取样方式对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤模型细胞因子测定的影响

目标:利用大鼠腹岛状皮瓣构建缺血再灌注损伤模型,评价距血管夹闭点近、中、远不同距离的位置取样是否会影响细胞因子的检测,为该模型实验确立一种合理的取样方式。方法:对术后5天的大鼠成活皮瓣按照近、中、远三个位置进行取样,分别测定各样品的4种细胞因子IL-1β,IL-6,TNF-α和EPO的表达量,并用配对T检验分析评价三种取样方式。结果:样品中IL-1β,IL-6,TNF-α和EPO在缺血再灌注组的表达水平较假手术组显著上调;同一细胞因子在同一皮瓣不同取样位置的表达量在统计学上无显著性差异。结论:取样位置并不影响细胞因子的测定,即可以从成活皮瓣的任意位置取样测定相应细胞因子,但是在同一批实验中不同皮瓣取样位置须一致。     

富氢水和富氢生理盐水生物医学研究进展——临床试验

氢分子已被证实具有广泛的生物学效应,研究表明,氢气对多种疾病具有显著的治疗作用。近年来,国内外关于氢分子临床应用的报道较多,为疾病治疗提供了新的途径。饮用富氢水或注射富氢生理盐水是常用的氢气摄入方式,因其摄入简单、安全性高得到了临床广泛地关注。主要综述了富氢水在代谢性疾病、神经系统疾病、炎症性疾病、肿瘤、皮肤病及运动疲劳等的临床研究进展,旨在为富氢水和富氢生理盐水的临床应用及作用机制研究提供理论参考。     

胎儿早期小鼠无疤痕愈合的数据转录组学分析

已有研究显示,胎龄小于14 d的小鼠胎儿皮肤能够实现无疤痕创伤愈合。深入研究胎儿无疤痕愈合的分子机理,对于伤口护理方法优化与创伤医学的发展至关重要。利用已有数据库进行不同胎龄的小鼠皮肤组织转录组深入挖掘是常用的研究方法之一。从基因表达综合数据库（gene expression omnibus,GEO）在线数据库中寻找适合无疤痕愈合研究的基因表达谱芯片（GSE71619）,其中包含胎龄14 d（E14）、胎龄18 d（E18）和6周龄成年鼠（W6）的皮肤组织样本。分别将无疤痕愈合（E14）与疤痕愈合皮肤组（E18+W6）对比分析,筛选差异表达基因（differential genes,DEGs）,获得了4 654个DEGs（|log2 FC|≥1,P<0.05）。通过维恩图分析和基因功能注释确定了228个候选基因,并分为4个不同的Cluster。进一步重点分析了Cluster 3中涉及的基因：对于E14组,上调基因主要与促进伤口愈合的组织重塑和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）形成功能相关。通过蛋白互作网络分析,确定了17个属于胶原家族和成纤维细胞迁移相关基因的关键基因。研究结果揭示了ECM的重塑和成纤维细胞活化在早期妊娠胎儿无疤痕愈合模式中的重要性,并筛选出可能的关键基因,为无疤痕伤口护理和创伤、医美领域提供了重要实验依据。     

莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶的原核表达纯化及其生物学活性

利用基因重组技术及简易的纯化方法快速制备莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)。设计带有酶切位点的引物, PCR获得MMLV-rt基因片段; 再通过定点突变将目的基因的五个可溶性位点进行突变, 测序正确后, 插入到表达载体pET15b中构建成重组表达质粒pET15b-MMLV-rt; 表达产物的纯品通过金属离子(Ni3+)配体亲和纯化系统得到。用SDS-PAGE分析所纯化产物的大小和纯度, 再用RT-PCR 对其活性进行鉴定。构建的重组表达质粒pET15b-MMLV-rt 经IPTG诱导得到N端带有6His的RT融合蛋白, 通过Ni3+的亲和层析得到纯品蛋白, SDS-PAGE分析表明其纯度可达96%, RT-PCR实验表明具有较高的生物学活性。由此得出利用原核表达及简易的纯化系统可获得纯度为96%的逆转录酶纯品, 为大规模生产该酶提供了可靠的保证。     

两种不同病毒载体携带靶向大鼠金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-1小干扰RNA抗肝纤维化作用的比较

目的观察以腺相关病毒（AAV）及慢病毒（Lentivirus）为载体含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-1具有较强抑制作用的小干扰RNA（siRNA）对四氯化碳（CCI。）诱导的大鼠肝纤维化模型的干预作用。方法挑选针对大鼠TIMP-1基因具有较强抑制作用的siRNA序列,在体外构建为短发夹表达载体后,将其包装为重组AAV／siRNA-TIMP-I和Lenti／siRNA-TIMP-I,同时包装对照病毒AAV／EGFP和Lenti／EGFP。将Wistar大鼠分为对照组、CCl。模型组、AAV／EGFP组、Lenti／EGFP组、AAV／siRNA-TIMP-I和Lenti／siRNA-TIMP-1组,观察CCl。造模4周后,经H＆E及Masson染色评价各组动物的肝纤维化状况,经荧光定量RCR及Westernblot方法检测TIMP-1的表达抑制情况。结果H＆E及Masson染色证实,与对照组相比,CCI．模型组、AAV／EGFP组、Lenti／EGFP组肝脏胶原纤维明显增加,纤维化评分多为34级,同时肝脏TIMP-1的转录与蛋白表达水平均明显上升;而AAV／siRNA-TIMP-1和Lenti／siRNA-TIMP-l组肝纤维化程度明显减轻,纤维化评分多为2-3级,伴随肝脏TIMP-1的转录与蛋白表达水平均显著抑制。AAV／siRNA-TIMP-l和Lenti／siRNA-TIMP-I组在组织学表现及TIMP-1基因的转录与表达水平上无统计学差异。结论AAV／siRNA-TIMP-I和Lenti／siRNA-TIMP-1均可有效抑制大鼠肝脏TIMP-1基因表达,进而发挥抗肝纤维化作用。     

CRISPR/Cas9在肿瘤治疗中的研究进展

CRISPR/Cas9技术自从出现以来便迅速应用于肿瘤研究。在肿瘤发生的机理研究中,CRISPR/Cas9可用于研究单核苷酸突变、染色体异位等因素在肿瘤发生中的作用机制,同时也可以用于肿瘤细胞中功能缺陷基因的筛选。在肿瘤治疗方法的研究中,CRISPR/Cas9主要用于诱发机制比较清晰且诱因为病毒的肿瘤类型,例如鼻咽癌、宫颈癌等,通过对相应病毒的基因进行编辑从而抑制其致癌作用。利用CRISPR/Cas9技术还可以加速新肿瘤治疗靶点基因的发现。尽管发展和应用十分迅速,但是CRISPR/Cas9在肿瘤研究和治疗中的作用仍然受多种因素的限制,包括Cas9和sgRNA的输送效率、脱靶效应以及安全性和成本等。对CRISPR/Cas9在肿瘤研究中的应用进展进行了综述,以期为肿瘤发生、转移机制和肿瘤治疗等方面的研究提供参考。