4-AR-3 0 0柱 (4 .6× 1 5 0 mm)上进行逆相 HPLC分析。非单峰组分再进行 HPLC凝胶过滤柱TSKgel Toyopearl HW-40 Fine(4× 2 5 0 mm)层析 ,层析峰组分再进行 HPLC逆相分析。　结果　眼镜王蛇毒经HPLC离子交换柱层析获得了 1 6个蛋白组分 ,其中有 5个组分经逆相 HPLC分析单一组分 ;另外的复合性组分再进行 HPLC凝胶过滤柱层析后又得到 5个单峰蛋白组分。　结论　HPLC离子交换柱层析对分离蛇毒蛋白很有实用价值 ,特别是蛇毒样品量少的情况下 (1 0 ug)也能较好分离。还具有分离时间短 (1 h左右 ) ,无须低温条件等优点。HPLC凝胶过滤柱层析可进一步使蛋白组分得到提纯     

Decode公司在基因研究方面获得新突破

ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＮＥＷＳ 2 0 0 1年 2 1卷 2 8期第 1页报道 :目前 ,Ｄｅｃｏｄｅ公司 (雷克雅未克 ,冰岛 )的遗传学家们以主要药物的研发为目标共发现了 35 0个基因 ,公司计划将这些基因同该公司已有的药物开发项目结合起来进行研究。这些基因编码Ｇ蛋白偶联受体、激酶、蛋白酶、离子通道蛋白、核受体和谷胺酰氨转移酶等多种蛋白 ,公司计划利用它们的临床遗传研究优势结合 4 0多种常见疾病的数据定位这些基因的功能。Ｄｅｃｏｄｅ公司最近另外一个重大突破是作图并定位了一个与后发性帕金森氏病 (帕金森氏病的最普遍的发病形式 …     

NIH新闻

ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＮＥＷＳ 2 0 0 1年 2 1卷 2 8期第 5页报道 :上周从美国国立卫生研究院 (ＮＩＨ ,Ｂｅｔｈｅｓｄａ ,马里兰州 )传来了令干细胞和基因治疗研究者们兴奋的好消息 ,该院在其网站上公布了研究者们期待已久的人类胚胎干细胞注册表和相关基金申请的信息 ,ＮＩＨ还将在基因载体实验室提供免费的毒理学研究项目 ,这使基因治疗研究者深受鼓舞。ＮＩＨ将受理的研究对象是注册表中所列干细胞系方面的基金申请 ,并将在接下来的几个月里发布申请要求 (ＲＦＡｓ)和程序通告 (ＰＡｓ)。在注册表中有 72个可用的干细胞系 ,包括…     

生产药物蛋白的替代方法仍在缓慢发展

ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＮＥＷＳ 2 0 0 1年 2 1卷 2 8期第 3页报道 :多年前 ,人们已经在利用诸如ｒＤＮＡ细菌或培养的哺乳动物细胞等传统方法生产重组蛋白中遇到了重重困难。生产几千克重组蛋白的生物反应器成本需上亿元 ,哺乳动物细胞培养极易受真菌污染 ,且产量极低。因此 ,许多公司正在探索生产药物蛋白的替代方法 ,这些方法主要集中在转基因动、植物上。2 0世纪 80年代 ,一些公司如Ｇｅｎｔｙｍｅ(Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ,ＭＡ)就开始在转基因农畜中开发ｒＤＮＡ蛋白产品。之后 ,通过转基因动植物生产重组蛋白的研究逐渐增多 ,但这方…     

植物广谱抗病基因工程策略与研究进展

系统获得性抗性（SAP）是植物防御病原微生物侵染的一条有效途径。利用基因工程技术改造其表达特性可以提高植物的抗病性,从活性氧的代谢,抗病基因的利用、过敏反应的诱导和SAR的组成性表达等方面论述了植物广谱抗病基因工程的研究策略。已取得的成就及今后的研究方向。