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设计用于SYBR Green Ⅰ法实时定量逆转录多聚酶链反应(QRT—PCR)检测大鼠尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)mRNA的引物。从基因库获取靶基因及相关序列,充分收集和分析相关生物信息学数据,应用Oligo 6.22设计出一对长度为21bp的引物,其GC含量为52.4%;上下游引物3’最稳定二聚体和及发夹结构的能量分别为-1.5、-0.40kcal/mol和-3.5、-0.90kcal/mol,引物间最稳定二聚体为-3.1kcal/mol。5’端和中间AG值较高,高于3’端AG;引发效率分别455和403。实验证明,该引物能够高效、特异地实现对靶序列的检测,适用于SYBR GreenⅠ法实时定量检测(uPA)mRNA。 相似文献
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目的:研究孕早中期血清抵抗素、脂联素及铁蛋白水平与妊娠期糖尿病的相关性。方法:选取孕早期(11-13周)、孕中期(24-28周)诊断为GDM的孕妇46例作为试验组(GDM组),及同期糖代谢正常的孕妇46例作为对照组(NGT组),检测和比较两组孕早、中期血清脂联素、抵抗素、铁蛋白水平,计算各期胰岛素稳态模型抵抗指数(HOMA-IR),并对孕早中期血清抵抗素、脂联素及铁蛋白(SF)水平与HOMA-IR进行相关性分析。结果:与NGT组比较,GDM组孕早、中期血清脂联素水平均显著降低,且孕早期血清脂联素水平与HOMR-IR呈负相关(r=-0.21,P0.05);孕早、中期血清SF水平均显著升高,且孕早期血清SF水平与IR呈正相关(r=0.238,P0.05);孕早期血清抵抗素水平无明显变化(P0.05),但孕中期血清抵抗素水平显著降低(P0.05)。多元线性回归分析结果显示孕早期血清铁蛋白水平对HOMA-IR的影响更显著,孕早期SF每升高1μg/l,HOMA-IR提高0.179。孕早期SF水平作为预测GDM发病的血清学阈值为≥23.2μg/L。结论:孕早期血清脂联素及SF水平变化均与GDM的发病相关,孕早期血清SF水平可能作为早期诊断和预防GDM的血清学指标。 相似文献
93.
肝癌为我国常见的恶性肿瘤之一。到目前为止,肝癌的治疗方法中,手术治疗仍为肝癌患者能获得较好生存率的首选方法。但由于很多患者发现肝癌时,晚期患者较多,很多肝功能较差剩余肝组织不能代偿,或全身情况较差,已不适合手术治疗。基于此种情况,现很多非手术治疗方法广泛应用于临床。而射频消融术治疗肝癌,作为一种非手术治疗方法,有着微创,疗效好,并发症少,安全,可反复应用等优点,近年来已成为治疗肝癌的一种常用手段。射频消融术治疗肝癌可分为开腹射频,腔镜下射频,影像学引导下经皮射频等。治疗方式可单独射频治疗,也可与介入治疗,酒精注射,静脉全身化疗等联合应用。现从射频消融术治疗肝癌的原理,适应症,方式,并发症,及预后几方面回顾总结该技术。 相似文献
94.
骨髓间质干细胞(MSCs)是目前基因工程正在探讨应用的靶细胞,为构建带有脑源性神经营养因子(Bdnf)基因慢病毒载体并使其在大鼠骨髓间质干细胞中表达,采用RT-PCR技术获得大鼠Bdnf基因编码区(CDS)片段,限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒PNL-BDNF-IRES2-EGFP,在脂质体介导下与包装质粒HELPER,包膜质粒VSVG共转染293T细胞包装生产慢病毒。所获慢病毒感染大鼠MSCs(rMSCs)后,PCR和免疫细胞化学法检测在rMSCs中Bdnf基因的插入和表达。结果显示所获的Bdnf基因经测序后与GenBank报道序列完全一致。重组慢病毒载体质粒PNL-BDNF-IRES2-EGFP经鉴定正确。三质粒共转染293T细胞成功,收集、浓缩病毒后测定其滴度为6.7×107TU/mL, PCR证实Bdnf基因插入病毒基因组。感染rMSCs后RT-PCR、免疫细胞化学染色及Western检测各组细胞均有BDNF蛋白表达,其中试验组BDNF-rMSCs更大量表达BDNF,与其余2组(Mock-rMSCs、rMSCs)比较差异具有统计学意义。构建带有Bdnf基因慢病毒载体并在大鼠骨髓间质干细胞中成功表达,为今后基因修饰干细胞的移植后长期观察研究奠定了基础。 相似文献
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97.
98.
于淼舒张锐符明岩吴晓秋孙鑫李世博 《现代生物医学进展》2012,12(19):3651-3653
目的:探讨脑电双频指数(BIS)对靶控瑞芬太尼输注在小儿眼科手术中的指导意义。方法:择期小儿眼科手术80例,随机均分为(A组)BIS反馈调控瑞芬太尼组,(B组)根据经验用药组,比较两组中瑞芬太尼的用量,血流动力学以及苏醒时间。结果:A组瑞芬太尼用量明显低于B组(P<0.05),B组血流动力学,BIS值波动明显大于A组(P<0.05),B组苏醒时间明显短于A组(P<0.05)。结论:小儿眼科手术中,BIS反馈调控瑞芬太尼靶控输注(TCI)技术可降低瑞芬太尼用量,有助于判断全麻深度,指导麻醉用药。 相似文献
99.
【目的】鉴定结核分枝杆菌基因组上MazF同源蛋白基因与其上游基因是否组成毒素-抗毒素系统,阐明毒素蛋白的作用机理,并初步探讨毒素-抗毒素系统在营养缺乏时的表达调控。【方法】在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌中将MazF同源蛋白单独表达或与其对应的抗毒素蛋白共同表达,鉴定MazF同源蛋白对细菌生长的抑制作用以及其对应的抗毒素蛋白能否消除这种生长抑制;通过体外RNA切割实验,检测MazF同源蛋白是否具有RNA切割活性;检测正常生长条件下和饥饿条件下毒素-抗毒素系统的启动子活性,探讨其在应激条件下的表达调控。【结果】结核分枝杆菌MazF同源蛋白中,Rv0659c、Rv1495和Rv1942c不具有抑制细菌生长的毒素蛋白活性,Rv1991c、Rv2801c、Rv1102c和mtPemK能够抑制细菌生长,而且它们的抑制作用可以分别被其对应的抗毒素Rv1991a、Rv2801a、Rv1103c和mtPemI解除。Rv1991c、Rv2801c和Rv1102c具有RNA切割活性,mtPemK则不能切割RNA。Rv1991a-1991c和Rv2801a-2801c系统的启动子在饥饿条件下活性显著升高。【结论】结核分枝杆菌基因组上Rv1991a-1991c、Rv2801a-2801c、Rv1103c-1102c和mtPemI-mtPemK是毒素-抗毒素系统。毒素蛋白Rv1991c、Rv2801c和Rv1102c通过切割RNA发挥抑菌或杀菌活性,mtPemK具体作用机理目前还不清楚。Rv1991a-1991c和Rv2801a-2801c系统可能参与结核分枝杆菌在营养匮乏条件下的生长调控。 相似文献
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