人细胞周期相关激酶启动子的克隆和初步分析

克隆人的细胞周期相关激酶(CCRK)基因启动子,分析与其表达有关的转录调控因子。通过巢式PCR方法,从人的基因组总DNA中分离出CCRK基因5′端非翻译区大小为1072bp的片段。这段片段的3′端起始点在第一个外显子里第一个翻译密码子ATG( 1)上游128bp处。以1072bp为模板,对启动子进行5′端删除分析,分别扩增951bp(-1072／-128)、564bp(-692／-128)、313bp(-441／-128)、127bp(-239／-128)的片段,与pGL3-Basic荧光素酶报告载体重组构建,人工加上克隆位点,5′端带有KpnI、3′端带有XhoI位点。瞬时转染恶性神经胶质瘤细胞株U373,通过双荧光素酶活性进行分析。对分离出的1072bp的片段进行测序,结果与GenBank(Accession AF035013)的序列比较,同源序列达到98％。双荧光素酶活性分析564bp片段有最强的活性,313bp片段为有活性的最小片段。本研究为进一步研究分析CCRK的核心启动子和与其相关的转录因子奠定基础。     

细小病毒B19 Oligo探针设计

利用BLAST软件对细小病毒B19的序列进行序列比对,获得特异序列;利用生物学软件Oligo6.40设计特异性高、Tm值接近、长度均一的Oligo探针。结果获得了13条70bp的Oligo探针,用于芯片打印及细小病毒B19的检测。表明利用BLAST系统和生物学软件Oligo6.40设计细小病毒B19诊断芯片的探针是一种简便而有效的方法。     

温度对斯托克通氏烟草雄配子体形成和发育的影响

为探究低温对斯托克通氏烟草(Nicotiana stocktonii)花粉母细胞(PMC)减数分裂及其雄配子体发育过程的影响,采用卡宝品红染色法,研究不同温度条件下该材料雄配子体形成和发育的过程。结果表明:种植于昼温(31±0.5)℃、夜温(11±0.5)℃人工气候箱中的Nicotiana stocktonii花粉母细胞减数分裂过程异常现象较少,出现微核的比率较低,用新鲜成熟的花粉做萌发实验花粉萌发率较高,为(71±3)%; 而种植于昼温(25±0.5)℃、夜温(3±0.5)℃条件下的Nicotiana stocktonii开花后花药大多干瘪,用新鲜成熟花粉做萌发实验花粉萌发率低,为(13.67±3)%,花粉母细胞减数分裂过程出现染色体桥、染色体不同步、染色体断片、落后染色体等现象,存在微核的细胞比率较高。因此,Nicotiana stocktonii花粉母细胞减数分裂与小孢子发育过程易受温度影响,从而影响花粉的可育性。     

OAZ1基因诱导慢粒白血病K562细胞向成熟红系方向分化

近年来,鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)作为肿瘤治疗的潜在靶点备受关注.本文研究了OAZ1基因过表达对慢粒白血病K562细胞红系分化的作用.构建框移位点突变的OAZ1 过表达慢病毒载体pLVX-Neo-OAZ1-IRES-ZsGreen,包装病毒并感染K562细胞, Western 印迹验证其过表达效果.FACS检测细胞分化标志物CD71和GPA,结合联苯胺染色分析细胞红系分化情况.对比氯化高铁血红素(hemin)诱导组,实时RT-PCR检测与K562细胞红系分化、癌变的关键基因(GATA1、BCR/ABL、TGFβ)转录水平,对OAZ1 诱导分化的机制进行初步探索.结果表明,慢病毒过表达载体及K562细胞过表达体系构建成功.OAZ1过表达后细胞红系分化标志物CD71+/GPA+为(11.22±2.09)%,与对照组(4.07±1.04)%、空病毒组(1.79±2.36)%相比差异极显著(P<0.01);联苯胺蓝染阳性率为(14.037±0.083)%,与对照组、空病毒组比较,差异也极显著(P<0.01).定 量分析结果提示,相对于GATA1、BCR/ABL 基因mRNA转录水平的影响,OAZ1对TGFβ 基因的作用更为明显.为此推断,OAZ1基因可诱导白血病K562细胞向成熟红系方向分化,其作用机制可能与TGFβ信号转导通路相关.     

从医疗损害赔偿责任层面破解我国医师多点执业困境

推行医师多点自由执业从理论上讲可以打破优质医疗资源集中在大城市、大医院这种不均衡分布的局面。由于医师异地执业出现医疗损害的赔偿责任究竟是执业医师本人承担、接受或输出医疗机构承担并不明确,一旦发生医患纠纷或医疗损害可能会出现“三方都不想管、三方都要负责”的局面。从试点地区的情况来看,结果并不满意,多数属于“叫好不叫座”。尝试从医疗损害赔偿责任层面解读我国医师多点执业面临的困境后得出：必须完善医疗损害鉴定机制,构建执业医师自由人制度,医师本人需购买异地执业医疗损害赔偿责任强制性保险,在此基础上才有可能逐步推行真正意义上的医师多点执业。     

不同围封年限对退化大针茅草原生产力和土壤碳、氮贮量的影响

探讨了不同围封年限(6、8、30年)对大针茅草原生产力和土壤碳氮贮量的变化,以期构建围封年限与草地利用的关系,为草地管理提供科学依据。本实验通过实地样方调查及实验室分析,对不同围封年限大针茅草原群落的植被、土壤特征进行测定,分析了不同围封年限草原的生物量、土壤有机碳、氮贮量的恢复情况。结果表明:与持续自由放牧样地相比,围封后草原的生物量和土壤碳、氮贮量均呈显著增加;随着围封年限的延长,生物量和土壤碳、氮贮量也表现出增加的趋势,地上生物碳和土壤有机碳的增加趋于稳定。     

产后与非产后抑郁症患者记忆功能的对比研究

目的:探讨产后与非产后抑郁症患者记忆功能的差异,为产后抑郁症患者的早期预防提供参考依据。方法:通过17项汉密尔顿抑郁量表和韦氏记忆评定解放军第三医院2011年1月至2012年11月收治的40例产后抑郁症患者(产后组)、42例非产后抑郁症患者(非产后组)的记忆功能,并与42名健康志愿者(对照组)的结果进行比较。结果:(1)与对照组比较,产后组长时记忆评分与其比较差异不显著(P0.05),除触摸因子外,短时记忆各因子评分均显著降低(P0.05),瞬时记忆评分、记忆商均明显降低(P0.05);非产后组长时记忆评分显著降低(P0.05),除联想、理解因子外,短时记忆评分差异均不显著(P0.05),瞬时记忆、记忆商评分均显著降低(P0.05)。(2)与产后组相比,非产后组长时记忆评分显著降低(P0.05),短时记忆图片、再认因子评分显著升高(P0.05),联想、触摸、理解因子差异不显著(P0.05),瞬时记忆、记忆商评分差异不明显(P0.05)。结论:产后与非产后抑郁症患者的记忆功能均下降,但受损成分不同,产后抑郁患者的记忆功能受损只是一种功能性受损。     

高效液相色谱法测定食品中姜黄素类化合物检测方法的建立

建立高效液相色谱法测定食品中姜黄素类化合物含量的分析方法。利用单因素试验,对食品中姜黄素类化合物的提取试剂、提取方式、提取时间进行选择,确定最佳提取条件为甲醇振荡提取5 min。色谱条件：YMCTM C30色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为乙腈-水（80∶20,v/v）,用磷酸调节pH 到3.0,流速1 mL/min,检测波长420 nm,柱温30 ℃。结果表明：3种姜黄素类化合物在0.10~10.00 μg/mL内与峰面积有良好线性关系,生姜和咖喱中3种姜黄素类化合物的平均回收率分别为87.86%~107.35%和87.08%~107.47%,RSD均小于5%,3种姜黄素类化合物含量的相对标准偏差（RSD）均小于5%。该方法简单可行、重复性好、准确度高,可广泛用于食品中姜黄素类化合物含量测定。     

抗酶1基因转染对HeLa细胞增殖及细胞周期的抑制作用

研究抗酶(antizyme)1对人宫颈癌HeLa细胞增殖与细胞周期的影响,并分析抗酶1对细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达影响.采用定点突变技术,将抗酶1的frameshift位点缺失,随后将突变基因重组至真核表达载体pEGFP-N1中,鉴定后转染HeLa细胞.通过MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术分析抗酶1对细胞周期的影响.RT-PCR和Western印迹检测抗酶1转染对细胞周期蛋白 D1基因表达的影响.酶切结果显示,抗酶1突变基因成功克隆至pEGFP-N1中.成功转染HeLa细胞后,检测结果显示,抗酶1能够减慢HeLa细胞增殖速度,并使细胞停滞于G₀/G₁期,细胞周期蛋白D1基因的表达同时受到抑制.实验说明,抗酶1基因能够抑制HeLa细胞增殖,通过降低细胞周期蛋白D1的表达阻滞细胞周期.     

厦门口岸进境原木截获的小蠹科害虫调查

【背景】小蠹虫是国际贸易中重要的钻蛀害虫,也是全国口岸主要截获害虫之一。【方法】本文对2010~2014年厦门口岸进境原木中截获的小蠹科害虫的寄主、来源国家、截获次数进行了统计分析,并编制了截获小蠹种类检索表,提出了口岸检疫要点。【结果】截获的小蠹害虫种类主要有长林小蠹、赤材小蠹、十二齿小蠹和南部松齿小蠹等,主要来源于澳大利亚,新西兰和巴西等国家,寄主主要有辐射松,樟子松,湿地松和海岸松等种类。【结论与意义】本研究可为一线口岸检疫查验提供指导。