靶向WNT5A基因的shRNA逆转录病毒表达载体的构建与鉴定

目的:构建人WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体.方法:根据人WNT5A基因mRNA序列设计并合成两条互补的DNA单链寡核苷酸,将退火后形成的双链连接于pSUPER Retro RNAi质粒,构建WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体,经脂质体介导入GPG293细胞,包装成逆转录病毒.用该逆转录病毒感染人鼻咽癌细胞,Western blot法和RT-PCR检测细胞WNT5A的表达.结果:目的序列成功连接于载体并包装成逆转录病毒,免疫印迹检测和RT-PCR检测结果表明构建的WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体能显著抑制鼻咽癌细胞WNT5A的表达.结论:成功构建人WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体.     

高静水压培养对内皮酯酶表达的影响

探讨高静水压培养对内皮脂酶表达的影响及其机制．分大气压(0 mmHg)和高于1个标准大气压的递增压力(120、150、180 mmHg)培养人脐静脉内皮细胞,用蛋白酶体抑制剂MG132进行干预．RT-PCR检测内皮脂酶 mRNA的表达,间接免疫荧光技术和流式细胞术检测内皮脂酶蛋白的表达．结果显示,高静水压培养明显促进内皮脂酶mRNA和蛋白质的表达,180 mmHg培养24 h内皮脂酶mRNA的表达较对照组上调2.2倍(P < 0.001),内皮脂酶蛋白表达较对照组上调2.54倍(P < 0.001)．蛋白酶体抑制剂MG132干预明显抑制180 mmHg培养诱导的内皮脂酶 mRNA的表达,MG132干预组内皮脂酶mRNA表达约为180 mmHg培养组的50% (P < 0.05)．结果说明,高静水压上调内皮脂酶 mRNA和蛋白质的表达,其机制可能与核因子-κB活化有关．     

DS-1226对慢性限制活动大鼠的抗抑郁作用

目的研究人参皂苷水解脱糖产物DS-1226对慢性限制活动大鼠的抗抑郁作用,为抗抑郁药物的研发提供实验数据。方法将90只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为6组,每组15只,分别为对照组（control）、模型组（model）、西酞普兰组（citalopram,100 mg/kg）、低剂量组（DS-1226,18.75 mg/kg）、中剂量组（DS-1226,37.5mg/kg）、高剂量组（DS-1226,75 mg/kg）。预防7 d给药后进行每天14 h连续28 d的限制活动造模并连续给药。造模过程中每周监测体重并在造模完成后进行糖水偏爱、新奇事物、自主活动实验,测试完成后处死动物取血清检测皮质酮含量。结果经过慢性限制活动应激后,模型组大鼠的体重和糖水偏爱指数降低,对新奇事物的探索行为以及自主活动尤其是中央区的活动减少,血中的皮质酮含量升高。但中剂量、高剂量的DS-1226和西酞普兰能不同程度的提高慢性限制活动大鼠的体重和糖水偏爱指数,增加对新奇事物的探索次数、探索时间、降低潜伏期时间,增加自主活动尤其是中央区的活动,降低血中皮质酮的含量。结论 DS-1226具有改善慢性限制活动大鼠抑郁行为的作用。     

Wnt5a与动脉粥样硬化的研究进展

Wnt5a是一种分泌型糖蛋白,参与生物体多种生命活动。研究显示wnt5a在apoE敲除小鼠的主动脉弓内膜处巨噬细胞聚集区域成强阳性,并且Wnt5a在人动脉粥样硬化斑块处高表达,提示Wnt5a在动脉粥样硬化发病过程中的重要作用。Wnt5a通过参与炎症反应、介导脂质转运以及脂质代谢等多个方面影响了动脉粥样硬化(As)的发生和发展。本文就近年有关Wnt5a与As关系研究的相关进展。     

新的J超家族芋螺毒素的克隆与进化分析

目的:从中国南海芋螺中克隆新的J超家族芋螺毒素,并进行序列和进化分析。方法:以芋螺毒腺管总RNA为模板,采用3′-RACE及巢式PCR的方法扩增J超家族芋螺毒素基因,并将得到的目的基因与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5α,经测序比对后,获得新的J超家族毒素,利用软件BioEdit、ClustalX及Mega5.05进行进化分析。结果:获得12个新的J超家族芋螺毒素前体肽序列,其氨基酸组成具有新颖性,在进化树上与已报道的J超家族毒素处于不同的进化分支。结论:12个新的J超家族毒素与已报道的毒素序列之间的同源性较低,是J超家族新成员。     

寄甲肿腿蜂属三新种(膜翅目,肿腿蜂科)

记述了我国寄甲肿腿蜂亚科寄甲肿腿蜂属3新种和1新纪录种,新纪录种为采自台湾,裸眼寄甲肿腿蜂Epyris apicalis Smith,1874,新种为横沟寄甲肿腿蜂Epyris transver-sarius sp．nov．,闽寄甲肿腿蜂Epyris fujianensis sp．nov．和长头寄甲肿腿蜂Epyris avatus sp．nov．。编制了中国寄甲肿腿蜂属分种检索表。模式标本保存于浙江大学寄生蜂标本室。     

DNA聚合酶高保真机理的新发现及其在SNP分析中的应用

高保真DNA聚合酶在遗传与进化等生命活动中具有十分重要的生理与病理意义。高保真聚合酶除具有广为人知的校正功能外,最近的实验进一步表明, 由不能及时校正或难于纠正的错配碱基引发的“关”闭DNA聚合反应的效应, 同样保证了DNA聚合反应终产物的纯度。高保真聚合酶这一“关”闭DNA聚合反应的能力, 促成了其与耐外切酶消化的3´末端碱基特异性引物共同构成一个SNP敏感性纳米级复合分子“开/关”,高保真聚合酶分子中相距三纳米的聚合中心和3´→5´外切酶酶解中心则既合作又独立地起到了复合分子开关中“开”和“关”的效能:对于配对的引物,则直接在该酶的聚合中心进行聚合反应,即“开”的效应;而对于3´末端错配的引物,则从该酶的聚合中心转移至3´→5´外切酶的酶解中心,由于引物修饰了的3´末端耐外切酶的特点,继而出现了一种长时间无酶解产物的酶解过程,最后因酶的聚合中心空转而“关”闭DNA聚合反应,即“关”的效应。这一新的复合分子“开/关”在很大程度上满足了后基因时代对SNP分析的要求。该SNP分子开关的应用, 使基因诊断提高到单碱基水平。同时, 利用该方法通过SNP对基因组扫描, 在单基因遗传病病因研究及法医学鉴定上具有很强的理论和实用价值。     

survivin在二烯丙基二硫诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的:研究survivin在二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导HepG2细胞凋亡中的作用。方法:MTT法检测细胞的生长活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR法检测survivin mRNA水平;Western blot法检测survivin蛋白水平。结果:用药组HepG2细胞活性与正常组相比,随着药物浓度的增加(25,50,100,200μmol/l),分别下降了9．3%、10．4%、21．6%、31．2%,HepG2细胞凋亡率分别增加0．83%、1．97%、6．0%、9．9%,低浓度(25,50μmol/l)的DADS可以诱导survivin mRNA和蛋白表达升高,而高浓度的(100,200μmol/l)DADS可以降低survivin mRNA和蛋白表达。结论:DADS诱导HepG2细胞survivin表达增加,抵抗DADS诱导HepG2细胞的凋亡作用。     

FXR1P相互作用RNA的研究

目的:本研究利用酵母三杂交系统从人脑海马回cDNA文库中筛选FXR1P的靶RNA,以进一步阐明FXR1基因的功能。方法:将表达FXR1P全长的质粒pYESTrp3/FXR1转化酵母菌株L40ura3/pHybLex/Zeo-MS2,检测毒性和自激活性;应用酵母三杂交技术从人脑海马回pRH3′-cDNA文库中筛选FXR1P的相互作用RNA;分离初步筛选的结果,再次转化含有诱饵质粒的融合菌株L40ura3/pHybLex/Zeo-MS2/pYESTrp3/FXR1,重新验证阳性结果;最后对阳性结果的外源插入片段进行测序和生物信息学分析。结果:酵母三杂交的筛选得到了3个阳性结果,经过测序和同源性分析,其中一个阳性结果中的插入片段为K-ALPHA-1 mRNA的部分序列。结论:K-ALPHA-1 mRNA可能是一种新的FXR1P的靶RNA。