香蕉枯萎病菌4号生理小种中CHS基因家族的克隆与蛋白序列分析

为了解香蕉枯萎病菌4号生理小种(FOC4)中的几丁质合酶(Chitin synthase,CHS)基因的特点,从而为进一步研究相关基因功能奠定基础。根据丝状真菌中CHS基因设计简并引物,采用RT-PCR的方法扩增得到FOC4中全长cDNA,测序后对该基因家族编码的蛋白进行分析。结果表明,FOC4共有8个CHS基因,根据蛋白聚类分析表明可其可划分为2个家族,并可根据氨基酸序列特征进一步划分为7个小类,该基因家族成员在不同种镰刀菌中保守程度较高。     

马铃薯多酚氧化酶基因克隆及反义表达载体构建

从甘农薯1号马铃薯试管苗叶片中提取总DNA,根据Genebank报道的马铃薯多酚氧化酶基因(PPT32)序列,设计合成了带有BamHⅠ、SacⅠ特定酶切位点的2对特异引物,通过PCR获得l840bP和476bP的扩增产物。测序结果表明,l840bp的扩增产物与Oenebank中发表的序列一致,476bp的扩增产物正是欲扩增的马铃薯多酚氧化酶基因的同源片段。将2个扩增产物反向连接到表达载体PC3中,通过双酶切鉴定后,按直接导入法实现反义基因表达载体质粒向农杆菌EHA105的导人;并经PCR鉴定证明,此质粒已整合到农杆菌Ti上。     

用木素木霉与凤尾菇菌两菌交替发酵法提高纤维素酶活力研究

用木素木霉和凤尾菇菌研究了它们的交替发酵的酶活力,发现它们交替发酵的酶活力明显比单一菌种培养时为高,两者的差异高的竟达１５倍以上,这为提高纤维素酶的产量和酶活性开辟了一条新的酶发酵工艺途径。     

金龟子绿僵菌菌株生长环境变量的优化

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae var.anisopliae)是一种广谱的昆虫病原真菌,提高菌株的生长速率及产孢量具有重要的意义.分别对2株金龟子绿僵菌菌株MA4与MAlml的菌丝生长及次代产孢具有影响的培养温度、培养基初始pH、装液比、光照及微量元素等环境因素进行了测定.经过优化得到2菌株最佳培养条件分别为:MA4菌株在28℃、pH 7、装液比为75ml/250ml、加入微量元素Mn全光照培养时生长最好、次代产孢量最高;MAlml菌株在28℃、pH9、装液比为75ml/250ml、加入微量元素Cu、黑暗培养时生长最好、次代产孢量最高.     

海南霸王岭热带雨林常见植物丛枝菌根真菌调查

对海南霸王岭热带雨林的12科16种常见植物的丛枝菌根状况进行了调查,用碱解离-酸性品红染色法进行了真菌鉴定。结果表明,13种植物形成典型的丛枝菌根,占所调查植物的81%;3种植物没有形成丛枝菌根,占所调查植物的19%。用湿筛沉淀法从这些植物根际土壤中共分离鉴定出了3属11种丛枝菌根真菌(AMF),即无梗囊霉属(Acaulos-pora)3种,球囊霉属(Glomus)7种,巨孢囊霉属(Gigaspora)1种;其中,球囊霉属是样地的优势属。在AMF中,孔窝无梗囊霉(A.foveata)分离频率最高,在14种植物的根际土中都有发现;此外,大果球囊霉(G.macrocarpum)的相对多度最大,为59%,具有最强的产孢能力。同时,在11种植物的根中发现了深色有隔内生真菌(DSE),占调查植物的69%;其中,11种植物同时被DSE和AMF感染。     

水稻凋亡基因rPDCD5的克隆和表达分析

从水稻愈伤组织抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)文库中分离出一个PCD相关基因的EST片段,根据水稻基因组的序列设计引物,从汕优63中分离与克隆出rPDCD5的全长cDNA。rPDCD5包含387bp的可译框,编码由128个氨基酸构成的蛋白质。序列比对分析显示,该检测的蛋白质与已知PDCD5的高度同源。半定量实时PCR分析证实了该基因在环境因子（低温处理和NaCl处理）胁迫下表达呈正调控。     

鸡蛋花花叶病毒3'端序列的克隆与分析

根据烟草花叶病毒组（Ｔｏｂａｍｏｖｉｒｕｓｅｓ）３’端非编码区保守区域,人工合成下游引物Ｐ１,Ｐ２,Ｐ３,分别以这些引物引导在反转录酶作用下合成双链ｃＤＮＡ,并克隆到ｐＢＳ载体上。ＨｉｎｄⅢ＋ＰｓｔⅠ双酶切分析重组子后,得到１５个阳性重组子,其中重组子ｐＢＦ３含有２ ４３２ ｂｐ外源ＤＮＡ。序列分析结果表明：该２ ４３２ ｂｐ的序列含２个开放读框,即鸡蛋花花叶病毒移动蛋白基因序列和外壳蛋白基因序列     

香蕉枯萎病菌中Hog1 MAPK同源基因FoHog1敲除突变体的生物学特性

【目的】研究香蕉枯萎病菌4号生理小种中促分裂原活化蛋白激酶基因FoHog1的结构特点及其功能【方法】通过PCR和RT-PCR的方法获得了FoHog1基因序列并进行生物信息学分析,利用PEG介导的原生质体转化法得到了FoHog1基因缺失突变体,分析敲除突变体与野生型的生物学特性差异【结果】FoHog1基因编码一个含有357个氨基酸的蛋白,该蛋白在不同种镰刀菌中高度保守。通过对敲除突变体的研究发现,该基因缺失后菌丝密度下降,产孢量与菌丝干重明显降低,对乙酸钠和氯化铵的利用率下降,对温度、pH及渗透压等外源胁迫更为敏感。通过致病力实验发现,基因敲除突变体的定殖能力有所降低【结论】尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种中FoHog1基因参与调控菌丝生长、分生孢子生成、乙酸钠和氯化铵代谢、渗透压胁迫反应及致病相关过程。     

昆虫神经肽allatostatin的研究进展

昆虫神经肽咽侧体抑制激素(allatostatin,AST)是一类有几个至几十个氨基酸构成的小肽,它能通过咽侧体抑制保幼激素的合成,从而影响昆虫的生长发育及行为等一系列的生理过程,这使其极有可能成为一种新型控制害虫的杀虫剂。本文就咽侧体抑制激素的分布、功能、结构、代谢与降解进行综述,并探讨了AST的研究方法。     

中国柱花草炭疽病原菌遗传多态性的RAPD分析

在对中国柱花草炭疽病进行广泛调查和病原采样收集的基础上,利用RAPD分子标记技术对43个代表性菌株进行了基因组DNA分析,并与276份国外菌株进行了综合聚类分析。 结果表明所用8个引物的扩增片段位于0.3～2.8kb之间, 菌株间呈现显著的DNA多态性。以柱花草起源中心——南美的柱花草炭疽菌分类为基础,中国柱花草炭疽菌可划分成3大类型即Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ类。中国菌株与来自柱花草起源中心——南美的菌株相比之下,其生物多样性和遗传变异性则相对简单。就中国菌株而言海南菌株与广西、广东菌株相比多样性较丰富, 中国柱花草胶孢炭疽菌正在出现种内遗传分化。 从聚类结果看,通常来自于同一个地理区域或同一个寄主基因型的菌株聚成一类, 即同一RAPD聚类组内的菌株通常来自于同一寄主基因型或同一地理区域。说明来自不同寄主基因型或物种的炭疽菌在遗传基因上具有专化性,而地理上隔离的国家或地区的柱花草炭疽病原菌各自具有相对独立的进化途径。