米曲霉外源表达系统研究进展

丝状真菌米曲霉是发酵工业的重要菌种,具有强大的蛋白分泌能力和较高的食品安全性,可作为表达外源蛋白的细胞工厂。近年来,米曲霉全基因组序列的测序完成和基于表达序列标签的基因组学研究,为深入研究米曲霉外源表达系统提供了条件。从基因组学进展、遗传转化体系等方面综述了米曲霉作为外源蛋白表达宿主的研究进展。针对米曲霉在外源蛋白表达中存在的瓶颈,提出构建蛋白酶缺陷株、使用强启动子、融合表达等策略,以提高外源蛋白的表达和产量。最后介绍了米曲霉表达系统的应用,利用米曲霉代谢工程菌生产工业用酶和次级代谢产品具有良好的前景。     

镉胁迫对拟南芥幼苗错配修复基因表达的影响

采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术研究了Cd胁迫对拟南芥(Ara-bidopsis thaliana)幼苗错配修复和增殖细胞核抗原基因表达的影响,并结合幼苗的形态和生理指标,选取Cd胁迫敏感的生物标记物.结果表明:不同浓度(0.25、0.5、1.0 mg·L1)Cd处理对拟南芥幼苗叶片数、地上部鲜质量影响不大;Cd浓度为0.25 mg·L-1时,地上部分可溶性蛋白质含量明显升高(P<0.05),Cd浓度为0.5和1.0 mg·L-1时,可溶性蛋白质含量明显降低(P<0.05);叶绿素含量随着Cd浓度的增加而微弱增加(P>0.05).Cd浓度为0.25 mg·L-1时,以18S rRNA为内参照,PCNA1、PCNA2、MSH2、MSH3、MSH6、MSH7 6个基因均出现了诱导表达,当Cd浓度增加到1.0 mg·L-1时,除了MSH6持续表达诱导及MSH3基因与对照相比表达抑制外,其他基因的表达依然出现诱导,但都低于0.5 mg·L-1Cd处理下的基因表达水平.以上结果表明,基因表达的改变可作为检测Cd污染对植物遗传毒性效应潜在有用的生物标记物.     

牦牛Myf-5基因的克隆测序及其系统进化研究

本研究对牦牛(九龙牦牛)的生肌决定因子5(Myf-5)基因进行了T-A克隆测序和分析,并与多个物种的相应基因编码区核苷酸序列、氨基酸序列进行了比对分析,构建了物种间的系统进化树.结果 表明:①牦牛的Myf-5基因大小为3313 bp,由3个外显子和2个内含子组成,与普通牛等9个物种比较,在基因大小上有较大的差异,但外显子和内含子的组成一致.②牦牛、大额牛、瘤牛、水牛、普通牛、人、恒河猴、黑猩猩、狗、家鼠、软体贝壳、鸡、斑马鱼等物种间Myf-5基因编码区的核苷酸序列同源性较高,其中,牦牛、大额牛、瘤牛、水牛、普通牛间的同源性最高,达98.4%以上,说明Myf-5基因编码区核苷酸序列在动物物种间具有较高的保守性.③牦牛、大额牛、瘤牛、水牛、普通牛、黑猩猩、恒河猴、人、狗、家鼠、软体贝壳、鸡、斑马鱼等物种间Myf-5基因编码蛋白的氨基酸序列具有较高的同源性,保守性强,这一结果与编码区核苷酸序列的比对结果基本一致.④根据核苷酸序列,用NJ法构建的牦牛、大额牛、瘤牛、水牛、普通牛、人、恒河猴、黑猩猩、狗、家鼠、软体贝壳、鸡、斑马鱼等13个物种的分子系统进化树显示:牦牛、普通牛、瘤牛、水牛和大额牛在较近的亲缘关系下聚为一大类,人、黑猩猩和恒河猴聚为另一大类,然后这两类再和其他物种相聚.这一分类结果与各物种的动物学分类结果和血液蛋白、mtDNA水平上的聚类结果基本一致,支持牦牛、普通牛和瘤牛3个物种间不应该是属间或亚属间关系,而应是同一属下的不同种,将牦牛、普通牛和瘤牛划分在同一个属--牛属(Bos),而将水牛划分在另一个单独的属的观点.同时也显示该基因序列适合用于动物学分类.     

反相高效液相色谱法测定金雀根中高丽槐素的含量

建立金雀根中高丽槐素含量测定的反相高效液相色谱分析方法,对6个不同产地的金雀根中高丽槐素的含量进行测定,同时给出金雀根中9种异黄酮类化合物在相同色谱条件下的分析图谱.结果表明在此色谱条件下,10～250 μg/mL浓度范围内,高丽槐素的峰面积与浓度具有良好的线性相关性(r2=0.9999),该方法精密度较高,重现性和稳定性良好,平均回收率为97.31%.     

应用PCR—SSCP鉴别我国多斑按蚊复合体成员种（双翅目：蚊科）

测定并分析了我国多斑按蚊复合体5个成员种(多斑按蚊、威氏按蚊、伪威氏按蚊、达罗毗按蚊和塞沃按蚊)核糖体DNA 28S-D3序列,应用PCR-SSCP技术对该复合体成员种进行分子鉴别。结果显示：我国多斑按蚊复合体5个成员种的D3序列长度范围为388-394bp,GC含量为58．12％—59．79％,D3序列在种内保守,在种间存在差异,种间差异最大的是达罗毗按蚊与伪威氏按蚊为6．55％,最小的是达罗毗按蚊与多斑按蚊为2．58％,平均差异率为4．59％。用SSCP分析多斑按蚊复合体5个成员种的28S-D3扩增产物,结果显示电泳条带具种特异性,可用于鉴别各蚊种。     

粪巨螯螨雄螨描述(蜱螨亚纲:革螨股)

粪巨螯螨 Macrocheles merdarius( Berlese,1 889)在所查到的文献中仅描述有雌螨 [1 - 5] ,今根据集安标本描述其雄螨。图 1- 4　粪巨螯螨 Macrocheles merdarius(Berlese)♂1 .背面 ;2 .腹面 ;3 .螯钳 ;4.足 粪巨螯螨 Macrocheles merdarius( Berlese,1 889)雄螨 (图 1 - 4)体黄色 ,近六角形 ,长宽 4 0 2× 2 30μm。背毛 34对 ,均短小光滑 ,F1 基部距离较远。全腹板有胸毛 3对 ,胸后毛 1对 ,生殖毛 1对 ,腹毛 4对 ,围肛毛 3根。胸区有隙孔2对。Ad位于肛孔前缘水平 ,Ad与 PA约等于肛孔长。气门沟前端达到颚基。头盖看不清。螯钳导精…     

用巢式RT-PCR检测精神分裂症患者血液标本中博尔纳病病毒p24基因

目的：检测精神分裂症患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)标本中博尔纳病病毒(Borna Disease Virus,BDV)p24基因,探讨BDV感染与精神分裂症的关系。方法：用巢式RT—PCR方法检测黑龙江省精神分裂症患者及正常人PBMCs中BDV—p24基因片段,同时扩增β—肌动蛋白(β-actin)作为内参照。结果：66例精神分裂症患者中,BDV—p24基因的阳性检出率为28．8％(19／66);47例正常人中,BDV—p24基因的阳性检出率为6．3％(3／47),经比较两者间阳性率差异有显著性(P＜0．05)结论：证实中国存在BDV感染,黑龙江省精神分裂症的发生可能与BDV感染有关。     

恙螨四新种及对猪尾鼠体外寄生虫地理分布初探(蜱螨亚纲,恙螨科)

记述采自湖北西部恙螨科Trombiculidac 4新种,吴氏叶片恙螨Trombiculindus(Plumosicola)wuhouyongi Liu et Ma,sp.nov.。武陵山纤恙螨Leptotrombidium(Leptotrombidium)wulingshanense Liu,Xiang et Ma,sp.nov.,猪尾鼠纤恙螨L.(L.)typhomyis Liu et Ma,sp.nov.和敦清徐氏恙螨Hsuella dunqingi Liu et Ma,sp.nov.,文中综合讨论了猪尾鼠Typhlomys cinereus体外已知16种寄生虫,蚤、螨和吸虱的地理分布及与宿主动物的关系等问题。模式标本存放军事医学科学院微生物流行病研究所医学昆虫标本馆。     

湖北西部革螨三新种(蜱螨亚纲,中气门亚目)

记述采自湖北西部厚厉螨属Pachylaelaps Berlese,1888 1新种,巴东厚厉螨P．badongensis sp．nov．,赫刺螨属Hirstionyssus Fonseca,1948 1新种,差毛赫刺螨H．anisochaetus sp．nov．和下盾螨属Hypoaspis Canestrini．1884 1新种,五峰下盾螨H．wufengensis sp．nov．,文中描述了新种的形态,并附有详细形态特征图。模式标本存放军事医学科学院微生物流行病研究所医学昆虫标本馆。     

盐地碱蓬过氧化氢酶基因的克隆及盐胁迫下的表达分析

过氧化氢酶是清除H2O2的重要酶类.从400 mmol/L NaCl处理的盐地碱蓬(Suaeda salsa(L.)Pall)地上部分的cDNA文库中克隆了两个编码过氧化氢酶的cDNA(Sscat1和Sscat2),其中Sscat1(1.7kb)是一个全长cDNA克隆,编码一个492个氨基酸的开放阅读框架,而Sscat2(1.1kb)是一个cDNA片段.据编码Sscat1 3＇端的287个氨基酸的cDNA序列与Sscat2的cDNA序列进行的BLAST同源性分析表明,Sscat1和Sscat2在核苷酸水平的一致性为71.9%,在氨基酸水平上的一致性为75%.Southem杂交表明,Sscat1在盐地碱蓬基因组中为多拷贝基因,Sscat2则为一个单拷贝基因.Northern杂交结果表明在盐胁迫条件下Sscat1和Sscat2的表达存在差异:400 mmol/L NaCl处理48h的盐地碱蓬根中的Sscat1和Sscat2 mRNA水平比对照显著提高,但是在叶中仅Sscatl受盐诱导表达.不同盐处理时间下的表达分析也证实,在盐地碱蓬叶中仅Sscat1受盐诱导表达.这说明Sscat1和Sscat2在盐地碱蓬中是差异调控的.生理分析表明过氧化氢酶的活性在盐胁迫条件下显著提高.