利用CRISPR/Cas9n double nick系统构建人DNAH2基因敲除的U2OS细胞株

基于CRISPR/Cas9n double nick技术构建人DNAH2(Homo sapiens dynein,axonemal,heavy chain 2)基因敲除的U2OS稳定细胞株,旨在研究DNAH2基因的生物学功能。首先设计并合成A、B两个sg RNA(Single guide RNA)以及各自的互补链,退火连接形成DNAH2 sg RNA-A、B双链,再分别与带有BbsⅠ粘性末端的p X462线性载体相连,形成p X462-DNAH2-A、p X462-DNAH2-B重组真核表达质粒。质粒共转染至U2OS细胞后,加入嘌呤霉素,以有限稀释法获得阳性单克隆细胞株,再以蛋白印迹实验检测DNAH2蛋白的表达,最后通过PCR-基因测序技术分析突变特点。结果显示A、B sg RNA双链成功插入p X462载体,U2OS-DNAH2-KO单克隆细胞株中DNAH2蛋白不表达,DNAH2基因发生移码突变,从而证实利用CRISPR/Cas9n double nick系统成功构建人DNAH2基因敲除的U2OS稳定细胞株,为研究DNAH2基因提供有利工具。     

2010—2012年河南省成人体质指数分析

目的：分析河南省不同性别、年龄和居住地区的18岁以上成人的体质指数水平。方法：以2010—2012年中国居民营养与健康状况监测河南省监测点的18岁及以上成年居民体质指数数据经加权处理后分析BMI 值水平及低体重率、超重率、肥胖率。结果：河南省城乡居民体质指数平均值为24.74±3.63kg/m2且无论城乡高BMI值均出现在低龄男性和高龄女性。低体重率、超重率、肥胖率分别为2.67%、39.80%和16.74%。年轻人低体重情况较为普遍;超重率表现为农村显著高于城市,男性高于女性,农村女性肥胖率高发。结论：河南省成人居民低体重年轻化、BMI指数增长迅速、农村地区超重与肥胖高发的形势应加以重视。     

绿色畜禽产品质量安全的风险因素及对策建议

从养殖过程及养殖模式两个方面分析了影响绿色畜禽产品质量安全的风险因素,提出了保障绿色食品畜禽产品质量安全的措施和建议。     

抗生素含量测定方法的分析概述

抗生素作为一种抗菌物质,在现代医疗中起着非常重要的作用。2015版中华人民共和国药典共收录抗生素药品363种,所介绍的抗生素含量测定方法有4种。根据抗生素测定方法的统计,在这363种抗生素中,有275种采用高效液相色谱法;有75种采用抗生素微生物检定法;有8 种采用紫外-可见分光光度法;只有5种采用了滴定法。以最新的2015版中华人民共和国药典为基础,对抗生素的测定方法进行了分析概述,期望能在环境抗生素残留量的测定方面提供可借鉴的内容。     

用于生产重组蛋白药物的抗凋亡CHO宿主细胞株的建立

哺乳动物工程细胞在大规模培养生产重组蛋白时很容易发生细胞凋亡,从而导致生产过程提前终止,造成生产成本高昂。细胞代谢产物氨已被证明可以促进细胞凋亡,而线粒体膜整合蛋白Bcl-2可以通过促进线粒体膜完整性而抑制细胞凋亡。本实验应用谷氨酰胺合成酶加压系统在CHO工程细胞中高效表达中国仓鼠Bcl-2蛋白,使细胞具有抗凋亡能力的同时,利用谷氨酸和氨合成谷氨酰胺而有效降低培养基中氨的含量,从而达到抑制细胞凋亡的目的。     

不同树龄白桦的不同器官及其组培苗诱导的愈伤组织中白桦酯醇和齐墩果酸的分布和含量变化

检测一年生、四年生、六年生、八年生及四十年生白桦树各器官以及白桦组培苗诱导的愈伤组织和悬浮培养细胞中齐墩果酸和白桦酯醇的分布和含量。结果表明,不同树龄白桦的叶、茎外皮和根皮中都能检测出齐墩果酸和白桦酯醇,但主要集中在茎外皮,叶片和根皮中含量极低,齐墩果酸和白桦酯醇含量分别以四年生和八年生白桦茎外皮中最高。由白桦组培苗茎段诱导的愈伤组织及其悬浮培养细胞和组培苗根诱导的愈伤组织中都能测出白桦酯醇,其含量以茎段诱导的悬浮培养细胞中为最高。组培苗、茎段诱导的愈伤组织及其悬浮培养细胞、叶片和根诱导愈伤组织中均可以检测出齐墩果酸,其含量以悬浮培养细胞中的为最高。     

五节芒的组织培养与快速繁殖

1 植物名称五节芒[Miscanthus floridulu（Labnll．）Warb．] 2材料类别 种子。 3培养条件 （1）基本培养基：MS;（2）增殖培养基：MS＋6-BA1．0mg．L^-1（单位下同）＋KT1．0＋NAA0．05;（3）生根培养基：1／2MS＋NAA0．2。上述培养基均添加3％蔗糖、0．8％琼脂,pH5．7,培养温度为（25±2）℃,每天光照培养16h,光照强度25μmol·m^-2．s^-1。     

ERβ对子宫内膜异位症小鼠模型的影响

目的通过建立子宫内膜异位症小鼠模型探讨雌激素β受体对子宫内膜异位症的影响。方法利用雌激素β基因敲除小鼠建立自体子宫内膜异位模型;应用人不同的组织在SCID小鼠建立子宫内膜异位症模型后,注射雌激素β受体激动剂WAY-200070,观察其对异位病灶生长的影响。结果比较30只雌激素β受体基因敲除小鼠及22只同源未敲除小鼠异位病灶生长及组织细胞形态无明显差异（P〉0.05）;雌激素β受体激动剂WAY-200070对不同类型的SCID小鼠内异症病灶生长影响无明显差异（P〉0.1）。结论雌激素β受体对子宫内膜异位病灶的形成影响作用微弱。     

奶牛结核病诊断方法的比较研究

旨在比较目前实验室用于检测牛结核方法及PPD皮内变态反应检测牛结核的敏感性和特异性.对145头进行了PPD结核菌素实验的牛进行了IFN-γ体外释放试验,ELISA方法检测ESAT-6,CFP-10,MPB70,MPB83四个蛋白的抗体,胶体金检测两种相似蛋白MPB70和MPB83.结果表明,IFN-γ体外释放试验的敏感性和特异性最高,与PPD皮内变态反应有较高的符合性.在抗体检测方面,iELISA的敏感性高于胶体金方法.虽然抗体检测(iELISA和胶体金方法)比细胞介导的免疫方法(IFN-γ和PPD)敏感性要低,前者更适合于检测处于结核病程发展后期的样本,并且可以有效降低假阳性反应.     

福氏痢疾杆菌组氨酸合成中双功能焦磷酸水解酶和磷酸核糖环化水解酶双功能蛋白的初步研究

福志贺氏菌属是一类革兰氏阴性杆菌,是引起人类细菌性痢疾的主要致病源。以福志贺氏痢疾杆菌2a型301株全基因组为模板、以pET22b-(+)为载体、克隆了一个关键基因：组氨酸合成途径中双功能焦磷酸水解酶和磷酸核糖环化水解酶蛋白（简称：sf2088）。以BL21（DE3）为表达菌株,优化表达条件,获得了可溶表达的蛋白。经过亲和层析和分子筛层析获得目标蛋白。采用分析超速离心和动态光散射实验,对纯化后的蛋白进行稳定聚集状态的条件搜索,结果发现锌离子对稳定其聚合状态很重要。通过正交实验,获得蛋白保持稳定聚集态的条件。这对该酶的进一步研究奠定了基础。