耐热高活性荧光素酶在单细菌检测中的应用

[目的]开发活性和稳定性提高的荧光素酶突变体,建立单细菌检测方法。[方法]运用定点突变的方法,向荧光素酶LGR中逐步引入提高荧光素酶稳定性的氨基酸位点,构建荧光素酶突变体LGR-A215L、LGR-E354K和LGR-LK,并建立基于单细菌检测的快速无菌检查方法。[结果] LGR-A215L、LGR-E354K和LGR-LK的活性分别提高了9、26和140倍,45℃的稳定性提高了约2.9、1.3和2.7倍;此外,NaCl、培养基和生物制品溶液对LGR-LK的活性影响较小,活性变化在74%～181%之间。LGR-LK与ATP之间的亲和力显著提高,能灵敏的检测到小于10 CFU/mL菌悬液中的细菌,信号/背景值≥200;在48 h以内检测到TSB培养基中的金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌,相较于LGR的检测灵敏度提高了约1.5倍。[结论]开发了热稳定高活性荧光素酶突变体LGR-LK,其活性提高了140倍,45℃的热稳定性提高了2.7倍,并且其活性不受生物制品、NaCl和培养基的影响,能灵敏的快速检测单个细菌,可用于生物制品快速无菌检查。     

鄱阳湖及洞庭湖红鳍原鲌的群体分化研究

结合形态和线粒体Cyt b数据, 研究了鄱阳湖及洞庭湖定居性鱼类红鳍原鲌的6个地理群体(湖口群体、星子群体、都昌群体、鄱阳群体、余干群体和洞庭湖群体)共186尾样本的群体分化情况. 形态分析结果显示地理群体间形态差异较小. 遗传分析结果中, 群体间遗传分化指数(Fst) 为-0.00567-0.33429, 显示群体间存在较大遗传差异, 而单倍型分布和分子变异分析(AMOVA)也得到相似的结果. 根据群体遗传距离构建的系统树, 6个群体分为两大支: 洞庭湖群体与其他群体距离最远, 单独聚为一支; 星子、都昌、鄱阳和余干4群体聚成另一支, 而湖口群体处于两支的过渡位置. 因此, 群体间已产生显著遗传分化, 且主要体现在洞庭湖和鄱阳湖各群体间. 综合上述分析结果及红鳍原鲌的生活习性认为, 鄱阳湖及洞庭湖红鳍原鲌群体间的遗传分化是红鳍原鲌定居性的生活习性导致不同地理群体间长期的群体隔离、缺乏基因交流的结果.       

吉林榆树榆-302孔阿尔布期孢粉组合 --兼论松辽盆地登楼库组的地质时代

榆-302孔位于松辽盆地东部边缘,钻深899．30m,顶部3．15m为第四系,上部683,65m以砂岩为主,夹少量泥岩,下部212．50m以灰色泥岩为主,夹砂岩及少量凝灰岩。以盆地内岩石地层比较,其上部应属登楼库组3段,下部为登楼库组2段,剖面缺失登楼库组4段,未钻及登楼库组1段。整个剖面上的孢粉组合面貌基本一致,共有苔藓、蕨类植物孢子40属70余种、裸子植物花粉19属28种、被子植物花粉2属3种、藻类及疑源类6属8种。组合中的绝大部分属种都是我国北方早白垩世孢粉植物群的常见分子,如Cicatricosisporites(约占组合的7％-35％),Appendicisporites,Impardecispora,Pilosisporites,Aequitriradites,Kuylisporites,Triporoletes等。特别有意义的是自登楼库组2段开始即已出现大孢子Balmeisporites holodictyus,被子植物花粉Polyporites debilis,Retitricolpites sp．和沟鞭藻Vesperopsis zhaodongensis。登楼库组3段出现曾见于阿尔布期的Scopusporis lautus及晚白垩世的Scopusporis verrucosus,Trochicola scollardiana,Verrucosisporites fuyuensis等,证明其时代属早-中阿尔布期。榆-302孔的孢粉证据表明登楼库组至少自登楼库组2段起已进入阿尔布期,至于登楼库组1段因无更多新的资料佐证。阿普特期的时代定位可暂予保留。文中描述一新种Verrucosisporites fuyuensis sp．nov．和一新联合种Scopusporis uerrucosus(Chlonova)comb．nov．。     

湖北烟区烤烟气候适生性评价及与国外烟区的相似性分析

分析了湖北烟区不同移栽期条件下的气候状况,通过定量估算气候适生性指数(CFI),合理评价了烤烟种植的气候适生性,并对各植烟县(市)建议移栽期下的气候条件与国外优质烟区进行了相似性分析,结果表明:(1)当气温稳定通过15℃、18℃、20℃和22℃分别进行移栽时,CFI值依次为0.863±0.06、0.848±0.06、0.855±0.07和0.890±0.05,表明移栽期是影响烟叶品质形成的重要因素.(2)确定了24个植烟县(市)的烤烟建议移栽期,即利川、五峰、老河口、兴山、郧西、房县、竹山和长阳等8个植烟县(市)适宜于当气温稳定通过18℃时移栽;宣恩适宜于气温稳定通过20℃时移栽;其余15个植烟县(市)适宜于低温移栽(气温稳定通过15℃移栽).(3)湖北烟区在烤烟建议移栽期的气候条件与巴西、津巴布韦的相似程度较美国高,相似性分析为充分利用湖北烟区自然资源提供了参考依据.     

茶叶加工中的外源酶研究进展

从应用于茶叶加工中的外源酶种类,来源,作用机理及其在红茶,绿茶,黑茶,茶饮料,速溶茶的加工和检测上的应用等方面综述了近半个世纪以来茶叶加工中的外源酶研究成果与进展,并对外源酶在茶叶加工中的应用提出了思考与展望。     

ELISA法检测梅毒螺旋体抗体的评价

目前在国内医院、血站的实验室中梅毒血清学诊断主要应用非特异性试验 ,如快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)或甲苯胺红不加热血清试验(TRUST) ,特异性试验主要应用 TPPA或 TPHA。我们用国产 ELISA试剂 (双抗原夹心法 ) ,对梅毒患者与非梅毒患者的血清进行检测 ,并同时作TRUST与 TPPA检测 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 .1　对象　患者组 ,两院皮肤性病科确诊梅毒患者84例 ;非患者组 ,两院门诊、住院及健康查体者各随机抽取 1 5 0例 ,并排除梅毒螺旋体感染。1 .2　试剂　 ELISA试剂由广东中山生物工程有限公司提供 ;TP…     

三角帆蚌热休克蛋白70基因克隆及其表达分析

对三角帆蚌HSP70基因序列进行全长克隆及其分子生物学分析,并检测其在不同水温刺激下鳃组织中的表达变化。通过高通量转录组测序获得三角帆蚌HSP70基因（HcHSP70）长片段,采用3'RACE对其进行了3'末端克隆,经拼接得到HcHSP70 cDNA全长序列。采用多种分子生物学软件对HcHSP70 cDNA全长序列进行了特征分析,采用实时荧光定量PCR技术检测了其组织分布,并结合Western-blot技术检测蚌鳃中该基因mRNA与蛋白经不同水温刺激后的表达变化。结果显示,HcHSP70 cDNA全长为2298 bp,其中开放阅读框为1974 bp,编码657个氨基酸。预测分子量大小为71.6 Ku,pH7.0时的理论等电点为5.61。氨基酸序列分析表明,HcHSP70氨基酸序列含HSP70家族的3个标签序列（I₉DLGTTYS₁₆、I₁₉₇FDLGGGTFDVSIL₂₁₀和I₃₃₆ VLVGGSTRIPKVQK₃₅₀）,与长牡蛎及泥蚶的HSP70同源性最高（91%）。实时荧光定量PCR检测结果显示,HcHSP70在鳃、性腺、肝胰腺、外套膜及肌肉等5种被检组织中均有表达,以肝胰腺中的表达水平最高。实时荧光定量PCR与Western-blot技术检测皆表明,蚌鳃组织中HcHSP70基因与蛋白的表达量在37℃时达到最高,而在40℃水温刺激下表达水平下调至正常值,表明其在适应高温刺激时发挥了重要作用。     

埃博拉病毒基因组中微卫星序列的分布分析

微卫星或简单重复序列(simple sequence repeat, SSR)在真核和原核生物以及病毒基因组中普遍存在,并被广泛用于遗传与进化研究。本研究从NCBI中下载埃博拉病毒属的四个不同种的埃博拉病毒全基因组序列,筛选36条作为实验材料,利用IMEx在线提取软件提取SSRs,用Python编程统计数据,从而分析SSRs在埃博拉病毒全基因组序列中的分布情况。分析得出,埃博拉病毒基因组序列中二型SSRs含量最为丰富,其次是一型SSRs,三型SSRs有少量,四型SSRs则更少,没有发现五型和六型SSRs。在更深入的分析中得出在埃博拉病毒属四个种中,含A/T碱基的SSRs含量远远大于含C/G碱基的SSRs。分析得出一型SSRs中(A)n/(T)n远多于(G)n/(C)n,二型SSRs中不存在(GC/CG)n,三型中也不存在(GGC/CGG/GCG/CCG/CGC/GCC) n。上述发现可能跟埃博拉病毒的致病机理有密切联系。通过对埃博拉病毒基因组序列中SSRs的分析,为研究埃博拉病毒的变异情况及致病机制提供更多参考。     

基于鱼类物种状况的长江生态环境质量评估

鱼类是水域生态系统的重要组成部分, 也是水域生态环境良好的指示类群。为合理评估长江生态环境的现状和变化趋势, 文章提出将土著鱼类物种数和珍稀特有鱼类物种数作为评价指标, 并建立了相关的评价基准和等级划分标准。以2010年和2020年为评价年, 评估了长江干流及代表性重点水域的生态环境质量。结果显示, 当前长江上游干流和下游干流的生态环境质量优于中游; 支流赤水河的生态环境质量良好, 大型湖泊鄱阳湖的生态环境质量中等。从时间上看, 随着长江十年禁渔等一系列保护措施的实施, 长江干流的生态环境质量有不同程度地好转。在此基础上, 提出了进一步改善长江生态环境的对策与建议。     

探讨脂肪肝的诊断与治疗

脂肪肝可由多种疾病引起,导致肝脏脂肪性病变。导致脂肪肝的最常见病因是酒精中毒和肥胖,糖尿病、营养不良等。由于脂肪肝无明显特异性临床表现,在诊断过程中极易漏诊、误诊,因此采用科学准确的诊断方法十分重要。早期诊断、早期治疗对于治愈脂肪肝具有重要价值,可有效提高患者生活质量。本文就脂肪肝诊断和治疗研究进展进一步探讨。