中国苹果属植物染色体研究

本文报道了中国苹果属Malus Mill．21种36类型的核型和6个多倍体类型的减数分裂联会构 型。 (木+多)(木+衣)海棠组Sect．Docyniopsis和花楸苹果组Sect．Sorbomalus中的滇池海棠系Ser． Yunnanenses 属2A型,陇东海棠系Ser．Kansuenses中的变叶海棠M．toringoides和花叶海棠M． transitoria属2A、2B则,三叶海棠系Ser．Sieboldianae属2B型,苹果组Sect．Malus中的苹果系 Ser．Pumilae和山荆子系Ser．Baccatae除小金海棠M．xiaojinensis 2B型外,均属3B型。减数分 裂观察结果有同源四倍体,节段异源三倍体和异源三倍体类型。本文还讨论了种类间在核型上的差异、栽培种的起源,核型的演化趋势以及无融合生殖类型的分类学处理。     

病原真菌生态学研究现状及方法

通过形态学、生理生化学及分子生物学等方法鉴定由自然界分离的真菌菌种,构建系统发生树,了解菌种间亲缘关系,评估种间和种内的进化规律,了解真菌与其所处环境的相互关系,是真菌生态学的主要研究目的之一。本文就真菌与自然界和动物宿主的相互关系,环境中真菌的分离和鉴定方法及系统发生学研究及现状进行综述,以期了解致病真菌的生存环境、种类发生、感染途径等,达到尽早控制感染源、探讨致病性及防治疾病传播的目的。     

成人依恋理论及其测量

依恋(attachment)是人类适应生存的一个重要方面,它形成于婴幼儿时期,贯穿人的一生,是一种稳定而持久的情感联结。本文以传统的依恋理论为基础,对成人依恋的概念进行界定,对其类型和维度进行划分,对其测量工具进行归纳,着重介绍了访谈类和问卷类测量工具。在成人依恋研究现状的基础上,对其未来发展方向进行了展望。     

绿肉山楂叶中五种黄酮类成分含量动态变化

为充分利用山楂叶用资源,采用反相高效液相色谱法,以ZORBAX Extend-C18色谱柱（250×4.6 mm,5 μm）,乙腈-0.5%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长345 nm,柱温25℃,对不同生长时期的绿肉山楂叶中牡荆苷、牡荆素2″-O-鼠李糖苷、金丝桃苷、芦丁和槲皮素含量进行测定。结果表明,在此分析检测条件下牡荆苷、牡荆素 2″-O-鼠李糖苷、金丝桃苷、芦丁和槲皮素的精密度、重复性、稳定性及平均加样回收率试验的RSD值均小于3%,方法准确可靠。绿肉山楂叶中含有的黄酮类成分主要以牡荆苷和金丝桃苷为主,且二者含量变化规律与其总黄酮含量变化相似,均在10月初含量达到最高;此时采摘,其质量完全符合《中国药典》的有关规定,故绿肉山楂可作为一种新的药用资源来进一步开发利用。     

hPARP1酶在杆状病毒/昆虫细胞中的高表达及快速纯化

PARP1是动物细胞内的一种重要的DNA修复酶。近几年PARP1作为新型的抗癌靶点,受到广泛的关注。为了获得高活性的PARP1,首先将hPARP1基因克隆到载体pFastBacTM1中,构建转移载体pFast-hPARP1;然后转化大肠杆菌Escherichia coli DH10Bac感受态细胞中。其次,通过位点特异性转座,将hPARP1基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建表达质粒Bacmid-hPARP1。最后,通过脂质体将表达质粒转染Sf9昆虫细胞。Western blotting和酶活测定法对hPARP1的表达和活性进行分析。采用3-氨基苯甲酰胺亲和层析柱对收获的昆虫细胞中表达的hPARP1酶进行纯化。Western blotting结果表明在昆虫细胞中hPARP1酶表达成功。经3-氨基苯甲酰胺亲和层析柱纯化后,Sf9昆虫细胞表达出的hPARP1酶的比活由0.051 nmol/(minμg)提高到了1.988 nmol/(min.μg),而且每100 mL的细胞中能够收获约3.2 mg酶。实验结果为PARP1大规模生产和应用提供了可参考利用的技术。     

禽多杀性巴氏杆菌粘附蛋白Cp39的交叉免疫保护作用

【目的】比较体内外增殖禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白、天然粘附蛋白Cp39和重组粘附蛋白rCp39对小鼠的交叉保护作用。【方法】用NaCl提取法制备鸡胚尿囊液和DSA培养基增殖的C48-3株荚膜蛋白,并用电洗脱方法纯化Cp39蛋白,将rCp39蛋白以可溶形式表达在大肠杆菌BL21后,用Amylose Resin亲和层析柱纯化。分别以100μg剂量的鸡胚尿囊液增殖菌体荚膜蛋白、DSA培养基培养菌体荚膜蛋白、纯化的Cp39蛋白和rCp39蛋白通过皮下注射各试验组小鼠,生理盐水为对照组,第二次免疫后2周分别以A:1型菌C48-3株(6.7×102cfu)和A:3型菌C51-3株(1.1×103cfu)进行攻毒试验。采集免疫后小鼠血清,用ELISA法检测抗体水平,并计算免疫保护率,来评价4种抗原对小鼠的交叉保护效果。【结果】SDS-PAGE结果显示,体内外增殖禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白的条带和分子量相似,且体内外表达的Cp39蛋白的分子量相同;ELISA结果表明Cp39免疫组小鼠和rCp39免疫组小鼠血清rCp39蛋白特异性抗体的水平显著高于其他两组(P0.05);保护试验表明,体外增殖菌体荚膜蛋白免疫组小鼠对同源C48-3株和异源C51-3株攻毒的保护率分别为100%和60%,鸡胚尿囊液增殖菌体荚膜蛋白免疫组小鼠、Cp39免疫组小鼠和rCp39免疫组小鼠对同源C48-3株和异源C51-3株攻毒的保护率分别为100%和80%。【结论】粘附蛋白Cp39是禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白中的主要交叉保护抗原,可以作为禽霍乱亚单位疫苗。     

淮河克氏原螯虾种群遗传结构

克氏原螯虾（Procambarus clarkii）是广泛分布于我国淡水水域的外来入侵物种,对其种群遗传结构的研究有助于了解种群扩散过程。本文测定了淮河流域自然水体中9个地理种群共151个野生克氏原螯虾线粒体COⅠ序列,获得624 bp的有效基因片段,共定义了25个单倍型。AMOVA分析结果表明,淮河流域的克氏原螯虾种群内的变异占主导地位,单倍型多样性和核苷酸多样性均为中等水平,各地理种群间平均遗传差异较小（F_st=0.078）,遗传差异不显著。系统发生树并没有按地理位置形成对应族群,表明克氏原螯虾各地理种群间存在明显的基因流,各地理种群间没有形成明显的种群遗传分化。     

利用Gibson DNA组装技术构建人5型腺病毒感染性克隆

为了构建人5型腺病毒(HAdV-5)的感染性克隆,我们使用了Gibson DNA组装技术。设计1对引物用于扩增质粒骨架(包含卡那霉素抗性基因和质粒的复制起点,KAN-ORI),在引物的5'端添加HAdV-5基因组末端序列(约30NT)和Pac I位点,以携带卡那霉素抗性基因的pShuttle-CMV质粒为模板,PCR扩增得到KAN-ORI片段,该片段的两端均含有约30bp的HAdV-5基因组序列。将KAN-ORI片段与利用野毒扩增纯化的HAdV-5基因组混合,进行Gibson DNA组装反应;反应产物直接转化E.coli感受态细胞,涂布含卡那霉素的LB琼脂平板。挑取菌落,提取质粒,命名为pKAd5。限制性酶切鉴定的结果显示,所鉴定的质粒均含有完整的HAdV-5基因组。使用PacⅠ酶切线性化pKAd5,利用脂质体转染293细胞,转染4d后单层细胞出现病毒噬斑。拯救的病毒能够在HEp-2细胞扩增;电子显微镜观察呈现典型的腺病毒形态;提取病毒DNA,酶切鉴定的结果与预期的HAdV-5基因组相同,证实HAdV-5得到成功拯救。上述研究结果说明使用Gibson DNA组装技术构建HAdV-5感染性克隆简便易行,为其他DNA病毒基因组的克隆提供了新思路。     

柑桔类的细胞分类学研究 Ⅰ.柑桔属30个分类群的核型及进化

作者研究了柑桔属30个分类群的核型及进化。结果表明:染色体数目为2n=2x=18,属小染色体植物,核型由中部着丝粒染色体(m)和近中部着丝粒染色体(sm)组成,具2—4个连接于短臂上的随体,一些分类群的部分同源染色体上存在长度和臂比值不同程度的杂合现象,核型均属2A型。比较随体及与之相连短臂,其随体分为大随体(LS)中随体(MS)和小随体(SS)三类,随体的多样性可作为探讨该属物种的起源、系统演化的一个遗传标志。作者赞同把柚(Citrus grandis)作为柑桔属的一个基本种,而宽皮柑桔(C.reticulata)核型变异较大,还待进一步分析;推测红黎檬(C.limonia)、葡萄柚(C.paradisi)、甜橙(C.sinensis)、酸橙(C.aurantium)、香园(C.wilsonii)、三宝柑(C.sulcata)、部分宽皮柑桔(C.reticulata)为杂种起源。该属核型由不对称向对称进化是与形态及孢粉的进化趋势一致的。