系统低温生物学技术在实验小鼠资源保存中的建立与应用

目的建立小鼠胚胎与配子冷冻库,以安全、有效地保存小鼠资源。方法选择不同遗传背景（近交系、远交群、免疫缺陷、疾病模型和基因改变等）的实验小鼠,系统进行了超数排卵、体外受精（IVF）率、胚胎与精子的冷冻复苏效果、卵巢冷冻与移植、辅助体外受精等比较研究。结果①小鼠年龄和遗传背景的不同,其超数排卵的结果也不同（P〈0．01）。三个日龄段中,28日龄最好,其次为112日龄,56日龄最差;不同遗传背景小鼠的超数排卵结果显示,封闭群和大部分近交系小鼠优于转基因小鼠（P〈0．05）,自发性疾病小鼠和基因剔除小鼠的结果最差;②不同品系小鼠的新鲜精子和冻融精子的体外受精率差异有显著性（P〈0．05）,特别是C57BL／6J小鼠冻融精子的IVF率（10．3±4．2％）与新鲜精子（89．8±4.8％）相比,差异极显著（P〈0．01）;③不同品系小鼠的胚胎复苏率,除MRL／mp小鼠的复苏率略低外,其他小鼠品系均有较高的冷冻胚胎复苏率（58．2％～83．9％）,表明,不同遗传背景小鼠之间差异有显著性（P〈0．05）,但均可以达到有效保存小鼠资源的目的。④小鼠的遗传背景、年龄等对小鼠精子的冷冻效果都有影响,采用改良的FERTIUP冷冻保护剂和细胞质内单精注射（ICSI）技术可有效提高以C57BL／6J为背景的基因改变小鼠的精子冷冻复苏率。⑤卵巢冷冻保存可以改善雌性小鼠的繁殖困难或不孕。结论小鼠资源的安全保存,除了长期连续繁殖保种外,最好的或最保险的方法是低温保存。通过将胚胎、配子、卵巢等长期保存在液氮（-196℃）中避免遗传性状的改变,并在将来复苏后获得正常的小鼠后代,以用于生物学和医学等研究。     

除虫菊和茼蒿核糖体ＤＮＡ ＩＴＳ区的序列

除虫菊(Pyrethrum cinerariifolium),又称白花除虫菊,是众所周知的著名杀虫植物,也是目前世界上唯一集约化栽培的天然杀虫剂原料,至今仍为肯尼亚、厄瓜多尔等一些国家的支柱产业。除虫菊的头状花序中含有6种0.4 %～2 %的杀虫成分,即除虫菊酯Ⅰ,Ⅱ(pyrethrin-I,II),瓜菊酯Ⅰ,Ⅱ(cinerin-I,II)和茉莉菊酯Ⅰ,Ⅱ(Jasmolin-I,II),6个成分组成的复合植物杀虫剂,对家蝇的杀虫活性LD50为15～20μg/g,对大白鼠的毒性LD50为2124～2416 mg/kg,对温血动物毒性更低。面对呼唤绿色产业的21世纪,除虫菊的产业开发又成为天然农药开发的一个热点。我们…     

城市垃圾堆肥及其复合肥对黑麦草草坪质量的影响

为加速城市生活垃圾堆肥农业资源化利用研究,避免重金属等有害物质进入食物链,利用盆栽试验,研究了垃圾堆肥及以其为原料研制而成的3种复合肥的不同施肥水平对土壤肥力,黑麦草生长及草坪质量的影响,以选取最佳的适合黑麦草生长的垃圾肥料及其施用量。共设空白、堆肥、化肥、复合肥1、复合肥2、复合肥3等6个处理,每个处理又分为高、中、低3种施肥水平,测试草坪生物指标的质量状况和土壤肥力。结果表明:与化肥比较,垃圾复合肥可以显著提高土壤有机质、全氮、碱解氮、全磷的含量。垃圾复合肥明显促进了黑麦草的茎与根系的生长,提高了生物量,改善了叶片的色泽和整齐度,提高了草坪的密度和质量;促进了黑麦草对氮的吸收,尤其是生长后期,叶片中氮和叶绿素的含量明显高于化肥与空白处理,且差异显著。草坪质量综合评价以垃圾复合肥1的中量施肥处理为最好,黑麦草分蘖最高,地上生物量适度;除复合肥的高量施肥处理外,复合肥1的中量施肥处理茎叶中氮素和叶绿素含量最高,草坪品质最高。     

蚯蚓处理猪粪与秸秆的最适碳氮比及混合物腐熟度评价

以猪粪和水稻秸秆混合作饵料,通过90 d的室内培养试验,用平均体质量、日均质量增加倍数、日均产茧量和累计繁殖量等指标衡量4个处理（C/N 20、C/N 25、C/N 30和C/N 35）中蚯蚓的生长繁殖状况,并通过35 d的混合物（C/N 25、C/N 30和C/N 35）腐熟试验,采用pH、C/N和水溶性有机碳（DOC）3个指标综合评定混合物腐熟度.结果表明: 处理C/N 30的蚯蚓生长繁殖状况显著优于其他处理.35 d的混合物腐熟试验以21 d为拐点,pH和DOC均呈现先下降后上升的趋势,C/N则呈现持续下降趋势;但综合3个指标衡量,混合物至试验结束尚未完全腐熟.处理C/N 25在7～35 d时C/N＜20,表明C/N＜20不适宜作为衡量混合物腐熟与否的单一指标,应结合其他指标综合判定混合物的腐熟情况.     

GAS6 / AXL 信号通路失活对小鼠能量代谢的影响简

目的 研究小鼠生长停滞特异蛋白6（growth arrest-specific gene 6,GAS6）信号通路的失活对维持机体能量代谢稳态的影响.方法 以GAS6主要受体Axl基因敲除（Axl-/-）小鼠及其野生型（Axl＋/＋）小鼠为研究对象,比较两组动物基础血糖值、血脂四项指标、脂肪系数及骨骼肌中糖代谢信号蛋白PI3K、AKT与葡萄糖转运蛋白4（glucose transporter 4,GLUT4）基因表达水平及其蛋白磷酸化水平间的差异;同时检测人工诱发2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）造模前后小鼠血清GAS6蛋白水平与T2DM模型成模率的改变之间是否存在相关性.结果 Axl-/-小鼠血脂出现异常波动,且脂肪沉积率显著高于野生型小鼠（P＆lt;0.01）.Axl-/-小鼠血糖调节能力受损,其空腹血糖值显著高于野生型,骨骼肌Glut4的mRNA水平升高,而PI3K、AKT和GLUT4蛋白的磷酸化水平均略有下降.经人工诱发T2DM后,Axl＋/＋和Axl-/-小鼠血浆中GAS6浓度均显著低于各自对照组,且Axl-/-小鼠T2DM模型的成模率是Axl＋/＋小鼠的2倍（P＆lt;0.01）.结论 GAS6/AXL信号通路的激活在一定程度上降低血糖和抑制脂肪沉积.     

Tet2调节骨髓间充质干细胞功能

Tet2(Tet家族成员2)在DNA去甲基化修饰、表观遗传调控及骨髓造血中起着重要作用。笔者课题组前期研究发现,随着年龄增长,Tet2敲除小鼠逐步发展为淋系白血病和髓系白血病。但Tet2在骨髓微环境中的作用仍不清楚。进一步研究发现,Tet2敲除的骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)更多处于G2/M分裂期,其细胞分裂时间缩短,生长速度加快。长周期培养-起始细胞实验表明,Tet2敲除的MSC支持造血干细胞扩增和髓系分化的能力增强。通过点杂交实验发现,Tet2敲除后,骨髓细胞DNA总甲基化水平升高。对Tet2缺失的骨髓细胞进行甲基化测序,结果表明:基因组转录调控区域等多个功能性结构域的甲基化水平明显升高。同时,敲除Tet2的MSC分泌IL-8、IL-18等炎性细胞因子的能力下降;敲除Tet2的MSC更多分泌促进造血干细胞髓系分化的GM-CSF和CCL-3等细胞因子。Tet2可以影响间充质干细胞造血支持作用,进而调节造血。     

布比卡因与左旋布比卡因在剖宫产手术中麻醉效果比较*

摘要目的：探讨蛛网膜下腔注射左旋布比卡因和布比卡因对剖宫产手术中的麻醉效果。方法：选取2012 年3 月到2013 年3 月 期间在我院住院进行剖宫产手术产妇60 例作为研究对象。随机分为左旋布比卡因组与布比卡因组,观察两组患者的麻醉效果以 及术后不良反应的发生情况。结果：剖宫产手术中左旋布比卡因和布比卡因的蛛网膜下腔注射麻醉后的5 min 和7 min 后MAP 值与麻醉前比较差异具有统计学意义（P<0.05）。左旋布比卡因和布比卡因的蛛网膜下腔注射麻醉后的5 min、7 min、10 min 以及 15minHR值比较差异具有统计学意义（P<0.05）。左旋布比卡因和布比卡因的蛛网膜下腔注射麻醉后Bromage 评分0分时间和麻 醉后切口感觉疼痛时间相比差异具有统计学意义（P<0.05）。左旋布比卡因和布比卡因麻醉后的不良反应的发生率比较差异无统 计学意义（P>0.05）。结论：剖宫产手术麻醉中布比卡因的麻醉效果好于左旋布比卡因,临床上剖宫产等腹部手术应该选择布比卡 因进行临床麻醉。     

BDNF基因工程细胞对帕金森大鼠纹状体多巴胺及其代谢物影响的研究

目的:观察经侧脑室移植pIRESneo-EGFP-BDNF修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)对帕金森病(PD)大鼠纹状体多巴胺(DA)及代谢产物的影响。方法:采用电穿孔法将pIRESneo-EGFP-BDNF转染至骨髓MSCs;制备PD大鼠模型,随机分为Sham组,PD组,MSCs组,脑源性神经生长因子(BDNF)组,经侧脑室移植MSCs或pIRESneo-EGFP-BDNF修饰骨髓MSCs,术后2周,4周,8周,腹腔注射阿朴吗啡(APO)诱导PD大鼠旋转行为;应用高效液相色谱测定各组大鼠纹状体内多巴胺(DA)、高香草酸(HVA)及二羟苯乙酸(DOPAC)。结果:移植术后2周,4周,8周BDNF组、MSCs组大鼠与PD组比较旋转次数明显减少(P<0.05),以BDNF组改善更为明显。移植细胞干预PD模型8周后BDNF组、MSCs组大鼠纹状体DA、HVA、DOPAC较PD组明显提高(P<0.01),以BDNF组更为显著。结论:经侧脑室移植pIRESneo-EGFP-BDNF修饰的骨髓MSCs干预PD大鼠模型,显著降低PD大鼠纹状体内DA代谢率,提高DA水平,改善PD大鼠的行为能力。     

SD大鼠胞质内单精注射技术方法的建立

目的建立SD大鼠胞质内单精注射操作程序。方法和结果实验1：用直径为7～10μm和2-4μm的注射针以及相应的注射方法进行大鼠ICSI,ICSI后卵母细胞存活率（30．5％vs．61．3％）和卵裂率（12．5％vs．51．1％）均差异显著（P〈0．05）;实验2：分别在hCG后14h、16h和18h取卵进行ICSI,三组存活率（77．4％、74．1％vs．69．6％）差异不显著（P〉0．05）;14h和16h组的卵裂率（60．8％、56．0％vs．31．3％）与18h组差异显著（P〈0．05）;实验3：用不同的显微操作液H-mR1CM和H-mKRB进行大鼠ICSI,结果卵存活率相近（79．2％vs．75．9％）,卵裂率（70．5％vs．74．7％）差异不显著（P〉0．05）,但8-细胞发育率（43．5％vs．61．9％）差异显著（P〈0．05）,囊胚发育率差异极显著（P〈0．01）。结论大鼠ICSI时在注射hCG后14～16h取卵最佳,采用2—4pan直径的注射针、H—mKRB作为操作液更有利于卵的发育。