黄瓜27kD LHC—Ⅱ复合物三维结构的电子晶体学初步研究

从黄瓜 (CucumissativusL .)叶片中分离出只含有一种亚基 (2 7kD)的LHC_Ⅱ复合物。采用batch方法获得了其二维晶体 ,大小为 0 .7μm× 1.0 μm ,衍射能力达 30 。负染样品的二维投影结果表明 ,该晶体为p3对称性 ,晶胞参数为 15 .4nm× 15 .4nm ,不同于以往报道的菠菜 (SpinaciaoleraceaL .)或豌豆 (PisumsatiumL .)LHC_Ⅱ晶体 ,为另外一种晶型。采用tomography技术 ,收集了 0°～ - 5 5°系列倾斜照片 ,进行三维重构。LHC_Ⅱ复合物是由 6个单体组成的六元环 ,相邻 2个单体分别从膜的两侧插膜 ,方向相反 ,在膜区靠疏水 疏水相互作用成二聚体 ,3个相同的二聚体相互连接成六元环。     

In vitro palmitoylation of native bovine brain G_oα

The native Goα was purified from bovine brain cortex and palmitoylated in vitro. The in vitro palmitoylation site was the same as that in vivo. The internal palmitoylation of purified native Goα was found to be largely maintained. The apparent palmitoylation ratio was significantly increased after the Goα was treated with DTT. The GTPγS binding characteristic of Goα was not influenced by palmitoylation, however, the affinity for LUVs was increased dramatically. The in vitro palmitoylation model of Goα provides a better basis for studying the functional role of G protein palmitoylation in signal transduction.     

肺腺癌A549/DDP细胞周期变化及其多药耐药性

用Fura-2/AM标记药物敏感的肺腺癌细胞A₅₄₉和抗顺铂药物的肺腺癌细胞A₅₄₉/DDP两种细胞胞内游离Ca²⁺,用碘化丙锭(PI)标记细胞DNA,检测其胞内Ca²⁺的变化及两种细胞增殖能力和细胞周期.实验结果表明,抗药性细胞株A₅₄₉/DDP胞浆内游离Ca²⁺的浓度仅为药物敏感细胞株A₅₄₉的1/3左右,同时前者的细胞增殖能力较后者明显增强,而且细胞周期也明显缩短.当用BAPTA-AM和EGTA或A₂₃₁₈₇和Thapsigargin处理细胞以降低或升高其胞内自由Ca²⁺浓度时可改变细胞的生长周期,二者也呈现明显差别.这些结果表明,对顺铂产生耐药性的人肺腺癌A₅₄₉/DDP细胞胞内Ca²⁺浓度的降低,可能影响细胞的增殖,缩短细胞的生长周期,特别是影响起决定作用的G1期,从而有利于肿瘤细胞多药耐药特性的维持.     

一种改进的纯化和鉴定牛脑皮层Gs蛋白的方法

用１％胆酸钠和１５％孢和硫酸铵相结合的方法,从牛脑皮层细胞膜中抽提得到主要含激活型Ｇ－蛋白和腺苷酸环化酶两种蛋白组分的制剂,然后通过Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ柱将两者分开,将含Ｇｓ高活力的级分用庚胺－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱进一步分离,即可获得高活力的Ｇｓ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为分子量４５０００和３６０００的两条蛋白带,该法具简便,快速,重复性好、产率高等优点,且可同时获得无Ｇｓ污染的ＡＣ。用无Ｇｓ污     

膜脂物理状态的变化与肺腺癌细胞A549的顺铂耐药性

用荧光探剂DPH分别标记药物敏感的肺腺癌细胞A549和抗顺铂药物的肺腺癌细胞A549/DDP, 对其膜脂物理状态的变化研究结果表明, 对顺铂药物敏感的A549的DPH各向异性值(P)为0.162, 而抗顺铂药物的A549/DDP者为0.194, 统计分析表明二者具有明显的差异. 当用可探测细胞膜脂双层不同层次的荧光探剂2-AS, 7-AS和12-AS进一步测定不同层次的膜脂质分子的流动性变化时, 结果表明: 分别反映膜表层和中层的2-AS和7-AS的各向异性值, 对敏感性的A549细胞分别为0.134和0.144, 具抗药性的A549/DDP细胞则分别为0.171和0.178. 而反映膜深层脂质分子变化的12-AS的各向异性值二者却无显著差异. 这提示, 两种细胞膜脂流动性的变化主要反映在膜的表层和中层. 同时, 用MC540荧光探剂标记两种细胞膜在FCM (flow cytometry)上测定反映膜脂质分子头部堆积程度差异的二维散点图及频数分布直方图的结果分析也表明, A549/DDP细胞膜脂质分子的有序性增加, 即流动性降低. 用气相色谱测量两株细胞膜脂肪酸的不饱和度, A549/DDP细胞膜脂肪酸的不饱和度明显低于A549细胞, 进一步肯定了上述结果. 结果提示, 在药物长期作用下, 膜脂物理状态的变化亦可能是肿瘤细胞具有抗药性的原因之一.     

杨福愉教授与我国的生物膜研究

杨福愉教授与我国的生物膜研究黄有国（中国科学院生物物理研究所,北京）匡廷云（中国科学院植物研究所,北京）杨福愉教授,中国科学院院士,生物化学家。生于１９２７年１０月,浙江镇海人。１９５０年毕业于浙江大学化学系。他长期从事于生物膜的结构与功能研究。１９...     

天然Goα的体外棕榈酰化

从牛脑皮层膜中提纯天然Goα,并成功实现了天然Goα的体外棕榈酰化.天然Goα的体外棕榈酰化具有特异性,其修饰位点与体内棕榈酰化位点相同,发现纯化的天然Goα仍然保留较大比率的内源性棕榈酰化,而DTT的处理能大大提高表观棕榈酰化效率.棕榈酰化对天然Goα结合GTPγS的性质并无明显影响,但能影响其对大单层脂质体的亲和性.天然Goα的体外棕榈酰化模型的建立为直接研究棕榈酰化在G蛋白信号转导中的功能提供了良好基础.     

单细胞LDL受体与清道夫受体活性的同时测定

结合应用激光扫描共聚焦显微镜系统(LSCM)和DiI-AcLDL及BODIPY FL-LDL两种荧光配基选择性标记技术,可在单细胞水平上同时测定LDL受体和清道夫受体活性.C57BL/6J小鼠巨噬细胞用终浓度为5mg/L的 DiI-AcLDL及BODIPY FL-LDL,在37℃负载5 h左右的条件下可获得良好的标记效果.两种荧光配基选择性标记具有高度特异性,在激光共聚焦显微镜下可清晰、定量地观察细胞对LDL和AcLDL摄入,是一种灵敏度高且可定量研究LDL受体和清道夫受体功能的非同位素方法.     

Cardiolipin is essential for higher proton translocation activity of reconstituted F_o

The Fo membrane domain of FoF1-ATPase complex had been purified from porcine heart mitochondria. SDS-PAGE with silver staining indicated that the purity of Fo was about 85% and the sample contained no subunits of F1-ATPase. The purified Fo was reconstituted into liposomes with different phospholipid composition, and the effect of CL (cardiolipin), PA (phosphatidic acid), PI (phosphatidylinositol) and PS (phosphatidylserine) on the H+ translocation activity of Fo was investigated. The results demonstrated that CL, PA and PI could promote the proton translocation of Fo with the order of CL>PA>>PI, while PS inhibited it. Meanwhile ADM (adriamycin) severely impaired the proton translocation activity of Fo vesicles containing CL, which suggested that CL's stimulation of the activity of reconstituted Fo might correlate with its non-bilayer propensity. After Fo was incorporated into the liposomes containing PE (phosphatidylethanolamine), DOPE (dioleoylphosphatidylethanolamine) as well as DEPE (dielaidoylphospha     

Mg~（2＋）促进线粒体H~＋－ATP酶的重建机理──H~＋－ATP酶复合体亚基水平的研究

用专一性标记蛋白质巯基的荧光探剂ａｃｒｙｌｏｄａｎ测定含Ｍｇ＾２＋的Ｆ０－ＡＴＰ酶或Ｆ０－ＯＳＣＰ－Ｆ１－ＡＴＰ酶的脂酶体的构象与无Ｍｇ＾２＋者明显不同,前者的蛋白质的－ＳＨ基团处于疏水性更强的微环境中;在有Ｍｇ＾２＋和ＯＳＣＰ同时存在下重建的Ｆ０－Ｆ１－ＡＴＰ酶脂酶体较无ＯＳＣＰ者表现更高的水解活力或膜电位,表明ＯＳＣＰ增强Ｍｇ＾２＋的促进作用,这进一步提示Ｍｇ＾２＋通过改变膜脂的物理状态促进线