稳定表达小鼠CD40L的NIH3T3细胞系的建立及其在B细胞培养和激活中的应用

该研究构建小鼠CD40L真核表达重组质粒pcDNA3.1-mCD40L,通过电转法将重组质粒转至NIH3T3细胞中。利用G418对转染后细胞进行压力筛选,获得稳定转染细胞株。提取稳定转染细胞株RNA,通过RT-PCR法检测Neo基因的mRNA表达情况。分离稳定转染细胞上清,利用ELISA法检测小鼠CD40L蛋白水平的表达情况。RT-PCR结果显示,Neo基因能够在稳定转染细胞中表达,ELISA结果显示,获得的稳定转染细胞株NIH3T3-mCD40L细胞上清中CD40L的表达量高达1.286 ng/mL。进一步活性研究表明,该细胞系能够在体外与IL-2和IL-21共同作用培养B细胞至14天,并刺激B细胞产生特异性抗体。该细胞系的成功构建,为利用体外B细胞分离培养和活化法分离特异性单克隆抗体奠定了良好的基础。     

不锈钢和氧化钛薄膜刺激内皮细胞释放NO和MCP-1的研究

目的:探讨不锈钢和氧化钛(Ti-O)薄膜对内皮细胞释放细胞因子的影响,评价生物材料表面的内皮细胞的功能.方法:用非平衡磁控溅射的方法制备Ti-O薄膜,提取人脐静脉内皮细胞(mrVEC)并种植到材料表面进行培养.第1、3、5天提取培养上清液,用NO检测试剂盒和酶联免疫吸附实验的方法进行一氧化氮(NO)和单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte Chemotactic Protein 1,MCP-1)的检测,采用环境扫描电子显微镜(SEM)进行细胞形态观察.结果:内皮细胞在Ti-O薄膜表面上生长形态保持较好,其培养上清液NO和MCP-1因子释放量都要略小于不锈钢表面的.结论:Ti-O薄膜具有较好的促进内皮化和组织相容性,有望成为血管支架的新型生物材料.     

一种基于胶体微晶纤维素的改良病毒蚀斑测定法的建立与评价北大核心CSCD

胶体微晶纤维素(avicel)是一种由微晶纤维素(microcrystalline cellulose, MCC)和羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose,CMC)制成的混合物,可用于病毒蚀斑测定。常用的avicel由FMC公司生产,其MCC和CMC比例相对固定,无法很好地适应所有类型病毒的蚀斑测定实验。本研究通过对比不同的MCC和CMC配制比例对avicel在病毒蚀斑测定作用的影响,建立了一种操作简便、实用性好和稳定性好的改良avicel病毒蚀斑测定法。为了配制不同浓度MCC和CMC的混合物,本研究制备出12种2×avicel覆盖层,测定其总体黏度及底层黏度,评估其与传统覆盖层相比,使用时的操作难易程度。进一步将12种2×avicel覆盖层制备成avicel-DMEM营养覆盖层,测定96孔板中猪流行性腹泻病毒滴度,比较12种avicel覆盖层及传统覆盖层蚀斑大小、清晰度、稳定性及滴度准确性等的差异,筛选出最佳测定方法。结果显示,12种2×avicel覆盖层中,除4.8%MCC+1.4%CMC和4.8%MCC+1.0%CMC外,其余2×avicel覆盖层在实际使用中均比2×CMC覆盖层更容易吸取和配制营养覆盖层。最后,利用avicel病毒蚀斑测定法测定96孔板中猪流行性腹泻病毒滴度,结果显示CMC浓度越高蚀斑越小,其中终浓度为0.6%MCC+0.7%CMC的avicel覆盖层测定蚀斑染色最清晰,准确度与传统覆盖层相似,但操作较传统覆盖层更简便。综上所述,本研究建立了一种操作简便、实用性好和稳定性好的改良avicel病毒蚀斑测定法,为病毒的病原学、抗病毒药物及疫苗等相关研究的展开提供了良好的实验基础。