基于抗坏血酸过氧化酶的电镜成像和活细胞邻近标记方法的应用进展

Alice Ting实验室开发的抗坏血酸过氧化物酶(engineered ascorbate peroxidase,APEX),相对于经典的辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP),其酶活性不再受细胞内蛋白质定位的影响,可以在几乎所有的亚细胞区域保持活性,这使其在研究亚细胞尺度以及活细胞水平生物学问题时极具优势.目前,基于APEX的二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)染色标记技术已经成功地实现对全细胞、亚细胞器和蛋白质水平的电镜成像.同时,与质谱技术结合,基于APEX的活细胞生物素邻近标记方法也极大地推动了亚细胞器蛋白质组学,以及目标蛋白在特定时空条件下邻近蛋白质组学的研究发展.本文将从以上两个方面阐述APEX技术的基本原理及最新应用进展,并讨论和展望其在实际应用中存在的局限性和挑战.     

蒙古冰草抗旱相关amo-miR5靶基因预测及表达载体构建

microRNA是植物体内普遍存在的非编码RNA,参与调控干旱、盐害、寒冷等多种逆境胁迫响应,是mRNA表达的关键调控因子之一。为研究蒙古冰草抗旱相关非保守amo-miR5的功能,本试验通过Target Finder软件和在线PMTED数据库进行靶基因预测,用DNAStar MegAlign软件对预测得到的靶基因进行同源性分析,并构建amo-miR5表达载体。分析研究表明,预测到amo-miR5靶基因21个,有一部分靶基因功能与植物干旱胁迫有关,但大多功能未知;蒙古冰草的2个amo-miR5靶基因与小麦(Triticum aestivum)、水稻(Oryza sativa)、玉米(Zea mays)中预测的靶基因间相似性指数在19.3%～53%之间,同源性较低,推测与amo-miR5的非保守特异性有关。利用双酶切手段,切除pBI121载体中GUS基因,连入amo-miR5前体,成功构建了以GaMV35S为启动子的表达载体pBI121-amo-miR5,为下一步遗传转化研究amo-miR5抗旱调控机理提供依据。     

柞蚕雄蛾液对酒精肝纤维化小鼠的预防作用及其机制研究

目的:观察柞蚕雄蛾液对酒精诱导的小鼠肝纤维化的预防作用并探讨其可能的机制。方法:选择40只SPF级C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组、柞蚕雄蛾液低剂量组、柞蚕雄蛾液高剂量组,每组各10只。除对照组外,其他各组均通过酒精灌胃建立酒精性肝纤维化模型。柞蚕雄蛾液低剂量组、柞蚕雄蛾液高剂量组每天先予柞蚕雄蛾液灌胃,两小时后予以酒精灌胃。16周后,所有小鼠禁食12 h后通过眼球取血后处死,取出肝脏。采用HE和Masson染色观察肝组织病理改变并进行肝纤维化分级;检测血清中ALT及AST的含量,免疫组化法检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达,Western blot法测定肝组织中Smad2/3的蛋白表达。结果:柞蚕雄蛾液低剂量组镜下只见少量点状坏死和炎细胞浸润,肝组织损伤比模型组明显减轻。与对照组比较,模型组TGF-β1、TIMP-1、CTGF、Smad2/3的表达均明显增高(P0.001),血清ALT及AST水平显著升高(P0.001);与模型组比较,柞蚕雄蛾低剂量组TGF-β1、TIMP-1、CTGF、Smad2/3表达明显降低(P0.001),血清ALT及AST水平显著下降(P0.001)。结论:柞蚕雄蛾液对酒精诱导的小鼠肝纤维化具有显著的预防作用,低剂量柞蚕雄蛾液较高剂量柞蚕雄蛾液可能更有效,其机制可能与调控TGF-β1/Smad2/3信号转导通路,下调TIMP及CTGF抑制HSC的活化与增殖有关。     

甘肃省肃北发现白喉石(即鸟)

<正>2010年5月17日11∶12,作者在甘肃省肃北蒙古族自治县马鬃山镇马鞍山村观音山(42°27'14.2'N,96°26'06.2″E;海拔1666 m)发现1只鸟,该鸟站在废弃矿区的岩石上,上体黑白色,喉部白色,与颈侧形成不完整圆环,胸红色,翼有白斑。根据其外部形态特征,经查阅《中国鸟类野外手册》(马敬能等,2000)、《中国鸟类分类与分布名录》(郑光美,2011)、《甘肃脊椎动物     

人参皂甙对气虚型大鼠血管内皮损伤相关基因谱的影响

用高L-蛋氨酸复制SD大鼠血管内皮损伤,并附以负重游泳法制造气虚实验模型。应用RT-PCR技术和NCB I提供的SAGE(serial analysis of gene expression)数据库及在线工具,分析内皮损伤相关的炎症、氧化应激基因表达谱的变化,以及人参皂甙对基因表达谱的影响。结果显示,与模型组相比,人参皂甙组炎症相关COX-1(P<0.001)、COX-2(P<0.001)、氧化应激相关iNOS(P<0.001)、SOD基因表达(P<0.05)及血管舒缩相关eNOS(P<0.05)、ECE(P<0.001)的基因表达降低;PCS的基因表达变化无统计学意义。人参皂甙能够改善气虚型大鼠血管内皮损伤病变时基因表达谱的异常,从而起到保护血管内皮免受损伤的作用。探讨人参皂甙对气虚型大鼠血管内皮损伤相关的炎症、氧化应激等基因表达谱的影响。     

生物大分子从头合成和设计的研究进展

生物大分子指生物体内存在的DNA、蛋白质、多糖等物质,其对生物体正常生命活动至关重要.从头合成和设计技术在生物大分子的合成和结构设计上具有自由度高、前体简单等特点,能够按照特定研究目的对生物大分子进行全新设计和高效合成.近年来,从头合成与设计技术在人造基因组合成、新型蛋白质类药物设计、糖缀合物合成等领域已开始受到重视.基于生物大分子从头合成和设计技术,可以定向制备全新设计的DNA或全新的基因表达产物,以及具有识别功能的糖链或糖缀合物,将大大推进诸如细胞因子模拟物、基因治疗递送载体等生物活性物质的开发,为人工生物系统的构建、罕见疾病的治疗等提供新的解决方法.本文就DNA、蛋白质和多糖的从头合成和设计进行了综述,阐述了相关方法及应用,最后概括分析了三者之间的关系.     

铜镉联合胁迫处理对鲫体内重金属和组织病理的影响

采用半静态铜镉联合胁迫处理鲫(Carassius auratus), 研究铜和镉在鱼体各组织的富集以及对各组织的病理损伤。结果表明, 在鲫的肝脏、鳃丝、肠道和肌肉中均可富集铜和镉, 且铜的蓄积比镉显著。在鲫各组织中镉含量随着铜、镉浓度的增加逐渐增加, 而铜含量则呈下降趋势, 可能是镉抑制了机体对铜的吸收。在0.15 mg/L铜联合0.20 mg/L镉处理鲫14d后, 其肌肉中镉含量为0.13 mg/kg, 超出了行业标准的阈值(0.10 mg/kg)。在铜镉联合处理鲫后, 其肝组织出现血细胞聚集、脂沉积、细胞空化等症状; 鳃丝组织上皮增生、水肿和黏膜肿胀; 在肠组织中杯状细胞肿胀、柱状细胞增生、固有层出现液泡、肠黏膜糜烂、肠绒毛脱落坏死; 在肌组织中肌纤维断裂、聚集、崩溃、溶解, 同时肌纤维间隙增大。研究结果表明, 铜和镉不仅能在鲫体内富集, 而且能够对鲫各组织产生病理损伤, 且浓度越高、损伤越严重, 这主要是由于鲫体内镉浓度的升高所导致。研究可为重金属污染对鲫生长状况和食用安全性的影响分析提供数据支撑。     

甲状腺髓样癌超声弹性成像定量参数与病灶组织中降钙素原的相关性研究

摘要 目的：探讨甲状腺髓样癌（MTC）超声弹性成像定量参数与病灶组织中降钙素原（PCT）的相关性。方法：回顾性选取2017年2月-2021年8月于我院行甲状腺癌手术且术后病理诊断为MTC的患者32例作为研究组,随机选择同期于我院行甲状腺良性肿瘤手术的患者40例作为对照组,所有患者均进行超声弹性成像检查。收集所有患者术后MTC和甲状腺良性肿瘤组织,采用免疫组化法检测MTC和甲状腺良性肿瘤组织中PCT的阳性表达率。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析应变率比值对MTC和甲状腺良性肿瘤的鉴别诊断价值。采用Pearson相关分析应变率比值与病灶组织中PCT阳性表达率的相关性。结果：研究组应变率比值明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。MTC组织中PCT阳性表达率为71.88%（23/32）高于甲状腺良性肿瘤组织中的35.00%（14/40）,差异有统计学意义（P<0.05）。经ROC曲线分析发现应变率比值鉴别诊断MTC和甲状腺良性肿瘤的最佳截断值为3.30,曲线下面积为0.761。Pearson相关分析显示应变率比值与MTC组织中PCT阳性表达率呈正相关（P<0.05）。结论：MTC超声弹性成像应变率比值与病灶组织中PCT阳性表达率呈正相关,且应变率比值对MTC具有一定的诊断价值。     

Tau蛋白在阿尔茨海默病中的作用

阿尔茨海默病(AD)是非常普遍的神经变性性疾病并且是老年人痴呆的主要原因。AD患者的症状特点包括进行性的认知障碍、记忆丧失和行为障碍,与大脑中的病理变化密切相关。AD现成为全球最严重的健康和社会经济问题。在AD患者脑中神经纤维网或神经营养障碍的过程中存在tau蛋白的异常。tau蛋白丧失其促微管组装的生物学功能,导致细胞骨架的破坏、丝状物形成和神经缠结,轴突运输损害,进而导致突触蛋白失去功能和神经退行性病变。其数量和结构的改变将会影响其功能而且会出现异常聚集。调节Tau蛋白的异常聚集的分子机制主要是一些翻译后修饰使其结构及构象发生变化。因此,异常磷酸化和截断的tau蛋白作为tau蛋白病理过程的关键机制而引起学者关注。本文描述了tau蛋白的结构和功能及其在AD中的主要病理变化,同时在本文中还涉及到磷酸化的tau蛋白是神经元对氧化应激的代偿反应这一观点。对tau蛋白进行更加全面的解读。     

丙泊酚与异氟醚麻醉对妇科腹腔镜手术患者血流动力学及应激反应的影响

目的:探究丙泊酚与异氟醚麻醉对接受妇科腹腔镜手术的患者应激激素以及血流动力学的影响。方法:选取我院妇科收治的需要进行腹腔镜手术的患者90例,根据麻醉用药不同,将其分为丙泊酚组、异氟醚组及实验组,每组各30例。观测患者不同时段去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、皮质醇(COS)的浓度及心率、平均动脉压、呼吸频率、血氧饱和度等血流动力学参数的变化情况。结果:三组患者麻醉前及气腹20 min的去甲肾上腺素、肾上腺素以及皮质醇含量比较均无显著差异(P0.05);气腹前,实验组患者去甲肾上腺素含量显著低于丙泊酚组及异氟醚组(P0.05);放气10 min,实验组患者肾上腺水平显著高于丙泊酚组及异氟醚组(P0.05);三组患者麻醉前及气腹前的心率、平均动脉压、呼吸以及血氧饱和度比较均无显著差异(P0.05);气腹20 min,实验组患者的心率、平均动脉压、呼吸显著优于丙泊酚组及异氟醚组(P0.05);术后放气10 min,实验组患者的心率、平均动脉压、呼吸显著优于丙泊酚组及异氟醚组(P0.05);实验组患者术后出现恶心、呕吐等症状显著优于丙泊酚组及异氟醚组(P0.05)。结论:丙泊酚复合异氟醚可有效改善接受妇科腹腔镜手术的患者麻醉期间的应激反应和血流动力学,患者术后恶心、呕吐等不良反应少,值得推广使用。