香格里拉水韭磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPC)的克隆及其表达载体构建

以中国特有植物香格里拉水韭（Isoetes shangrilaensis X.Liu）为材料,通过转录组测序数据分析筛选出磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因（IsPEPC）,根据该基因序列,从香格里拉水韭cDNA中克隆获得磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPCase）的编码基因IsPEPC,并将此基因插入pCAMBIA-2300-N-eGFP及pMD质粒载体上,再采用农杆菌介导的花序浸染法将2个重组载体分开转入野生型拟南芥（Arabidopsis thaliana（L.）Heynh.）中。结果显示：IsPEPC基因蛋白编码序列长度为2928 bp,编码975个氨基酸;同源性检索分析结果表明,该蛋白与其近源物种江南卷柏（Selaginella moellendorffii Hieron.）的PEPC基因蛋白序列同源性为79.8%。对转基因的T₁代拟南芥通过抗性筛选并在gDNA水平上阳性鉴定,初步鉴定得到pC2300-N-eGFP-IsPEPC转基因株系26个和pMD-IsPEPC转基因株系32个。     

红斑丹毒丝菌SpaA蛋白保护区域的免疫学检测

为了确定菌体表面保护性抗原A（SpaA）的免疫保护区域,通过PCR从红斑丹毒丝菌C43065株基因组DNA中分别扩增出编码成熟SpaA及其N端342个氨基酸序列（SpaA-N）和C端160个氨基酸序列（SpaA—C）的基因片段,将它们分别克隆到表达载体pET32a上,转化入大肠埃希菌BL21,IPTG诱导,亲和层析法纯化重组蛋白,并检测它们对小鼠的保护作用。SDS—PAGE结果显示重组SpaA、SpaA-N和SpaA—C以可溶性形式表达在大肠埃希菌BL21细胞质中并具有良好的免疫原性。保护试验结果表明重组SpaA、SpaA—N和NaOH提取抗原完全保护小鼠受强毒株C43065的致死性感染,但重组SpaA—C没有保护作用。结果表明SpaA-N可以作为预防猪丹毒的亚单位疫苗。     

血清LTB4和PCT在细菌性肺炎患者中的表达及其与预后的相关性

目的探究治疗前后细菌性肺炎患者血清中白三烯B4(LTB4)、降钙素原(PCT)表达水平及其与预后相关性。方法选取2018年3月-2019年2月我院收治细菌性肺炎患者作为观察组(n=70),另选择同期于我院体检健康合格者作为对照组(n=70)。观察两组血清LTB4、PCT表达水平。观察治疗1周后、治疗2周后观察组患者血清LTB4、PCT表达水平。采用ROC曲线及Cox分析法分析观察组血清LTB4、PCT表达水平与预后相关性。结果观察组治疗前LTB4与PCT水平均高于对照组(P<0.05)。治疗1周及治疗2周后观察组LTB4、PCT水平均低于治疗前(P<0.05);治疗2周后LTB4、PCT水平分别低于治疗1周后(P<0.05)。治疗后PCT、LTB4的AUC均较高(P<0.05)。PCT与LTB4与观察组患者预后均具有独立相关性(P<0.05)。结论血清PCT与LTB4在细菌性肺炎患者中处于高表达状态,治疗后两者表达水平显著降低。血清PCT及LTB4与患者预后情况密切相关,可作为临床监测细菌性肺炎患者预后重要指标。     

人细小病毒B19病毒样颗粒的制备

采用昆虫杆状病毒表达系统,制备人细小病毒B19病毒样颗粒(VLPs)。先通过PCR方法合成细小病毒B19衣壳蛋白基因VP2,将其克隆到pFastBac1质粒,然后转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E.coliDH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP2。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒rBac-VP2。利用rBac-VP2感染Sf9细胞表达B19VP2蛋白,通过间接免疫荧光、Western blotting等方法鉴定目的蛋白表达。采用两次超速离心的方法对表达产物进行纯化,纯化产物在透射电镜下可见直径约22nm的VLPs。本研究成功制备了人细小病毒B19的VLPs,为B19感染血清学检测方法的建立提供了参考。     

蟾蜍红细胞融合条件的正交设计优化

目的：用聚乙二醇法探讨蟾蜍红细胞融合的最佳条件。方法：采用3因素3水平的正交实验法,以蟾蜍红细胞为材料,从聚乙二醇浓度、反应时间、反应温度三方面计算细胞融合率,探讨和比较蟾蜍红细胞融合的最适条件及影响因素。结果：蟾蜍红细胞融合的最佳条件是：选用50%的聚乙二醇,反应温度为37℃,反应时间为15min。     

马尔尼菲青霉凸玻片小培养方法

马尔尼菲青霉是免疫受损人群常见的一种机会性感染真菌,在我国卫生部颁发的真菌危险度分级中属于2类菌,在缺少防护设备的一般真菌实验室是限制操作的[1]。本实验室使用凸玻片小培养观察马尔尼菲青霉生长形态,该方法不仅操作简单、方便、省时,还保证实验人员的安全,也避免实验室污染。现介绍如下。     

重庆市蕨类植物区系调查和分析

重庆市有野生蕨类植物47科120属604种(含变种及以下分类单位)。其科属优势明显,其中蹄盖蕨科、金星蕨科、鳞毛蕨科和水龙骨科4个科包含了49属337种,占重庆市蕨类植物属、种总数的40.83%和55.79%;特有现象明显,地方特有种十分丰富,中国特有种和地方特有种类分别达到164种和33种;蕨类植物区系具有古老、孑遗和原始性等特点,表现出一定的热带性质或热带亲缘。     

水稻转化体系的改进及转os-miR398基因植株的获得

针对根癌农杆菌介导的愈伤转化技术在实际应用中转化效率低及农杆菌污染等问题,对该方法在水稻转化过程进行改良:(1)在转化前将空白愈伤从培养基取出,于室温放置在空白皿中约24 h,使之处于饥饿状态,以利于T-DNA转化并提高转化率;(2)在愈伤与农杆菌共培养并经无菌洗脱后,在转移到相应培养基之前,将其于室温下继续放置在含有滤纸的培养皿里约24 h,从而有效地抑制农杆菌生长.采用本改良措施,成功将所克隆构建的os-miR398(水稻microRNA398)前体基因表达载体转化入水稻,与对照相比,改良后水稻转化效率可提高10%.     

云南美登木悬浮培养细胞的化学成分(英)

利用组织培养方法以云南美登木 (MaytenushookeriLose .)未木质化的茎和嫩叶为材料诱导出愈伤组织 ,经过继代培养建立了悬浮细胞培养系。培养物的乙酸乙酯提取物显示抗橙色青霉 (PenicilliumavellaneumUC_4 376 )生长的生物活性。对培养物进行化学成分研究 ,分离鉴定了 9个化合物 :2 ,3_diacetoxylmaytenusone (1)、角鲨烯 (squa lene ,2 )、β_谷甾醇 (β_sitosterol,3)、2′ ,3′,4′_triacetylsitoindosideⅠ (4)、salaspermicacid (5 )、美登酮酸 (maytenonicacid ,6 )、2α_羟基美登酮酸 (2α_hydroxy_maytenonicacid ,7)、6 ,11,12_trihydroxy_8,11,13_abietrien_7_one (8)和 11,12_dihydroxy_8,11,13_abietrien_7_one (9) ,其中化合物 1为新化合物。通过 2DNMR对化合物 5 - 7的NMR数据进行了全指定 ,并修正了化合物 5和 6的部分碳谱数据指定。     

巴基斯坦为害杧果树的短须螨属一新种(蜱螨亚纲,细须螨科)

在对巴基斯坦杧果种植区苏加堡的杧果树螨类区系研究中,发现短须螨属(蜱螨亚纲：细须螨科)1新种：礼短须螨。文中记录并描述了该新种。新种的背饰特点是：前背中侧近分颈沟处具网状纹、外侧具纵向条纹;具6对末体背侧毛。雄螨 未采到。正模♀,1994年1月1日采自巴基斯坦,苏加堡杧果园的落叶中;副模1,1994年11月3日采自马尔坦南3km处的杧果树叶,曼苏采。模式标本保存于农业大学农业昆虫系螨类研究室,费沙拉堡,巴基斯坦。新种的背饰独特,略与短须螨属中具7对末体背侧毛的种相像,但具6对末体背侧毛的种皆无此种背饰。