三角帆蚌热休克蛋白70基因克隆及其表达分析

对三角帆蚌HSP70基因序列进行全长克隆及其分子生物学分析,并检测其在不同水温刺激下鳃组织中的表达变化。通过高通量转录组测序获得三角帆蚌HSP70基因（HcHSP70）长片段,采用3'RACE对其进行了3'末端克隆,经拼接得到HcHSP70 cDNA全长序列。采用多种分子生物学软件对HcHSP70 cDNA全长序列进行了特征分析,采用实时荧光定量PCR技术检测了其组织分布,并结合Western-blot技术检测蚌鳃中该基因mRNA与蛋白经不同水温刺激后的表达变化。结果显示,HcHSP70 cDNA全长为2298 bp,其中开放阅读框为1974 bp,编码657个氨基酸。预测分子量大小为71.6 Ku,pH7.0时的理论等电点为5.61。氨基酸序列分析表明,HcHSP70氨基酸序列含HSP70家族的3个标签序列（I₉DLGTTYS₁₆、I₁₉₇FDLGGGTFDVSIL₂₁₀和I₃₃₆ VLVGGSTRIPKVQK₃₅₀）,与长牡蛎及泥蚶的HSP70同源性最高（91%）。实时荧光定量PCR检测结果显示,HcHSP70在鳃、性腺、肝胰腺、外套膜及肌肉等5种被检组织中均有表达,以肝胰腺中的表达水平最高。实时荧光定量PCR与Western-blot技术检测皆表明,蚌鳃组织中HcHSP70基因与蛋白的表达量在37℃时达到最高,而在40℃水温刺激下表达水平下调至正常值,表明其在适应高温刺激时发挥了重要作用。     

基因敲入技术的突破

Baylor医学院的KoenVenken博士创新了基因敲入技术，这一突破使生物学家向果蝇体内敲入大量的DNA成为可能。传统的方法只能在果蝇基因组中插入较小的DNA片段，Venken的方法可将20000到133000大小碱基对的DNA敲入果蝇基因组。传统上，生物学家利用果蝇基因组中的P元素能够整合外源性DNA片段的特性，将目标DNA片段插入P元素，再将含有外源性DNA的P元素复合体导入果蝇基因组。这一传统方法能整合的DNA片段长度有限。Venken在研究中需要敲入很长的DNA片段到果蝇体内。于是他将含有DNA片段的P元素转入到质粒里，质粒能够较P元素自身更稳定地携带大片断DNA。     

贵州苗族新生儿HbF中G_λ/A_λ比值测定与~Aγ~T基因频率分析

用含Triton X-100的酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法测定了贵州省108例苗族新生儿脐带血胎儿血红蛋白(HbF)中。~Gγ/~Aγ值。显示107例(占99.07％)新生儿的~Gγ值在55—78％之间,均值与标准差为70.42±3.45;高~Gγ值者1例(占0.925％);低~Gγ值者未发现。用Large-pore Vydac C4柱反相高效液相层析法对108例样本进行了~Aγ~T基因频率(f~4γ~T)分析,f~4γ~T为0.0648。