传染性法氏囊病病毒非结构蛋白VP5的原核表达及多克隆抗体的制备

利用PCR技术,从传染性法氏囊病病毒（IBDV）Gx,Gt毒株中分别扩增出VP5基因,将其克隆到表达载体pET30a、pET28a中。经PCR、酶切和序列分析鉴定获得重组质粒命名为pET28a-GtVP5、pET30a-GxVP5。将pET30a-GxVP5、pET28a-GtVP5分别转化宿主菌BL21(DE3),在IPTG诱导下均成功表达约24 kDa的Gx-VP5及23kDa的Gt-VP5融合蛋白,并都以包涵体形式存在。将Gx-VP5纯化后的蛋白免疫8周龄BALB/c雌鼠,ELISA分析表明制备的抗血清效价在1:25600以上,Western blot分析VP5表达产物能与抗6×His mAb及抗IBDV多克隆抗血清发生反应,具有良好的免疫反应特异性。     

阿托伐他汀治疗不稳定性心绞痛的临床疗效及安全性观察

目的：评价阿托伐他汀治疗不稳定性心绞痛患者的疗效及安全性。方法：将100例患者随机分为两组,对照组50例给予常规治疗;阿托伐他汀治疗组50例,在常规治疗的基础上加用阿托伐他汀,疗程12周。观察其治疗前后主要症状和体征,每博量（sv）、每分博出量（CO）、射血分数（EF）和舒张功能指标（E／A）等心功能指标,以及血清总胆固醇（Tc）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL．C）和低密度脂蛋白（LDL．c）和高敏c-反应蛋白（hs．CRY）等血液生化指标。结果：治疗组缓解心绞痛的显效率为28％,总有效率为96％,改善心电图的的显效率为22％,总有效率为84％,速效扩冠药物停减率为60．62％,经统计学处理均优于对照组（P〈O．05）;治疗组治疗后的心功能各指标均显著优于治疗前（P〈0．01）,且优于对照组（P〈0．05）。治疗组患者治疗后TC、TG、HDL—C、LDL．C及hs—CRP较治疗前降低（P〈0．05）,且优于对照组（P〈0．05）。两组患者治疗前后肝肾功能检查均在正常范围且无明显不良反应。结论：阿托伐他汀治疗不稳定性心绞痛疗效确切且安全可靠。     

基于SSR标记对33份烟草材料的聚类分析

利用与烟草赤星病抗性连锁的6对SSR标记和随机选取的21对SSR标记,对33份具有不同赤星病抗性的烟草种质资源的遗传关系进行了分析。结果表明:基于3个烟草赤星病抗性QTL两侧的6个SSR标记可以较好地将抗病品种和感病品种区分开来。在遗传相似系数（GS）为0.44的水平上,可将33个烟草品种分为4个类群:具有净叶黄（国内）和Beinhart-1000（美国）赤星病抗源的烟草品种聚为一类（Ⅰ类）;抗赤星病的CV系列烟草品种聚为一类（Ⅱ类）;长脖黄、G140、NC82等感病品种聚为一类（Ⅲ类）;香甜烟草（N.suaveolens）单独聚为一类（Ⅳ类）。基于随机选取的SSR标记的聚类结果则不能看出与赤星病抗性的联系。     

海岛棉抗病基因类似物与防卫基因类似物的分离及特征分析

利用已克隆的抗病基因(resistance-gene, R基因)与病程相关蛋白基因β-1,3-葡聚糖酶基因(PR2)的保守序列设计简并引物, 从海岛棉品种海7124基因组中成功分离了79条核苷酸结合位点(NBS, nucleotide binding site)类R基因类似物(RGAs, resistance gene analogs), 21条丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(STK, Serine/Threonine kinase)类RGAs和11条防卫基因类似物(DGAs, defense gene analogs). 将NBS类RGAs与棉花中已经克隆的该类RGAs进行序列分析, 鉴定了1个新的亚族. 具有连续ORF的48条NBS类RGAs和20条STK类RGAs分别可以划分为TIR-NBS与non-TIR-NBS两个亚类和A与B两个亚类. DGA中有4条具有连续的ORF. 对这些具有连续ORF的序列进行表达分析发现, 6条NBS类与1条STK类RGA受黄萎病菌诱导表达, 1条DGA经黄萎病菌诱导后表达量明显提高. 随机选取的4条TIR类与4条non-TIR类NBS类RGAs中有3条呈现2~3条杂交带, 其余的都有5~10条或以上的杂交带. 可见, NBS类RGAs大多数以多基因家族的形式存在. 另外, 有3条non-TIR类NBS类RGAs出现了一样的杂交带型, 可能这3条RGAs在基因组中成簇分布.     

丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白Q N末端基因的表达、纯化与抗原性分析

为了表达丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)中国分离株HVRIⅩ脂蛋白Q(LppQ)N末端基因,将该基因经PCR扩增后克隆至原核表达载体pET32a中,经酶切、PCR、测序证实获得了重组表达质粒,转化Escherichia coliBL21(DE3)菌,经IPTG诱导后获得可溶性融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的53.7%,用Ni-NTAHis.Bind纯化试剂盒纯化后,蛋白纯度达95%以上。表达蛋白经Western blot检测其抗原活性,结果表明纯化蛋白可与CBPP标准阳性血清发生强烈的反应,而与阴性血清不发生反应。     

烟草叶绿体基因组和线粒体基因组SSR位点分析

利用生物信息学方法对烟草叶绿体和线粒体基因组数据中的SSR信息进行了分析.结果表明,在叶绿体和线粒体基因组中分别获得186和578个SSR位点,SSR间的平均距离分别为838 bp和745 bp.在SSR的分布区域上,绝大多数SSR位点分布在UTR(尤其是5’UTR)区域;在SSR重复碱基类型上,主要集中在二、三碱基重复,二者占总SSR位点的90％以上,其中三碱基重复类型丰度最高.利用全部657对SSR引物在供试的10份烟草材料中进行扩增,发现所有引物均能获得目的片段,但在普通烟草内品种间并未检测到多态性,而在烟草种间有26对叶绿体基因组SSR引物和178对线粒体基因组SSR引物扩增出多态性条带,表明来源于烟草叶绿体基因组和线粒体基因组的SSR标记适合用于烟草种间进化、分类、遗传多样性等方面研究.     

烟草NtHMA4基因突变体鉴定及低镉特性研究

该研究从中国烟草主栽品种‘云烟87’的EMS突变体库中,通过TILLING技术筛选,获得NtHMA4的EMS突变体hma4-4h12。对突变体进行测序表明,该突变体核苷酸突变方式为C152T,氨基酸突变方式为T51I。利用100μmol/L氯化镉对突变体进行镉胁迫试验表明,hma4-4h12与对照‘云烟87’相比,叶片中镉、锌、铜、砷、铅、镍含量分别降低55.48%、21.11%、20.96%、27.50%、16.23%和19.28%,铁、锰和铬含量与对照没有显著差异。hma4-4h12突变体大田农艺性状观察表明,其株高、节距、茎围等与对照相比显著变小,推测hma4-4h12中含有影响这些性状的突变位点。该研究获得的低镉突变体hma4-4h12可以作为培育低镉烟草品种的材料,但是育种中利用该突变体,后续还需要通过回交去除不利突变的影响。     

多重PCR在烟草转基因检测中的应用

通过添加PCR增强剂DMSO,优化了检测转基因烟草中外源基因35S启动子、NPT Ⅱ基因和NOS终止子的PCR体系.将多重PCR应用于烟草转基因检测,实现了同一反应中可以检测35S启动子与烟草内源基因硝酸还原酶(NR)或NPT Ⅱ基因和NOS终止子.通过对待检样品试验,该方法稳定、可靠.     

禽网状内皮组织增生病病毒gp90全长蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性分析

摘要：【目的】原核表达免疫原性良好的禽网状内皮组织增生病病毒（( Reticuloendotheliosis virus, REV )gp90蛋白,并制备抗gp90蛋白高效价多克隆血清。【方法】利用PCR技术,以pMD18T-env为模板,扩增得到REV的gp90蛋白编码基因,将其克隆入表达载体pET-28a(+)中,将构建的原核表达质粒pET28-gp90,转化大肠杆菌（Escherichia coli ) BL21 (DE3) 感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后进行gp90蛋     

鸡传染性贫血病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备

以原核表达的鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP3蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,融合阳性细胞用间接ELISA方法检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得三株能稳定分泌抗CIAV VP3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为AG2、BC11、FG1。三株杂交瘤细胞株产生的细胞培养液上清和小鼠腹水的ELISA效价分别为2.5ⅹ102、1.5ⅹ102、1ⅹ102和2ⅹ106、1ⅹ106、2.5ⅹ105。与其它禽类病毒的交叉实验表明：这三株单抗具有良好的抗CIAV VP3蛋白特异性。该特异性单克隆抗体的研制成功为进一步研究VP3的生物学特性打下了基础。