全自动血细胞分析仪自动推片致淋巴细胞变异的探讨

目的:探讨全自动血细胞分析仪自动推片系统致乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝血淋巴细胞形态变异的机制。方法:采用全自动血细胞分析仪自动推片系统对选择西京医院门诊228例受试者,其中儿童80例、成人100例、经临床及骨髓穿刺细胞学确诊的淋巴细胞性白血病(CLL)21例、粒细胞性白血病15例和单核细胞性白血病12例,均用EDTA-K2(2.0 mg/m L)专用管采血2m L,在1 h内完成仪器推片及手工推片、瑞-姬染色,经2位经验丰富的主管检验师显微镜检查分类比较。结果:228例受试者EDTA-K2抗凝血,仪器自动推片细胞分类Ⅱ型淋巴细胞(18.65±2.35)%明显高于手工推片(4.67±2.45)%,统计学处理具有显著性差异(P0.01)。正常组与粒细胞性白血病和单核细胞性白血病患者抗凝血,仪器自动推片,淋巴细胞形态没有明显改变(4.36±2.17)%与手工推片(4.21±2.14)%比较没有差异(P0.05),淋巴细胞性白血病(CLL)患者的淋巴细胞形态有明显的改变仪器为(85.25±5.26)%与手工推片(4.25±2.19)%有显著性差异(P0.01),淋巴细胞体积增大,外形不规则,着色不均,边缘蓝色较深,胞核不规则,细致膨胀,淡紫红色,主要拟为Ⅱ型(不规则型/单核细胞型)异型淋巴细胞。结论:全自动血细胞分析仪自动推片系统对EDTA-K2活化膨胀的淋巴细胞失控而致淋巴细胞形态拟Ⅱ型异型淋巴细胞,手工推片已控制所以细胞形态不易改变,确切机制还有待进一步研究。     

速生桉叶水溶提取物对HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨速生桉叶水溶提取物对HepG2细胞的抑制增殖作用及凋亡的影响。方法:采用MTT法检测速生桉叶水溶提取物对HepG2细胞增殖抑制作用;采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测速生桉叶水溶提取物处理后HepG2细胞凋亡的情况。结果:MTT分析显示,当细胞培养24 h时,稀释5、10倍HepG2细胞抑制率分别为(47.32±1.11)%、(15.76±3.50)%;当细胞培养48 h时,稀释5、10倍HepG2细胞抑制率分别为(44.13±10.93)%、(25.93±8.37)%;当细胞培养72 h时,稀释5、10倍HepG2细胞抑制率分别为(59.47±6.90)%、(41.02±4.27)%。流式细胞术结果显示,速生桉叶水溶提取物稀释30倍时可诱导31.03%的HepG2细胞进入早期凋亡阶段,随着稀释倍数的减少被诱导进入凋亡阶段的细胞数目逐渐升高。另外,随着水溶提取物作用时间的延长,进入凋亡阶段的细胞数目也逐渐升高。结论:速生桉叶水溶提取物对HepG2细胞增殖与凋亡具有量-效、时-效关系。     

吸烟小鼠呼吸道上皮细胞上皮钙粘附素表达的研究

通过免疫荧光法检测不同吸烟时间小鼠呼吸道上皮细胞上皮钙粘附素（Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ,Ｅｃｄ）表达的动态变化,并采用显微荧光光度术进行定量分析。结果表明,首次吸烟１ｈ后呼吸道上皮细胞Ｅｃｄ表达与正常对照组比较明显下调（Ｐ＜００１）,４６Ｗ后降到最低水平。以后逐渐上调,吸烟８Ｗ后Ｅｃｄ表达恢复正常,气管上皮细胞表达高于正常（Ｐ＜００１）。提示,Ｅｃｄ表达的动态变化在呼吸道上皮细胞损伤与修复过程中起重要作用     

三种不同表面活性剂对羟基磷灰石纳米颗粒的表面修饰的比较

目的:本研究旨在通过不同方法修饰羟基磷灰石纳米颗粒并检测其稳定性及分散性。方法:首先采用水合热合成法制备羟基磷灰石纳米颗粒,然后用透射电镜(TEM)和场发射扫描电镜(SEM)对其表面形态结构进行表征。我们首次用溴化十六烷三甲基铵(CTAB),PEG2000和人血清对羟基磷灰石纳米颗粒通过共价结合或表面吸附的方式进行表面嫁接,并利用透射电镜,傅里叶红外光谱(FT-IR)和X射线衍射(XRD)对新合成的这三种纳米羟基磷灰石复合物的形貌,结构和晶粒粒径进行表征。对这三种羟基磷灰石纳米颗粒悬浮液的时间沉降曲线进行分析。在分散性上通过检测这三种羟基磷灰石复合物悬浮液在不同pH值下的Zeta电位并绘制Zeta-pH曲线。结果:我们发现CTAB修饰的羟基磷灰石纳米颗悬浮液的悬浮稳定性最佳,其次是PEG2000,最后是人血清。在pH=7.0时,CTAB修饰的羟基磷灰石纳米颗粒的zeta电位值是25.68 m V,而PEG2000修饰的Zeta电位是4.32m V,人血清修饰的Zeta电位是-13.23m V。结论:CTAB表面修饰的羟基磷灰石纳米颗粒相对于其它两种表面活性剂复合物具有更好的分散性和悬浮稳定性,与DNA/RNA结合能力更强。本课题的结果给羟基磷灰石纳米颗粒载体的应用提供了一种新的选择,有望利用亲和力更高的基因载体实现基因治疗,具有广阔的应用前景。     

乳腺癌中α- 晶状体B 链蛋白表达的临床病理研究

目的:探讨α-晶状体蛋白B链(Alpha-crystallin B chain,CRYAB)在乳腺癌中表达的临床病理学意义。方法:收集乳腺癌病例及相应的临床资料包括随访资料,应用IHC染色方法检测CRYAB在乳腺良性病变(BBD)、无淋巴结转移乳腺癌(NMBC)、有淋巴结转移乳腺癌(MBC)及配对淋巴结转移灶(PMLN)中的表达,分析CRYAB表达与乳腺癌临床病理指标(患者年龄、肿块大小、淋巴结转移情况、临床分期、组织学分型和分级、雌孕激素受体和c-cerb B2表达情况、绝经情况)间及生存状态的关系。结果:CRYAB在对照组BBD组、NMBC组、MBC组、PMLN组的阳性表达率分别为97.9%(46/47)、44.6%(37/83)、13.1%(14/107)、10.8%(11/107),其中BBD组和NMBC组,BBD组、NMBC组分别与MBC组、PMLN组均存在显著性差异。CRYAB表达与淋巴结转移(P0.001)、临床分期(P=0.001)、组织学分级(P=0.037)和雌孕激素受体表达情况(P0.001)有显著相关,无淋巴结转移组的阳性表达率显著高于有淋巴结转移组,临床晚期的阳性表达率低于临床早期,雌孕激素受体阳性病例的阳性表达率显著低于雌孕激素受体阴性病例。生存分析结果显示CRYAB阳性表达的患者生存期比CRYAB阴性表达的患者生存期更长(p=0.037)。结论:CRYAB与乳腺癌的转移、临床分期、生存状态、雌孕激素受体表达有关。     

Fas 相关死亡结构域蛋白在乳腺癌中表达的临床病理研究

目的:探讨Fas相关死亡结构域蛋白(Fas-associated death domain protein,FADD)在乳腺癌中表达的临床病理学意义。方法:收集乳腺癌病例及相应的临床资料包括随访资料,应用免疫组织化学技术检测乳腺良性病变,有/无淋巴结转移的乳腺癌及配对淋巴结转移灶中FADD的表达,观察分析FADD表达与乳腺癌患者年龄、肿块大小、临床分期、组织学类型和分级、雌孕激素受体水平等临床病理指标间的关系。结果:免疫组化检测结果显示良性乳腺病变组中FADD的阳性表达率(85.1%,40/47)与无淋巴结转移的乳腺癌组(45.8%,38/83),伴有淋巴结转移的乳腺癌组(67.3%72/107)和淋巴结转移灶(45.8%,49/107)组织中FADD阳性表率均有显著性差异(P值分别0.001,=0.022和0.001);此外,伴有淋巴结转移的乳腺癌组中FADD阳性表达率也均与其它三组中FADD阳性表达率之间具有显著性差异(P值分别为0.003,0.001和0.022)。FADD与患者的确诊年龄(P=0.049)和淋巴结转移有显著性相关(P=0.003),与肿瘤大小、临床分期、组织学类型、组织学分级、雌孕激素受体及cerb B-2的表达情况和月经史无明显相关性(P0.05)。生存分析显示FADD阳性表达的患者较FADD阴性患者的生存期更短。结论:FADD与乳腺癌淋巴结转移和预后有关。     

基于亲和层析方法研究栀子苷的药物靶标

目的:运用亲和层析方法初步探索栀子苷的特异结合蛋白。方法:采用环氧氯丙烷(Epichlorohydrin,ECH)作为活化试剂对琼脂糖凝胶进行环氧基修饰,通过偶联栀子苷与环氧活化的琼脂糖凝胶(epoxy activated Sepharose CL-6B,EAS6B),制备以栀子苷为配基的亲和介质,以高效液相色谱法验证其偶联。利用栀子苷-EAS6B亲和介质,从小鼠脑组织总蛋白中筛选特异结合蛋白。结果:优化偶联条件后,得到最佳的活化反应条件:15%ECH、0.8 mol/L Na OH于37℃反应3 h,环氧基密度达到122μmol/m L,琼脂糖凝胶亲和介质的偶联量为19.53%,偶联率为17.08μmol/m L。从小鼠脑组织总蛋白中筛选得到3个栀子苷特异结合蛋白的条带,经质谱鉴定,发现主要是由热休克蛋白、脑酸溶性蛋白和谷氨酰胺合成酶等组成。结论:确立了琼脂糖凝胶环氧活化的最佳条件,制备了栀子苷-EAS6B亲和介质并应用其筛选出栀子苷的结合蛋白。     

呼吸机相关性肺炎的常见病原菌耐药性分析

目的:探讨呼吸机相关性肺炎(VAP)的常见病原菌并分析其耐药性,为临床治疗提供依据。方法:选取我院收治的135例VAP患者的临床资料,分析其病原菌分布以及抗菌药物的耐药性。结果:135例患者中共分离出183株病原菌,其中革兰氏阴性菌135株(占73.77%),革兰氏阳性细菌33株(占18.03%),真菌15株(占8.20%)。革兰氏阴性菌主要为鲍曼不动杆菌,占35.52%,革兰氏阳性细菌主要为金黄色葡萄球菌,占9.84%,革兰阳性菌无一对万古霉素耐药,除了米诺环素总耐药率为42.42%外,其余病原菌对于常用的药物总耐药率均大于60.0%,革兰阴性菌普遍存在多药耐药现象。结论:引起VAP患者感染的主要致病菌为革兰阴性菌群,且存在严重的多重耐药现象,在临床上应加强对VAP疾病的预防和控制,合理应用抗菌药物。     

基于熵值法的独立董事综合评价体系研究——心浙江民营上市公司为例

在公司治理领域中引入产业组织理论的S-C-P分析框架,研究将独立董事的价值实现划分为制度结构、独立董事行为表现以及治理效果三个维度。研究针对不同维度的不同影响因素选择具体的衡量指标,采用熵值法确定各指标和维度的权重,最终形成综合独立董事价值指数和三个分维度指数。运用浙江民营企业治理现状的相关数据对评价体系的有效性进行检验,结果表明,浙江民营上市公司的独立董事价值实现程度存在一定的梯度差异,且构成独立董事价值评价体系的各价值实现环节得分很不均衡。为此,企业应以防范内部代理问题和改善内部治理机制为目的,从制度结构和独立董事监督态度与行为两方面共同推动独立董事价值的最终实现。     

BRAF~(T1799A)突变、RET/PTC重排对术前诊断甲状腺乳头状癌的作用

目的:探讨术前超声引导下细针抽吸细胞学检查(US-FNAB)联合BRAFT1799A突变、RET/PTC1及RET/PTC3重排对诊断甲状腺乳头状癌(PTC)的特异性及敏感性,为临床术前准确诊断PTC选择适用的分子标记物。方法:收集346个超声怀疑为甲状腺恶性结节的US-FNAB细胞标本及对应结节(152个)的术后新鲜组织,采用PCR分别扩增BRAFT1799A、RET/PTC1及RET/PTC3基因,产物经基因测序证实。结果:346个甲状腺术前穿刺的结节中,选择观察而未手术的结节192个,手术治疗152个,未接受手术建议的结节2个。术前US-FNAB的细胞标本中共检测到51个结节发生BRAFT1799A突变,其细胞学分类为36个恶性,11个可疑恶性,4个良性。该51个结节术后病理证实均为PTC。20个发生RET/PTC1重排,其术前细胞学结果为17个恶性,2个可疑恶性,1个滤泡性肿瘤或可疑滤泡性肿瘤,术后病理证实均为PTC。3个结节发生RET/PTC3重排,其术前细胞学结果为恶性,术后病理证实均为PTC。对45个术前US-FNAB标本检测BRAFT1799A突变阴性而术后病理证实为PTC的结节,将其对应结节的术中组织行该基因的检测,仅有1个结节的术后组织中检测到该突变。本研究中,术前US-FNAB联合多分子标志物的检测,将细胞学诊断PTC的敏感度由73.96%提高到92.71%。结论:术前US-FNAB联合多分子标志物的检测可提高其诊断PTC的敏感性及特异性,并有助于患者的个体化诊治。