大鼠再生肝中表达上调基因的筛选与鉴定

采用新发展的抑制差减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）在基因组水平筛选再生肝中高表达基因。大鼠肝部分切除后24h的再生杆组织来源的cDNA作为受检者（tester）,正常肝组织的cDNA作为驱动者（driver）,进行差减杂交,获得一900个克隆的差减杂交库,随后对差减克隆进行了差异筛选,得到50个在再生肝中高表达的强阳性克隆,序列测定和同源比较表明这些克隆代表了37个基因,其中13个与已报道的肝再生相关的基因同源,15个为忆知基因但首次发现与肝再生相关,9个为新的基因（EST）已被GenBank收录。制备了标准化RNA点杂交膜,通过对上述部分基因的RNA点杂交分析,不但确认了这些基因在再生肝中表达水平的升高,同时发现它们在肝再生过程中有不同的表达模式。实验结果提示这些基因在肝再生过程中具有重要功能。     

水稻两种细胞质雄性不育“三系”及其F1杂交种线粒体DNA的RFLP分析

对水稻BT型和WA型细胞质的雄性不育系,相应保持系和恢复系以及杂种的mtD-NA用12个线粒探针进行了RFLP分析,结果如下：（1）BT型和WA型不育系的mtDNA在组织结构上存在差异;（2）不育系的mtDNA与其保持系间存在显著差异,推测mtDNA与水稻的cms有关;（3）atp9探针检测到WA型不育系与F1之间的多态性,Frag36探针检测到BT型不育系与F1之间的多态性,Frag9探针检测到WA型和BT型不育系与其F1之间的多态性,证明核恢复基因影响mtDNA的结构;（4）对mtDNA的结构变异与细胞质雄性不育的关系进行了分析与探讨。     

西藏农作物病原真菌的区域分化初探

在西藏农作物病原真菌调查基础上,综合分析西藏自然环境条件和社会经济条件对病原真菌分布的影响,将西藏病原真菌分布划分为5个区：（1）喜马拉雅南侧暖湿润区;（2）藏东温暖半湿润区;（3）藏南温暖半干旱区;（4）西喜马拉雅温凉干旱区;（5）藏北羌塘高寒区。     

松嫩草原羊草种群遗传分化的研究

通过等位酶技术,综合分析了松嫩原理１１个羊草种群的遗传多样性及遗传分化指标,深入剖析了灰绿型和黄绿型两种叶色类型羊草种群之间的遗传差异：两类种群在等位基因频率、非平衡位点和Ａ、Ｐ、Ｈe及固定指数Ｆ上明显不同,两类种群间有极明显的遗传分化。黄绿型种群的Ａ、Ｐ、Ｈe皆低于灰绿型;黄绿型Ｆ＜０,灰绿型Ｆ＞０,这种差异主要表现在ＤＩＡ－１、ＰＧＭ、ＳＫＤ和ＡＣＰ等位点上;两类种群间的遗传分化主要发生在ＡＤＨ、ＤＩＡ－２和ＰＧＭ等位点上。种群间的遗传距离与地理距离之间没有相关。     

HSV—2阴道感染并诱导小鼠阴道粘膜上皮细胞凋亡

最近的报道指出,某些病毒有诱导体外细胞凋亡的作用,借以限制病毒的扩散。为探讨ＨＳＶ－２在体内诱导细胞凋亡的效果及其形态学特点,用 ＨＳＶ－２ ３３３株感染小鼠阴道,于感染后不同天数处死动物,取其阴道,固定于１０％中性福尔马林,ＴＵＮＥＬ末端标记染色显示凋亡的细胞,光镜下进行原位观察。结果显示：感染后的第１天粘膜上皮内即出现大量的凋亡细胞,第２天至１１天凋亡细胞的数量及在上皮内的分布范围达最高水平。早期的凋亡细胞见于感染后所有标本,其核染色质形态及分布似正常细胞,但它被ＴＵＮＥＬ标记染成棕黄色;晚期的凋亡细胞亦见于所有标本,其胞核缩小,染色质浓缩并在核周边集聚,核中心空化。载有凋亡细胞的上皮在阴道粘膜上分布很广,最广的可占全阴道上皮的２／３。同时可见ＨＳＶ．２引起的上皮细胞坏死及疱疹形成,二者均由凋亡细胞包围。凋亡细胞不断地由上皮表面脱落至阴道,未见凋亡小体及吞噬现象。结果提示,ＨＳＶ－２ ３３３株阴道感染可同时诱导细胞坏死及凋亡,细胞凋亡可能在限制病毒产生子代及限制感染区域扩展起重要作用。     

人巨细胞病毒PP71基因序列分析与表达

人巨细胞病毒 (Ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ)在人群中存在非常普遍 ,大多数呈临床不显性或潜伏感染 ,孕妇ＨＣＭＶ复发感染或新的感染均可引起新生儿宫内或围产期感染 ,导致胎儿畸形、智力低下和发育迟缓等。人是ＨＣＭＶ的唯一宿主 ,病毒可通过人与人间的直接或间接接触传播。近年来对ＨＣＭＶ的致病机理的研究已日趋深入 ,已有多项研究证实 ,ＨＣＭＶ ＰＰ71(ＵＬ82 )基因是病毒抗原之一。亦有研究证实 ,ＨＣＭＶ ＰＰ71是 (ＵＬ82 )基因产物 ,可促进病毒后期的基因表达 ,提高病毒的复制能力。本实验对ＰＰ71(ＵＬ82 )基因…     

人松弛素原样蛋白H2在大肠杆菌中的表达、分离纯化及鉴定

利用聚合酶链式反应方法 ,从含有人前松弛素原cDNA基因的质粒 pMALp2X-hRLXH2上得到人松弛素原H2的编码基因 ,亚克隆到温度诱导型原核表达载体pBV2 2 0上 ,转化大肠杆菌DH5α细胞。经 4 2℃温度诱导 ,获得了目的基因的高效表达。目的蛋白质以包含体的形式存在于大肠杆菌细胞中。菌体经过超声波破碎 ,包含体裂解 ,蛋白质的体外变性还原 ,复性 ,SephadexG 75凝胶过滤层析 ,反相快速蛋白质液相层析等一系列分离纯化过程 ,得到了高纯度的重组Met 人松弛素原样蛋白H2 ,得率约为 2～ 3mg/L。对纯化的目的蛋白质进行了SDS PAGE电泳纯度分析 ,氨基酸组成分析 ,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法测得目的蛋白质的分子量为 183 90 .4 (理论计算值为 183 92 .3 )。     

PCR—ELISA检测HBV DNA的研究

目的：建立一种敏感、特异的乙型肝炎病毒（HBV）DNA检测方法。方法：应用PCR扩增技术和核酸杂交技术结合酶促显色技术（即PCR－ELISA技术）来检测血清中的HBV DNA。结果：应用PCR－ELISA技术能够检出许多PCR琼脂张胶电泳所检测不到的HBV DNA,大大地提高了检出率,而且,特异性强。结论：PCR－ELISA方法灵敏度高,行异性强,检测结果数据化,不受主观因素的影响。     

Affinity chromatography—dependent selection （ACDS） of genomic DNA fragments bound specifically to bacterial synthesized Myc／Myn proteins

This paper describes an approach to seek for mouse c-Myc/Myn proteins-bound specific sequences among genomic DNA.cDNA fragment of myn gene was obtained through RT-PCR technique from RNA of NIH3T3 cells.DNA fragments encoding BR/HLH/LZ structure of Myc and Myn proteins were cloned in frame into pGEX-2T vector respectively.Fusion GST-Myc and GST-Myn synthesized in E.coli hosts showed affinity to CACGTG E-box DNA and subsequently interacted with genomic fragments prepared through whole-genome-PCR.A PCR-assisted procedure which combines protein-DNA interaction and affinity chromatography was designed to enrich Myc/Myn bound DNA.At least two genomic DNA fragments obtained exhibit specifical binding capacity to Myc/Myn complex but not to GST alone.Significance of the work and of the technique itself as well asidentification of the DNAs are discussed.     

电脉冲法生产转基因鱼

本文以鲤鱼受精卵为实验材料,通过电脉冲方法将全鱼基因（pcMTsGH)导入鱼胚。在处理的1873粒受精卵中（650V/cm,50μs,4次）,孵出鱼苗540尾,孵化率为28．8％;经斑点杂交和Southern印迹杂交,外源基因的整合率为9．1％。因此该方法可以作为转基因鱼研究和生产的方法。