人G-CSF转基因鼠的稳定遗传与表达

利用人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）基因组基因作为目的片段,将其受控于２．６ｋｂ的小鼠乳清酸蛋白（ＷＡＰ）基因的调控区下,通过显微注射法获得了两只整合有人Ｇ－ＣＳＦ转基因小鼠,通过繁殖建立了稳定的转基因系．一些表型参数测定表明转基因鼠与正常鼠无明显差别．通过ＲＴ－ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测,在乳腺表达出人Ｇ－ＣＳＦ,为乳腺表达外源蛋白质及今后大动物研究奠定了基础．     

λ噬菌体PL启动子控制的乙型肝炎病毒核心抗原基因在大肠杆菌中的表达

从DMM206,pPLa2311构威杂交质粒pMM-HBC83,使乙型肝炎病毒核心抗原基因在PL启动于控制下,在大肠杆菌中能高效表达,对数生长期细菌合成核心抗原的能力较静止期高,诱导前更换新鲜培养基能提高产置。     

乳清酸蛋白(WAP)基因调控序列的鉴定及在小鼠乳腺细胞表达LacZ基因的研究

乳清酸蛋白（ＷＡＰ）是小鼠乳中的主要蛋白质．在亚克隆该基因的基础上,对其进行了酶切鉴定,并对该基因５′区进行克隆和序列分析,在核实序列正确后,构建了以其为调控序列,指导β－半乳糖苷酶基因的真核表达质粒,采用直接注射质粒的方法在小鼠乳腺中表达出β－半乳糖苷酶活性,从而证实基因调控序列的功能正确性,可以用于转基因动物乳腺表达研究,同时证实该方法可以作为一种暂时性表达载体的验证方法．     

剪接因子U2AF65相关蛋白的研究进展

U2核糖核蛋白小体辅助因子(U2AF)65是参与前体mRNA剪接的重要辅助因子,前体RNA生成之初,U1核糖核蛋白小体(snRNP)结合到内含子的5'剪接位点,U2AF65和U2AF35分别结合到多聚嘧啶序列和3'剪接位点,剪接因子1(SF1)结合到分支位点是剪接体形成的第一步。U2AF的存在又辅助U2snRNP代替SF1结合到分支位点,使剪接反应顺利进行。最近几年,发现基因组中存在一些U2AF65的旁系同源基因序列。这些旁系同源基因由祖先基因经连续复制而横向形成,复制出的基因副本经历了各自的进化途径,最终它们在结构和功能上有相似之处,又各有独特之处。我们简要讨论了U2AF65、PUF60、CAPERα和CAPERβ这4种同源蛋白的发现过程、结构特征、自身的多样性、基因的进化和生物学功能。     

乙肝PreS_2抗原决定簇和霍乱毒素B亚基基因的融合与表达

本研究通过全化学法按大肠杆菌密码偏性合成了HBV PreS_2抗原决定簇基因,与ctxB基因的3’端融合。重组质粒转化大肠杆菌后融合基因得到高效表达,表达量达30μg/ml,表达产物95％以上分泌到胞外。表达的融合蛋白能与神经节苷脂GM1结合,说明融合蛋白保持了CTB的基本高级结构和生物学功能;ELISA实验证明融合蛋白具有CTB和HBV PreS_2的抗原性;应用亲和层析纯化后得到了电泳纯融合蛋白制品,为研究融合蛋白的免疫原性并进一步构建基因工程肽苗奠定了基础。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A的基因克隆、表达及活性试验

利用PCR从金黄色葡萄球菌标准株（Staphylococcus aureus, ATCC13565）中克隆了金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的基因,序列测定结果与报道完全一致。构建了表达载体pETSEA并获得高效表达,重组蛋白（rSEA）在37℃诱导时以包涵体形式存在,降低温度则出现可溶表达,可溶性rSEA占总rSEA的55%。可溶性rSEA经Ni²⁺亲和层析纯化,达电泳纯。通过同源模建对rSEA对SEA进行结构比较,结果表明尽管rSEA比野生型SEA多了9个氨基酸但其结构并没有明显的变化。单核细胞增殖试验进一步证明了该结论：将rSEA与SEA同外周血单个核细胞共同培养,两者均能有效地促进其增殖。将rSEA与体内激活的脾细胞共培养,则能增强脾细胞的体外抑瘤活性。     

恶性疟原虫DNA疫苗免疫效果的评估

以霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）为载体,由其基因构建了含有不同时期不同抗原表位的恶性疟原虫的融合基因ＣＴＢ～ＡＷＴＥ、ＣＴＢ～ＮＡＮＰ,前者除含有恶性疟原虫裂殖子表面主要抗原表位杂合多肽基因ＳＰｆ６６外,还含有很强的Ｔ辅助细胞表位ＣＳＴ３和Ｔｃ细胞表位,后者含有子孢子期的Ｂ、Ｔｈ细胞表位。将纯化的质粒免疫Ｂａｌｂ．ｃ纯系小鼠,３次免疫后诱导机体产生了体液免疫和细胞免疫,免疫的小鼠进行疟原虫子孢子攻击实验     

胶原蛋白ⅩⅧ——基底膜硫酸类肝素蛋白聚糖

胶原蛋白XⅧ(COL XⅧ)是一种十分保守的基底膜胶原蛋白成分,根据其蛋白质结构特点,它和COL XⅤ一起构成MULTIPLEXINs胶原亚家族。同时,它还含有丰富的硫酸肝素糖链,是迄今发现的第三个基底膜硫酸肝素蛋白聚糖。COL XⅧ基因具有两个结构不同的启动子区,由此产生组织分布各异的不同变体,它们在胚胎发育中具有器官特异的调控功能,特别是在视网膜发育中,完整的COL XⅧα1链必不可少。     

人造血干细胞因子

干细胞因子（stem cell factor,SCF）是一种重要的造血生长因子,它在造血干细胞动员、肿瘤放疗化疗的辅助治疗、贫血、放射病及其他血液病的治疗等方面具有重要的应用前景。采用基因全合成的方法实现rhSCF基因的克隆和高效表达,表达水平达到30％～40％。在工程菌发酵、rhSCF纯化和复性等中下游技术研究的基础上建立了rhSCF生产工艺,回收率大为35％,纯化产物纯度不低于98％．比活性0．9×10^6U／mg。     

大肠杆菌胸腺嘧啶合成酶thyA缺失突变菌株的构建

大肠杆菌K12 DY330菌株的染色体上整合有一种新型的同源重组系统——缺陷型λ原噬菌体同源重组系统。以DY330为出发菌,通过同源重组构建大肠杆菌thyA-株DY330TI,其基因组特点是：thyA基因除保留N端的1～49氨基酸残基相对应的必需核苷酸序列外,将其余部分全部缺失;此外,还敲除了DY330TI中与缺陷型λ原噬菌体同源重组功能相关的基因,从而尽可能避免了通过同源重组产生回复突变的可能性。通过大肠杆菌thyA基因对该突变株的转化实验,检测转化子的回复突变率,进一步证实该突变株的突变性状稳定,为构建以thyA为选择标志的大肠杆菌染色体质粒平衡致死系统提供了合适的缺陷型宿主菌。