荧光标记复合PCR扩增微卫星位点的构建与优化

本研究采用毛细管电泳技术,构建并优化了荧光标记复合PCR同时扩增多个微卫星位点。主要过程为：首先根据设计所扩增微卫星位点的期望长度,将9个微卫星位点分成两组,5个位点用FAM（蓝色）标记,4个位点用HEX（绿色）标记;两种荧光类型分组优化,用琼脂糖胶电泳检测。其次,荧光标记的复合PCR扩增8个中华绒螯蟹样品的9个微卫星位点,采用ABI3730xl毛细管电泳检测,以ROX500（红色）为长度标准物,结果经Genemapper3.5软件 分析,检测结果表明毛细管电泳检测荧光标记复合PCR产物不仅精确读取微卫星位点的长度（分辨率高达1bp）,还能区分微卫星位点复制时滑链所引起的“回声斑”;调整各微卫星位点引物比列使所有位点扩增强弱均匀。最后,逐一检测复合PCR基本参数（dNTP浓度、 PCR程序和模版DNA用量）对复合PCR产物的影响,优化PCR。结果表明通过毛细管电泳检测荧光标记复合PCR产物来读取微卫星位点的基因型具有精确性、高效性和稳定性。     

医学微生物学实验课教学考核与成绩评定的改革

医学微生物学是一门机能与形态并重,理论与实践密切结合的学科。实验课教学是医学微生物学教学的重要组成部分。通过实验课教学,不仅可以印证和加深理解有关的基础理论,同时应使学生掌握有关的基本技术和技能,提高他们的表达能力和运用理论知识的能力。因此,本教研室在历年教学中一直很重视实验课教学,投入了大量的人力和物力,理论课（大课）与实验课（小课）的比例始终保持在 １：０．７左右。但是,作为检查教学效果、了解学生对所学知识掌握程度的重要手段的考试,却一直采用全部笔试的方法,且内容绝大部分为基本理论,而有关实…     

乙脑病毒全长cDNA的扩增克隆及体外转录制备感染性RNA的研究

本研究根据已知的乙脑病毒（ＪＥＶ）ＳＡ１４株基因序列设计一套引物,利用长模板ＲＴ－ＰＣＲ技术,一次扩增出了ＪＥＶ的全长ｃＤＮＡ,并采用大片段克隆技术将其克隆于载体的ＲＮＡ聚合酶启动子下游。阳性克隆转录的ＲＮＡ转染ＨＢＫ细胞后细胞产生病变,经乳鼠脑内接种及特异性免疫荧光染色证明为ＪＥＶ,这一结果表明ＪＥＶ感染性克隆的构建获得了成功。其次,合成一条含有ＲＮＡ聚合酶启动子序列的５′引物,利用长模板ＲＴ－     

肾综合征出血热病毒50K结构蛋白的纯化和鉴定

以HFRS病毒感染的乳小白鼠脑为原材料,用硫酸鱼精蛋白和PEG沉淀法制备粗病毒抗原。将此粗制抗原通过抗HFRS病毒MeAb与Separose4B偶联制成的免疫吸附柱,并用3MKCNS洗脱,获得了SDS-PAGE均一纯的特异性病毒结构蛋白,分子量为50,000道尔顿,具有较高的抗原滴度和良好的免疫原性。初步认为该蛋白可能是HFRS病毒的一种囊脱蛋白。     

探索式教学两实例

探索式教学的特点是注重对学生进行能力和科学方法的培养。根据科学研究的三个基本因素:课题、方法、结论在教学中的不同组合,探索式教学有8种方式。我们常用的是其中的4种,列表如下。(表中的√,表示由教师向学生提供的,×为由学生探索的)     

墓室酥碱砖壁画及其环境的真菌多样性分析

【背景】酥碱是威胁古代墓室砖壁画保存的主要病害之一,水分和盐分共同作用下壁画产生酥碱病害,而其中真菌类群、来源及耐盐性鲜有报道。【目的】比较敦煌汉墓、晋墓和嘉峪关五号墓内砖壁画酥碱样品及其赋存环境空气中可培养真菌的群落组成、多样性及耐盐性,为砖壁画的防护提供理论依据。【方法】运用扫描电镜观察酥碱样品微观形貌,并结合能谱、X射线衍射进行成分分析;对样品培养、分离、纯化获得真菌纯菌株,运用形态和分子生物学技术鉴定种属;利用梯度含盐培养基研究菌株的耐盐性。【结果】墓室酥碱样品及环境空气中青霉属(Pencillium)、曲霉属(Aspergillus)和枝孢属(Cladosporium)丰度较高,为优势属;其他菌属包括镰孢菌属(Fusarium)和毛壳菌属(Chaetomium)为稀有属。三座墓室砖壁画酥碱中均存在烟曲霉(A.fumigatus)、花斑曲霉(A.versicolor)以及黄灰青霉(P.aurantiogriseum);酥碱样品与墓室内外空气中分离获得的真菌类群间有一定相似性。多数菌株可在含15%NaCl的培养基上生长,一株产黄青霉(P. chrysogenum)甚至可在30%盐浓度条件下生长。【结论】青霉属和曲霉属为墓室共有优势菌,多数菌株有较强的耐盐性。     

乌金猪、青峪猪和成华猪免疫器官与组织Toll样受体和抗菌肽基因表达比较研究

Toll样受体(TLRs)和抗菌肽是机体天然免疫系统的重要组成部分,是抵御外界有害微生物或病毒入侵的重要屏障。乌金猪、青峪猪、成华猪是中国优良地方猪种,具有繁殖力高、抗病耐逆性强等优点。本实验比较了8月龄乌金猪、青峪猪、成华猪与约克夏猪的消化道、呼吸道局部免疫组织和全身免疫器官的先天免疫特点,采用实时荧光定量PCR技术检测TLRs(TLR1、TLR2、TLR4、TLR7、TLR9)和抗菌肽(p BD-1、PR-39)基因在4种猪的胸腺、脾脏、扁桃体、肠系膜淋巴结和肺门淋巴结中的表达差异。结果显示,成华猪胸腺中TLR7、PR-39,脾脏中TLR4、TLR7,肠系膜淋巴结中TLR4、TLR9,肺门淋巴结中TLR1、TLR4、TLR7、TLR9 mRNA表达水平显著高于其他猪种(P 0. 05);乌金猪胸腺中TLR1、TLR9,扁桃体中TLR1、TLR2、TLR4、TLR7、TLR9、p BD-1,肠系膜淋巴结中TLR7 mRNA表达水平显著高于其他猪种(P 0. 05);青峪猪扁桃体和肠系膜淋巴结中PR-39 mRNA表达水平显著高于其他猪种(P 0. 05)。这些结果为进一步利用优良地方猪种杂交育种和筛选抗病分子标记提供了新的线索。     

水淹条件下秋华柳亚细胞中镉的分配特征

选取秋华柳(Salix variegata)扦插苗为研究对象,通过设置0、0.5、2、10 mg/kg 4个镉胁迫浓度,研究了水淹条件下秋华柳根、枝、叶亚细胞中镉的分配特征。结果表明:(1)试验各处理组秋华柳存活率均为100%,表现出良好的镉和水淹耐受能力。(2)与对照相比,在水淹条件下,各处理组秋华柳根、枝和叶的细胞壁仍是镉最主要的富集部位。各处理组植株细胞壁中的镉含量显著高于其他组分,质体中镉含量次之,细胞核和线粒体组分中的镉含量始终处于较低水平。(3)水淹显著提高了秋华柳根细胞壁中的镉含量,显著降低了高浓度镉处理(10 mg/kg)下萌枝细胞壁中的镉含量,但对叶细胞壁中的镉含量没有显著影响。(4)水淹显著提高了秋华柳根细胞中质体中的镉含量,对萌枝、叶细胞质体中的镉含量没有显著影响。研究证明,水淹条件下,秋华柳根枝叶细胞壁仍然是镉积累富集的最主要部位,从而减少了重金属对植物细胞的伤害。秋华柳适用于三峡消落带镉污染区域的植物修复。     

不同地区金线莲种质资源品质分析及综合评价

为筛选优质的金线莲种质资源,以13个来源于不同地区的金线莲种质为材料,分析测量了其表观性状和相关的功能成分含量。结果表明:金线莲的含水率较高,为85.07%~90.91%,醇溶性浸出物含量为13.62%~41.71%,总黄酮含量为8.15~40.72 mg/g,多糖含量为2.10%~25.61%;种质之间含水率差异较小,但醇溶性浸出物等功能成分差异显著;醇溶性浸出物含量与总黄酮含量呈正相关,含水率、多糖含量与醇溶性浸出物、总黄酮呈负相关;台湾金线莲、云南大圆叶金线莲和福建大叶金线莲综合评价得分最高;湖南郴州金线莲中醇溶性浸出物含量达41.71%、总黄酮含量为40.72 mg/g,显著高于其它品种;5种福建金线莲品种(系)的醇溶性浸出物和总黄酮含量最少,多糖含量较高。综上:台湾金线莲、云南大圆叶金线莲、福建大叶金线莲和湖南郴州金线莲利用价值高,推广前景广阔。     

中国唇花金龟属一新种及一新纪录：鞘翅目：花金龟科

唇花金金属ＴｒｉｇｏｎｏｐｈｏｒｕｓＨｏｐｅ全世界已记载１２种,８种产于中国,包括本文记述的１个新种,舌唇花金龟Ｔｒｉｇｏｎｇｐｈｏｒｕｓｌｉｇｕｌａｒｉｓ和１个新纪录种。