猪丹毒丝菌C43311株spaA基因N端免疫保护区的克隆和表达

采用PCR从猪丹毒丝菌C43311株基因组中扩增出编码表面保护性抗原A的spaA基因片段,将其克隆到pMD18-T载体并对插入片段进行测序.用spaA基因N端免疫保护区(spaA-N)的特异引物从重组质粒pMD18-spaA中扩增得到spaA-N片段,将其定向插入原核表达载体pGEX-6p-2中,构建重组表达质粒pGEX-spaA-N,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白GST-SpaA-N,用SDS-PAGE和Western印迹检测表达产物.测序结果表明spaA基因片段大小为1881bp,与已报道的不同血清型菌株spaA基因的核苷酸序列比较,核苷酸序列同源性在93%～99%之间.SDS-PAGE结果显示表达蛋白约为64kDa,与预期的大小相近.Western印迹检测结果表明,表达的融合蛋白GST-SpaA-N能与C43311株SpaA蛋白的抗血清发生特异性反应,证明原核融合表达蛋白具有免疫反应性.     

柑桔类的细胞分类学研究 Ⅰ.柑桔属30个分类群的核型及进化

作者研究了柑桔属30个分类群的核型及进化。结果表明:染色体数目为2n=2x=18,属小染色体植物,核型由中部着丝粒染色体(m)和近中部着丝粒染色体(sm)组成,具2—4个连接于短臂上的随体,一些分类群的部分同源染色体上存在长度和臂比值不同程度的杂合现象,核型均属2A型。比较随体及与之相连短臂,其随体分为大随体(LS)中随体(MS)和小随体(SS)三类,随体的多样性可作为探讨该属物种的起源、系统演化的一个遗传标志。作者赞同把柚(Citrus grandis)作为柑桔属的一个基本种,而宽皮柑桔(C.reticulata)核型变异较大,还待进一步分析;推测红黎檬(C.limonia)、葡萄柚(C.paradisi)、甜橙(C.sinensis)、酸橙(C.aurantium)、香园(C.wilsonii)、三宝柑(C.sulcata)、部分宽皮柑桔(C.reticulata)为杂种起源。该属核型由不对称向对称进化是与形态及孢粉的进化趋势一致的。     

甘蓝型油菜千粒重性状的QTL初步定位研究

千粒重是油菜重要的产量相关性状之一,构建油菜遗传连锁图谱是研究其产量性状基因的前提。本研究利用小孢子培养技术,选育出了甘蓝型油菜大粒品系(G-42)和小粒品系(7-9)的纯合DH系DH-G-42和DH-7-9,其千粒重分别为6.24 g和2.42 g,二者比值达2.58。以DH-G-42为母本、DH-7-9为父本,构建了含190个单株的F2遗传作图群体,利用SSR和SRAP标记技术绘制遗传连锁图谱,该图谱共包含20个连锁群,涉及128个SSR标记和100个SRAP标记,图谱总长1546.6cM,标记间平均图距为6.78cM。本研究共检测到3个与千粒重性状相关的QTL,分别位于A9和C1连锁群,其中qSW-A9-1和qSW-A9-2贡献率分别达到10.98%和27.45%,均可视为控制粒重的主效QTL。本研究为后续进行油菜千粒重性状QTL的精细定位分析、分子标记辅助选择育种及新基因的克隆等奠定了基础。     

中国蓼属分叉蓼组和冰岛蓼属植物叶下表皮微形态研究

采用光学显微镜对中国蓼属分叉蓼组(Polygonum section Aconogonon)和冰岛蓼属(Koenigia)的21种植物的叶下表皮微形态进行了观察研究。结果表明,其叶下表皮微形态特征可分为三种类型：（1）气孔器类型为无规则型,表皮细胞多边形,垂周壁为波状;（2）气孔器类型为无规则型兼有非典型不等型,表皮细胞为多边形或不规则形,垂周壁为平直弓形或波状;（3）气孔器类型为不等细胞型,表皮细胞多边形,垂周壁为平直弓形。分叉蓼组（西伯利亚蓼除外）植物的叶表皮气孔器类型具有高度一致性,说明该组是一个自然类群。本文研究结果不支持将大铜钱叶蓼(Polygonum forrestii Diels)、铜钱叶蓼(P. nummularifolium Meissner)划归于冰岛蓼属的处理意见;支持将西伯利亚蓼(P. sibiricum Laxm.)独立成属,即西伯利亚蓼属(Knorringia Tzvel.)的观点;同时也支持仍将多穗蓼(P. polystachyum Wall.ex Meissner)和松林蓼(P. pinetorum Hemsl.)归在分叉蓼组的处理意见。     

Sfrp2通过下调Wnt/β-catenin通路抑制胶质瘤细胞系U251的迁移能力

摘要 目的：探讨使用Wnt3a蛋白受体竞争性抑制剂Sfrp2下调Wnt通路的关键蛋白β-catenin的表达对胶质瘤细胞U251线粒体功能以及细胞侵袭能力的影响。方法：使用外源性Sfrp2蛋白处理U251细胞,使用Western Blot技术,Mitotracker线粒体形态学染色,划痕实验观测Sfrp2蛋白对U251细胞Wnt通路的表达,线粒体功能以及细胞迁移能力的影响,并使用GSK-3β抑制剂LiCl上调Wnt通路进一步明确Sfrp2蛋白的作用机制。结果：Sfrp2蛋白可引起Wnt通路的抑制（P<0.05）,线粒体分裂（P<0.01）以及细胞迁移能力的下降（P<0.01）,而使用LiCl处理后,Wnt通路重现上调（P<0.05）,线粒体分裂受到抑制（P<0.05）,细胞的迁移能力也再次恢复（P<0.05）。结论：Sfrp2可通过下调Wnt通路引起线粒体分裂进而抑制U251细胞的迁移能力。     

生理学家汪敬熙先生

汪敬熙先生是我国第一代的生理学家。美国 C.N.Woolsey教授在1968年汪先生追悼会上致悼词,称汪先生为国际科学界中的科学家。他是山东济南人,生于1893年。1919年毕业于北京大学,获学士学位。1920年穆藕初先生捐款给北京大学选派留美学生,由蔡元培、陶孟和、蒋梦麟诸先生评选,派汪先生到美国约翰霍布京斯大学(The Johns Hopkins university)医学院精神病学系学习,Adolff Meyer 主任分配他在心理生物学实验室从 Curt p.Richter 先生开始作实验的研究。1923年获得哲学博士学位。1924年回国任河南中州大学心理学教授,1925     

蛋白质功能基团的改变与其生物活力的关系——Ⅰ.用图解法求必需基团数并判断其性质

本文提供了一个方法,可以根据蛋白貭某些功能团的改变与其生物活力之間的定量关系;作图求得这些功能团中的必需基团数。当不只一种功能团为某一試剂破坏时,也可以据此判断必需基团的性貭。由于无需測定基团改变反应速度,在推理过程中一般也不包含反应速度为一級的假定,因而較Koshland的动力学方法,有更为广泛的应用。根据文献上記載的,有足够定量数据的一些实例計算获得了滿意的結果。从这些結果看来,在一些侧鏈功能团中的必需基团数常小于3。在討論中列举了这一类方法在应用中存在的一些限制,对于这些限制所可能采取的补救方法,以及在使用这些方法时的一些应注意之点。     

Gibson组装技术简化腺病毒载体反向遗传改造

重组腺病毒是常用的基因转移载体,本文介绍一种对腺病毒基因组进行反向遗传改造的策略。拟在维持基因编码蛋白氨基酸序列不变的前提下,突变去除重组人5型腺病毒Ad5GFP基因组的PmeI酶切位点。软件分析腺病毒质粒pAd5GFP序列,选择限制性内切酶BamHI将pAd5GFP切割为大小11.7和24.6kb两个片段,24.6kb大片段自身环化形成一个质粒pAd5GB,PmeI位于其上。PmeI/AscI双酶切pAd5GB质粒,产生2.4kb和22.2kb两个片段;在引物部位引入突变的PmeI位点(由gtttaaac突变为gtttaaaT),PCR扩增得到两端各延长30bp的上述2.4kb片段,与22.2kb片段进行Gibson组装,转化E.coli TOP10感受态细胞,得到pAd5GBXP质粒。BamHI酶切pAd5GBXP,碱性磷酸酶处理,与11.7kb片段连接,还原得到腺病毒质粒pAd5GXP。PacI线性化pAd5GXP质粒,转染293细胞,拯救得到Ad5GXP病毒;酶切分析证明Ad5GXP基因组不含有PmeI位点。研究结果说明将酶切连接与DNA组装技术相结合,能够方便灵活地对腺病毒基因组进行突变改造。     

部分柑桔属及其近缘属Giemsa C-带带型研究

本文应用Giemsa显带技术研究了枳属(Poncirus)、金柑属(Fortunella)和柑桔属(Citrus)16个分类群的染色体。枳属以末端带和着丝点带为主,金柑属与柑桔属主要以末端带为主;统计分析了各分类群每对染色体及全组染色体的异染色质含量,并列出其带型公式;探讨了金柑属的分类学地位;赞同把柚(C.grandis)作为柑桔属的基本种之一;根据异染色质含量的变化对柑桔属的带型演化进行了讨论。     

原核表达人41型腺病毒(Ad41) 蛋白 V及其抗血清的制备

摘要：目的 人肠腺病毒Ad41被称为难养腺病毒,其难以培养的特性可能与次要核心蛋白V（Ad41 protein V,pV）表达不充分有关。本研究拟表达纯化Ad41 pV抗原,免疫动物制备抗血清,为研究Ad41难养性机理打下基础。方法 以野生型Ad41基因组DNA为模板,PCR扩增pV,克隆到原核表达载体pET30a(+),测序后,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导目的蛋白表达,固化金属亲和层析(IMAC)方法纯化,免疫BALB/c小鼠制备抗血清,将获得的抗血清用于Western blot检测Ad41感染各细胞系后pV的表达。结果 克隆得到包括完全编码区的pV基因,表达质粒转化BL21(DE3)菌株,使用1 m mol/L IPTG 37℃诱导4 h,pV以包涵体形式表达,或使用0.5 m mol/L IPTG 25℃诱导8 h获得可溶性表达。利用皮下多点注射包涵体的方法免疫小鼠,得到抗pV抗血清;使用纯化的可溶性pV作为抗原对抗血清进行了鉴定,表明该抗血清可用于Western blot检测。等量野生型Ad41感染293或293E12细胞（一株稳定表达Ad41 E1B55K基因的293细胞）后,pV在293E12细胞的表达明显高于293细胞。结论 成功克隆了Ad41 pV基因,表达纯化了重组蛋白,获得了可用于Western blot检测的抗血清,为进一步研究Ad41难养性机理打下了基础。