靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖1的DNA适配体筛选

目的:筛选获得特异性结合磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)的单链DNA适配体。方法:合成全长81 nt,中间含39个随机序列的单链寡核苷酸(ss DNA)文库,运用指数富集配基系统进化(SELEX)技术筛选获得GPC1适配体;酶联免疫吸附分析法(ELISA)实验确定候选适配体与GPC1蛋白的亲和力,流式细胞术确定候选适配体与2种GPC1高表达细胞系(胰腺癌Panc-1细胞和工具细胞Luc-ZR-75-1~(GPC1))的结合特异性。结果:经过10轮SELEX筛选获得#9适配体,ELISA分析其亲和力为44±0.69 nmol/L,流式细胞术结果表明其与胰腺癌Panc-1细胞和Luc-ZR-75-1~(GPC1)细胞的阳性结合率分别为44.69%和51.44%。结论:筛选获得与GPC1蛋白有较高亲和力、与表达GPC1细胞系特异结合的ss DNA适配体。     

雌激素受体2（ESR2）mRNA 5′非翻译区内部核糖体进入位点活性的鉴定与分析

真核生物除了传统的帽依赖型翻译机制外,还存在内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site, IRES）介导的翻译机制。雌激素受体2（estrogen receptor 2, ESR2）是雌激素受体家族成员之一,其编码的蛋白质在许多肿瘤中发挥重要的作用。ESR2蛋白的异常表达会导致众多肿瘤的发生,但其蛋白质翻译水平的调控机制至今仍不清楚。研究发现,在药物刺激的条件下,乳腺癌细胞MCF7/WT中ESR2蛋白的表达提高,但是其转录水平基本未见发生改变。猜测ESR2 mRNA 5′非翻译区（5′ untranslated region, 5′ UTR）具有IRES活性。为了验证ESR2 mRNA 5′ UTR是否具有IRES元件,将ESR2 mRNA 5′ UTR插入到双顺反子报告基因载体（pRF）中,构建pRL-ESR2-FL重组质粒载体,将其瞬时转染到HEK293细胞。结果发现,ESR2 mRNA 5′ UTR有假定的IRES活性。并且通过3个排除实验验证了ESR2 IRES活性与其5′ UTR中的内部潜在启动子（P<0.0001）、内部剪切位点以及核糖体通读无关。进一步对其序列进行截短研究发现,ESR2 IRES活性发挥的关键区域是3′端的439～468 nt,且ESR2 IRES最大活性的发挥依赖于5′ UTR序列的完整性。并且发现,ESR2 IRES活性的发挥不但需要特定的一级核酸序列,还要有稳定的二级茎环结构。此研究有望为ESR2蛋白调控的相关疾病提供新的药物治疗靶点。     

血清TAP、TFF3与晚期胃癌患者含奥沙利铂化疗方案敏感性和预后的关系

摘要 目的：探讨血清肿瘤异常蛋白（TAP）、三叶因子3（TFF3）与晚期胃癌患者应用含奥沙利铂化疗方案敏感性和预后的关系。方法：选择2017年1月至2020年1月河北大学附属医院收治的115例晚期胃癌患者,所有患者接受含奥沙利铂化疗方案治疗,根据疗效分为敏感组（47例）和耐药组（68例）。化疗前检测血清TAP、TFF3水平,受试者工作特征（ROC）曲线分析TAP、TFF3预测晚期胃癌患者接受含奥沙利铂化疗疗效的价值。治疗后随访,Wilcoxon检验不同血清TAP、TFF3表达下晚期胃癌患者中位OS时间差异。结果：耐药组血清TAP、TFF3水平高于敏感组（P＜0.05）。TAP、TFF3预测晚期胃癌患者含奥沙利铂化疗耐药的曲线下面积分别为0.717、0.690,联合TAP和TFF3预测晚期胃癌患者含奥沙利铂化疗耐药的曲线下面积为0.801,高于单独TAP、TFF3单独检测。随访期间失访2例,死亡54例,高水平TAP、高水平TFF3晚期胃癌患者中位OS时间短于低水平TAP、低水平TFF3晚期胃癌患者（P＜0.05）。结论：对含奥沙利铂化疗耐药的晚期胃癌患者血清TAP、TFF3水平显著增高,高水平TAP、TFF3晚期胃癌患者中位OS时间较短,联合检测血清TAP和TFF3可预测晚期胃癌患者化疗反应性和预后。     

1株Alternaria sp.真菌菌丝提取物对玉米种子发芽促进作用的研究

从健康的野生山枣根部分离得到1株真菌,经分子鉴定其为支链孢属Alternaria sp.并且对其进行液体培养到生长期后,菌丝体用4层纱布滤出,40℃烘干,研磨后用乙醇浸提3次,合并滤液,并测定其菌丝醇提取物的浓度,配成1、10、100μg/mL的浓度,进行玉米种子催芽试验。结果表明,浓度为1、10μg/mL的醇提取物,均可提高玉米种子的发芽指数,而浓度为100μg/mL的醇提取物则会降低玉米种子发芽指数。     

千山油松年轮宽度年表的建立及其与气候的关系

以千山油松为样本,建立了年轮宽度标准化年表、差值年表和自回归年表.结果表明,油松年轮宽度与5—7和9—11月温度指标的相关性较高,且与低温呈正相关,其中与7月的极端最低温、9月的平均最低温显著相关.3种年表与上年12月和当年1月的极端最低温、1月的平均最低温呈显著相关,且其与全年、上年12月、当年5月的降水量显著相关,与4月的降水量极显著相关.油松与水汽压、相对湿度的月和年指标均有较强的相关性.蒸发的年指标和绝大部分月指标对油松生长具有负效应,其中4—7月最明显.油松年表的窄化突变佐证了1800年以来的30次主要的旱灾年历史记录.千山油松的生长受全球或半球尺度气候变化的影响.年表与太阳活动存在显著的11、23和50年左右的公共周期,与地磁指标在10、20和45年左右存在共同的周期变化.     

B和Q型烟粉虱种群竞争与抗药性的关系

在室内用棉花植株饲养情况下,对采自浙江杭州的烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)B型和Q型混合种群的生物型组成以及抗药性水平进行了多代的监测。在室内饲养的F0代,两种生物型比例相当;在F10代,Q型已经完全被B型所取代。与F0代相比,F10代烟粉虱种群对吡虫啉、阿维菌素和氟虫腈的抗性水平明显下降,而对α-氯氰聚酯的抗性保持稳定。该研究表明:在没有杀虫剂选择压力的室内条件下,B型比Q型更具生存优势。然而在烟碱类杀虫剂广泛使用的田间条件下,烟粉虱Q型因比B型对烟碱类杀虫剂具有更强的抗性而获得竞争优势。     

胭脂鱼(Myxocyprinus asiaficus)精液超低温冷冻保存及酶活性测定

为了找到适合珍稀鱼类胭脂鱼的物种保存方法,本研究比较了不同的稀释液(D-17, D-20, Ringer液和Kurokura-1)以及不同的稀释比例(1∶2, 1∶3, 1∶6)、不同的抗冻剂(二甲亚砜,甘油和甲醇)以及不同的添加浓度(8%, 10%, 12%)对胭脂鱼精子超低温冷冻保存效果,结果显示:稀释液D-17、D-20保存效果显著优于Ringer液、Kurokura-1 (p0.05);D-17稀释液的最佳的稀释倍数为1∶3,D-20稀释液的最适稀释比例为1∶3或1∶6;冷冻保存107 d后,D-20 (1∶6)配方的激活率最高,达(81.67±2.89)%;抗冻剂二甲亚砜保存效果显著优于甘油和甲醇(p0.05),二甲亚砜的最适添加浓度为8%。同时测定了添加D-17 (1∶3)抗冻液、Ringer液(1∶3)抗冻液和未添加抗冻液冻存样本精浆中酶活力,结果显示未添加抗冻液精浆中ATPase、SDH、LDH、CK、GOT活性均高于添加抗冻液的样品;添加抗冻液D-17 (1∶3)的样品精浆中ATPase、SDH、CK、GOT的含量低于冻存相同天数的Ringer液(1∶3)样品;精浆中ATPase、SDH、LDH、CK、GOT含量随冻存时间的延长呈上升趋势。本研究为保护淡水珍稀鱼类胭脂鱼的种质资源提供了理论基础。     

猪VHL基因克隆及敲低克隆胚胎的构建

通过在细胞和胚胎水平对猪Von Hippel-Lindau(VHL)基因进行了基因敲低研究,以便为建立VHL疾病模型猪奠定基础.研究首先通过 3'RACE和5'RACE克隆得到猪VHL基因cDNA全长序列(2 725 bp),Real-time PCR结果表明VHL基因广泛表达于猪的各种组织器官,其中在肾上腺、肝脏、胰腺、心脏和睾丸等组织器官高量表达.进一步在猪iPS细胞中对5条干扰片段进行筛选,获得2条高效的干扰片段,干扰效率分别达到72％(P=0.0012)和64％ (P＜ 0.01).以稳定干扰VHL基因的猪胎儿成纤维细胞为核供体,构建克隆胚胎,结果表明,克隆胚胎的发育能力与对照组相比没有明显差异,而且在克隆囊胚中VHL基因的干扰效率达到71％ (P＜ 0.01).综上所述,文中获得了猪VHL基因全长序列并获得该基因稳定敲低的猪细胞和胚胎,从而为VHL疾病模型猪的构建奠定了良好的基础.     

1724例女性生殖道支原体感染调查及耐药性分析

目的了解本地区女性生殖道支原体的感染现状及耐药情况,为临床用药提供指导。方法采用生殖道支原体检测试剂盒,对2012年8月至2013年4月解放军第44医院妇科门诊就诊的1 724例女性生殖道标本进行支原体培养及药敏检测,并对结果做统计学分析。结果 1 724例女性生殖道支原体感染率为43.6%,其中单纯Uu感染占85.1%;单纯Mh感染占3.7%;Uu合并Mh感染占11.2%。感染人群中21-40岁年龄段占85.2%。支原体对交沙霉素、强力霉素、美满霉素耐药率较低,对环丙沙星、左氧氟沙星、红霉素及司帕沙星的耐药率较高,单纯Mh及Uu合并Mh感染对抗菌药物的耐药率高于单纯Uu感染。结论女性生殖道支原体感染以单纯Uu为主,感染人群多见于21-40岁,支原体对常用抗菌药物出现了不同程度的耐药性,建议临床根据药敏结果合理用药,以减少耐药菌株的产生。