人类博卡病毒HBoV1基因组克隆及启动子活性分析

人类博卡病毒 (Human bocavirus,HBoV) 是继细小病毒B19之后,第2个被发现可引起人类疾病的细小病毒。通过PCR扩增方法从患有下呼吸道感染的患儿痰液中鉴定HBoV,以鉴定的阳性样本为模板,利用分子生物学方法构建病毒基因组克隆并进行序列分析。2007年10月?2009年3月从湖北省妇幼保健院共收集941例下呼吸道感染患儿的痰液标本,检测到33份HBoV阳性样品,阳性率为3.51％ (33/941);其中1岁以下婴幼儿患者占阳性样72.7％;构建了含有HBoV中间大片段基因克隆WHL-1,     

通过简单临床观察构建胸痛患者冠心病预测模型过程中的风险因素分析

目的:在具有胸痛症状的患者中构建冠心病预测模型。方法:选取疑诊冠心病的胸痛患者7981例,分为典型心绞痛组3636例、非典型心绞痛组3420例和非心绞痛性胸痛组925例,行冠状动脉造影最终确诊。对相关临床因素进行logistic多元回归分析并对危险因素进行组合得出危险积分。研究三组人群最终经冠脉造影确诊冠心病的正确诊断率。结果:(1)30-49岁至≧70岁典型心绞痛组、非典型心绞痛组、非心绞痛性胸痛组3组男性冠心病比例分别增加26.9%、36.3%及38.4%,3组女性分别33.5%、41.0%及43.3%,典型心绞痛、非典型心绞痛及非心绞痛性胸痛患者比例逐渐增加。(2)青年至老年典型心绞痛组、非典型心绞痛组及非心绞痛性胸痛组3组低危组冠心病发病率分别增加41.6%、增加57.3%及增加39.9%,高危组分别由增加15.8%、增加6.7%及增加33.3%。典型心绞痛组、非典型心绞痛组及非心绞痛性胸痛组3组危险积分由1分至6分冠心病发病率分别增加45.3%、52.6%及54.4%。(3)冠心病预测价值排序:在典型心绞痛分组中,男、女及不考虑性别情况预测值由78.5%至53.0%、64.4%至24.3%及72.5%至39.5%;在非典型心绞痛分组中,男、女及不考虑性别情况预测值由71.8%至37.0%、53.6%至27.8%及64.2%至32.9%;在非心绞痛性胸痛分组中,男、女及不考虑性别情况预测值由64.1%至50.0%、51.4%至35.0%及58.8%至43.2%。结论:随着年龄增加,胸痛症状越来越不典型。同一性别及胸痛特征分组中,同一危险分层及胸痛特征分组中,年龄增加冠心病可能性增加。同一性别及年龄段分组中,中年低危及高危,青年高危情况,胸痛症状越不典型冠心病可能性越小。同一危险积分分组中,胸痛症状越不典型则冠心病可能性越小。同一年龄段及胸痛特征分组中,男性冠心病概率大于女性,高危比低危人群冠心病可能性增加。同一胸痛特征分组中,危险积分得分越?     

间歇降雨和多场次降雨条件下黄土坡面土壤水分入渗特性

基于可控的坡面间歇降雨和多场次降雨试验,对黄土坡面土壤水分入渗及分布特征进行了研究.结果表明：间歇降雨条件下,两次降雨期间的累积径流量均随降雨历时的延长呈近似线性增加,湿润锋也随降雨时间的延长而增加;在两次降雨的间歇期,湿润锋增加缓慢.入渗率随着坡度的增大而减小,第2次降雨的入渗率随时间而减小的趋势更明显;15°坡面的累积入渗量比25°大,分别为178和88 mm.多场次降雨条件下,各场次降雨的初始入渗率均较高,其中第1场降雨的土壤入渗率、累积入渗量在各时段均明显高于其他场次,后3场降雨的入渗率差异不大;降雨场次越多,湿润锋越深.     

贵州三都水族Y染色体上7个STR基因座的遗传多态性分析

采用多重PCR技术, 结合ABI PRISMTM 377 DNA Sequencer四色荧光标记进行基因扫描分型, 对中国贵州三都水族群体进行7个Y-STR基因座的多态性分析, 计算其基因频率、遗传多样性及单倍型多样性, 获取相应的遗传多态信息.结果显示: 在94个无关男性样本中, DYS19、DYS389Ⅰ、DYS389Ⅱ、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393等基因座分别检出6, 4, 6, 2, 3, 5, 4种等位基因, 遗传多样性在0.124(DYS389Ⅰ)～0.630(DYS19)之间; 由此组成的单倍型为27种, 单倍型多样性0.868.此7个Y-STR基因座在贵州三都水族群体中具有较好的多态性, 单倍型具有较高的遗传多态.     

贵州瑶族3支系Y-DNA及线粒体DNA序列多态性分析

采用PCR－RFLP技术,通过观察由12个单核苷酸多态位点(SNPs)组成的Y染色体单倍型及由9个多态位点组成的线粒体DNA单倍型在贵州瑶族中的分布,分析贵州瑶族父系及母系遗传结构,探讨其起源及迁徙。结果显示,97份男性样本分别属于H7、H8、H9、H11 4种Y-DNA单倍型,苗瑶语系特异Y-DNA单倍型H7的平均频率为92.4%;通过对线粒体DNA基因分型,得到8种单倍型,可归入B4、B5、D4、D5和N*单倍型类群中,CoⅡ/tRNA^Lys区域间的9bp缺失平均频率为58.2%。结果提示贵州瑶族父系遗传结构单一,具有典型的苗瑶族群特征,又存在与其他族群的融合。母系遗传结构相对复杂,9 bp缺失是贵州瑶族的母系遗传结构特征。      

人类博卡病毒(HBoV)非结构蛋白NS1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

目的:克隆、表达、纯化人类博卡病毒(HBoV)非结构蛋白NS1,制备抗NS1多克隆抗体。方法:利用PCR扩增HBoV非结构蛋白NS1基因,将其克隆至pMAL-c2X表达载体上,重组质粒转化大肠杆菌DH10B,IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Amylose Resin亲和层析柱纯化后,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。用间接ELISA法检测抗体效价。结果:原核表达融合蛋白MBP-NS1,并获得了其多克隆抗体,抗体效价达到1∶32000。结论:在原核表达系统中表达、纯化了融合蛋白,制备抗NS1多克隆抗体,为进一步研究该病毒非结构蛋白基因的转录和翻译机制提供可靠的工具。     

同型半胱氨酸与H型高血压左室肥厚的相关性及马来酸依那普利叶酸片的干预效果

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)与H型高血压左室肥厚的相关性及马来酸依那普利叶酸片的干预效果。方法:选取达州市中心医院于2015年8月-2017年7月收治的450例原发性高血压患者,根据血浆Hcy水平将患者分为Hcy正常组(n=134)和H型高血压组(n=316),比较Hcy正常组、H型高血压组患者超声心动图检测指标的差异,并对Hcy水平与左心室结构改变进行相关性分析。同时将316例H型高血压患者随机分为观察组(n=158)和对照组(n=158),其中对照组患者给予马来酸依那普利片治疗,观察组给予马来酸依那普利叶酸片治疗。两组均连续治疗24个月。分别于治疗前、治疗后6个月、12个月、24个月检测血压、血浆Hcy和左心室质量指数(LVMI)水平,观察脑卒中及药物不良反应发生情况。结果:H型高血压组左室收缩末内径(LVESD)、左室舒张末内径(LVEDD)、左室后壁厚度(LVPWT)、室间隔厚度(IVST)、左心室质量(LVM)、LVMI均较Hcy正常组增大(P0.01)。血浆Hcy与LVPWT、IVST、LVM及LVMI呈正相关(r=0.652、0.526、0.736、0.786,均P0.05);治疗后6个月、12个月、24个月,观察组与对照组的H型高血压患者收缩压(SBP)、舒张压(DBP)水平及观察组Hcy、LVMI均较治疗前降低(P0.05),且观察组SBP、DBP、Hcy及LVMI均低于同时间点的对照组(P0.05)。两组均未见严重药物不良反应发生,观察组脑卒中发生4例(2.53%)较对照组12例(7.59%)明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:血浆Hcy水平是影响原发性高血压患者左心室肥厚的危险因素;马来酸依那普利叶酸片干预H型高血压患者后可显著降低血压、血浆Hcy水平,改善患者左心室肥厚程度,降低脑卒中发生率。     

猪IGF-Ⅰ基因荧光定量PCR标准曲线的建立

目的:建立用荧光定量PCR方法检测猪IGF-Ⅰ基因表达量的标准曲线。方法:根据自己克隆的猪IGF-Ⅰ(GenBankNo.DQ784687)基因mRNA序列,设计合成引物和探针,采用Taqman探针荧光定量RT-PCR的检测方法,构建检测猪IGF-Ⅰ基因表达量的标准曲线。结果:由pMD-18T IGF-Ⅰ所构建的标准曲线线性关系良好(反应体系中含1×102~1×106拷贝猪IGF-Ⅰ基因分子时,扩增反应Ct值与拷贝数的对数呈线性关系)、灵敏度高(可检测出低于10个拷贝/μL的样品)、特异性强、准确可靠。结论:成功构建了用荧光定量RT-PCR方法检测猪IGF-Ⅰ基因表达量的标准曲线。     

贵州6个少数民族线粒体DNA 9bp序列缺失频率研究

目的:研究贵州省6个世居少数民族线粒体9bp序列缺失情况.方法:采用PCR法及聚丙烯酰胺凝胶技术检测线粒体基因组色素氧化酶Ⅱ和tRNAlys基因间非编码序列中含9bp序列缺失情况.结果:在研究的6个少数民族中只发现标准型和缺失性2种多态性,仡佬族、仫佬族、畲族、毛南族、羌族、蒙古族线粒体DNA 9bp缺失频率依次为:26.9％、17.3％、23.1％、11.5％、7.7％、9.6％.结论:贵州省这6个世居少数民族线粒体9bp序列缺失频率较高,各民族的缺失频率有一定差异.