粘质沙雷氏菌中灵杆菌素合成因素探究进展

灵杆菌素主要由粘质沙雷氏菌产生,其本身是微生物的一种次生代谢产物,属于脂多糖,也是一种典型的生物碱,具有抗癌、抑菌、增强免疫力、抗原虫、抗疟疾等多种生理活性,是化妆品、染料和水体污染治理等领域新兴且不可或缺的成分.随着医药业和工农业等不断发展,灵杆菌素的应用也越来越多,其良好的应用前景使得它的合成和提取工艺成为次生代谢领域的研究热点.但是,目前灵杆菌素的全化学合成和发酵生产受到很多因素的影响,大大阻碍了它的规模化生产和应用,本文重点对影响灵杆菌素生物合成的因素进行了综述,同时对其可能的作用机制进行了总结.本研究表明,微生物发酵生产灵杆菌素时,菌种、营养条件、环境因素(包括培养温度,pH值,溶解氧,光照)、金属离子等因素对灵杆菌素的合成都十分重要,另外再结合基因工程等技术,可大幅度提高灵杆菌素的产量.本综述为灵杆菌素的工业发酵生产提供重要依据.     

栖热菌噬菌体TSP4 dCTP脱氨酶基因的克隆表达

将编码栖热菌噬菌体TSP4菌株的dCTP脱氨酶tspdCD基因亚克隆到表达载体pET-32a中,并将重组质粒pET-32a-tspdCD转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达.SDS-PAGE分析结果显示,目的蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌Rosetta(DE3)中以可溶性形式高效表达.通过Ni-NTA agarose亲和层析柱纯化表达的tspdCD,并对其活性,最适作用温度、pH、底物特异性以及金属离子和有机溶剂对其活性的影响进行测定,检测结果表明重组蛋白活性达到4.12U/mg,它的最适作用温度和pH分别为60℃和7.5,最佳反应底物是dCTP,2mmol/L的Ca2+和Mg2+对其活性具有明显的促进作用,而同浓度的Ni2+和Cu2+对其活性产生了明显的抑制作用,10％ (V/V)的乙酸乙酯和异丙醇对其活性有很明显的促进作用,而同体积比的丙酮对其活性产生明显的抑制作用.实现了tspdCD在大肠杆菌系统中的功能性表达,为进一步研究高温噬菌体tspdCD的功能奠定了基础.     

一株硅酸盐细菌的分离及解钾活性研究

目的利用硅酸盐细菌分离培养基,从昆明白泥山土壤样品中分离获得一株硅酸盐细菌——BN1。方法对分离获得的硅酸盐细菌——BM进行革兰染色、生理生化特征和16SrDNA测序分析,并对其解钾活性进行了初步研究。结果BN1初步鉴定为类芽胞杆菌属的菌株。结论该菌株——BN1对云母具有较强的解钾活性,为空白对照组的1．79倍。     

纳帕海高原湿地真菌群落多样性和组成的分布

【背景】位于滇西北的纳帕海高原湿地,是我国唯一的低纬度、高海拔、季节性半封闭型高原湿地。真菌在湿地生态系统的维持和稳定中发挥着特殊作用,然而关于纳帕海高原湿地真菌群落多样性和组成的研究目前仍无报道。【目的】对纳帕海高原湿地不同季节和土壤类型真菌群落多样性和组成及与环境因子的关系开展系统研究分析,促进对高原湿地微生物多样性的深入认识。【方法】采用荧光定量PCR和高通量测序技术,分析了纳帕海高原湿地不同季节和土壤类型中真菌的数量、群落多样性和组成及其与环境因子的关系。【结果】真菌数量级的变化对于人为干扰下的湿地土壤退化是敏感的响应指标。在真菌群落组成中,约有60%以上未确定的分类信息,40%有确定分类信息的包括6个门17个纲37个目53个科63个属,大部分分类信息集中在Ascomycota门,相对优势属为Gibberella。通过分类水平、OTU水平和β多样性分析比较,在纳帕海高原湿地整体真菌群落多样性和组成受季节变化影响不显著,但不同土壤类型的变化呈显著差异,推测是由于不同采样区植物根际效应和种类的影响。CCA (Canonical correlation analysis)分析表明,在不同采样区受不同土壤理化因子的影响。【结论】揭示了纳帕海高原湿地土壤真菌群落多样性和组成的区域特征,从微生物学角度进一步提出了对纳帕海高原湿地环境保护和恢复的重要性。     

高山被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在红冬孢酵母中的表达

以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)作为报告基因,将质粒pRH2304转化红冬孢酵母YM25235进行表达分析,荧光显微观察结果表明GFP在YM25235获得表达,建立了红冬孢酵母YM25235遗传转化方法。在此基础上,以高山被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因取代pRH2304中的GFP基因,构建重组质粒pRH2304MAD6,将其转化红冬孢酵母YM25235进行表达分析。PCR结果表明,高山被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因已经整合到YM25235基因组中,进一步的脂肪酸气相色谱分析结果表明,该基因编码产物催化n-6途径中的亚油酸转化成γ-亚麻酸,占细胞总脂肪酸的4.35%,但没有检测到催化n-3途径中的α-亚麻酸转化成十八碳四烯酸。     

腾冲热海一株嗜酸热硫化叶菌的分离与鉴定

从云南腾冲热海酸性温泉中分离纯化出一株极端嗜酸热菌株K4-1,并对其进行形态观察、生长特征、碳源和能源利用及16S rRNA基因分析.该菌株细胞形态为不规则球形,有单生鞭毛,严格好氧,兼性自养,能利用元素硫作为能源,也能利用酵母膏、精氨酸或核糖作为碳源和能源.其最适生长温度为75℃,最适pH为3.5.通过16S rRNA基因序列相似性对比对该菌株进行鉴定,结果表明该菌株与硫化叶茵属标准菌株的相似性介于86.6%～94.3%之间,与分离自腾冲热海的腾冲硫化叶菌Sulfolobus tengchongensis RT8-4菌株序列相似性最高,达到98.9%,可将菌株K4-1鉴定为硫化叶菌属菌株.菌株K4-1的16S rRNA基因序列号为EU729124.     

北衙金矿矿区可培养细菌多样性初步研究

目的 对北衙金矿矿区样品中的可培养细菌进行分离并对其多样性进行研究.方法 采集云南北衙金矿矿区土样和矿石样,采用固体肉汤培养基、卵黄培养基及PYGV培养基分离矿区环境可培养细菌,并利用16S rRNA基因序列分析构建系统发育树,初步评估细菌多样性.结果 北衙金矿矿区环境细菌的主要种群包括厚壁菌门和放线菌门的不同菌属:芽胞杆菌、微杆菌属、考克菌属、葡萄球菌属及节杆菌属的菌株,其中抗逆境较强的优势菌群为放线菌门的细菌.结论 本研究初步证实北衙金矿矿区可培养细菌种类丰富.     

死亡受体5介导细胞凋亡的研究及应用

死亡受体DR5(death receptor 5)属于肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)超家族的成员,其胞质区部分含有死亡结构域(death domain,DD),广泛分布于各种肿瘤细胞和正常组织细胞的膜上.配体TRAIL与肿瘤细胞表面的DR5结合,可诱导大多数肿瘤凋亡,而对正常的组织几乎没有作用.近年来死亡受体DR5与细胞凋亡的关系已成为研究热点之一,对DR5介导细胞凋亡的机制和应用进展作一综述.     

冰川微生物多样性研究进展

冰川微生物多样性的研究是丰富物种多样性、开发地球生物资源的重要途径与方式,也能为更加合理的解释冰川微生物与气候环境的关系提供依据。阐述了冰川微生物的分布,极地、海冰、大陆高山等地区冰川微生物多样性的研究进展,并介绍了研究方法、研究意义及前景展望。