中学生物奥赛金牌选手的培养策略

<正>《全国中学生生物学联赛、竞赛章程》指出:"全国生物联赛、全国生物奥赛目的是为加强中学生物学教学,提高生物学教学水平;促进中学生生物学课外活动;向青少年普及生物学知识;提高青少年的生命科学素质;为参加国际生物学奥赛做准备"。毫无疑问,     

急性低氧对大鼠微血管反应性及抗氧化酶的影响

目的：探讨不同急性低氧条件下对肠系膜微动脉血管反应性和抗氧化酶的影响。方法：实验采用给予大鼠吸入含氧量为12．5％和8．5％的氮氧混合气体,观察急性低氧后肠系膜微动脉血管口径、血流速度和血中谷光甘肽过氧化物酶（GSH—PX）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性和活性氧（ROS）含量的变化。结果：肠系膜微动脉血管口径随急性低氧时间延长而逐渐增大,而血液流速却减慢（P〈0．01,P〈0．05）;SOD、CAT和GSH—PX活力明显下降,ROS含量增加（P〈0.01,P〈0．05）。结论：急性低氧可使肠系膜微动脉管径变大和血液流速减慢;同时体内抗氧化酶活性减弱,这可能与自由基产生增加有关。     

温度对鳊鱼静止代谢和耐低氧能力的影响

以鳊鱼(Parabramis pekinensis)幼鱼[体重(8.13±0.15)g,n=31]为研究对象,以密闭式代谢测定法分别在15、20、25、30℃条件下测定其静止代谢率(Rest Metabolic Rate,RMR),并以双线法推算临界氧浓度Pcrit等相关参数。结果显示,鳊鱼幼鱼的静止代谢水平呈随温度上升而升高的变化趋势[(132.22±4.97)mg O2/(h.kg)(15℃),(182.67±12.49)mg O2/(h.kg)(20℃),(218.44±9.20)mgO2/(h.kg)(25℃),(298.32±9.96)mg O2/(h.kg)(30℃)],除20～25℃间,其他各温度组差异显著(P0.05);Q10值均低于2(15～20℃1.91,20～25℃1.43,25～30℃1.87);本研究还发现,随着温度的升高,鳊鱼幼鱼的Pcrit逐渐下降,而临界氧饱和度Scrit则相对保守[15、20、25、30℃的Pcrit分别为(1.35±0.09)、(1.16±0.19)、(0.97±0.12)和(0.86±0.09)mg O2/L,Scrit分别为13.87%±0.74%、13.32%±1.72%、12.15%±1.35%和11.34%±0.65%。这表明,采用不同指标考察鱼类耐低氧能力可能会得到相异的结论。这种结论的不一致提示,在鱼类应对环境溶氧降低的适应中,相对溶氧水平而不是绝对溶氧水平影响并决定着鱼类的适应性进化,因此采用相对饱和度作为指标研究鱼类耐低氧能力可能更具理论价值。     

犬瘟热病毒南京株H蛋白基因的克隆与表达

根据发表的犬瘟热病毒(CDV)参考株Ondetstepoort的序列设计一对引物,以犬瘟热病毒南京株(CDVNJ．15)感染的Vero细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增出1．9kb的全长H蛋白基因,双酶切该全长基因,得到1058bp片段,以正确的阅读框架定向克隆于pET-28b( )中,然后将重组质粒转化宿主菌RosettaTM,在37℃1．0mmol／LIPTG诱导下获得良好表达。经SDS—PAGE鉴定,表达的融合蛋白质约38kDa,与预期值一致。免疫转印试验显示,该重组蛋白可被CDVOnderstepoort兔抗血清识别,表明该重组蛋白具备部分抗原性。     

心脏干/祖细胞研究进展

心脏干/祖细胞(cardiac stem or progenitor cells, CSC/CPCs)的发现使人们认识到成体哺乳动物心脏是一个自我更新的器官, 同时也为心脏病的治疗提供一种优越的细胞类型.目前, 已分离鉴定出多种亚群的CSC/CPCs, 并对它们在心脏中赖以生存的生理微环境也有一定的认识.对不同亚群CSC/CPCs的表型、分化潜能及调节它们在体内静息、自我更新、迁移或分化等活动的分子机制进行综述, 讨论CSC/CPCs的来源并简要介绍胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)向心肌细胞的分化, 并对干细胞在心脏病治疗中的应用进行展望.     

分子氢对糖尿病视网膜小胶质细胞的保护作用及其机制研究

目的:研究分子氢对糖尿病视网膜小胶质细胞的保护作用及其可能机制。方法:采用100 ng/m L的LPS诱导视网膜小胶质细胞,同时将两组细胞分别置于正常培养环境和含有饱和氢培养环境下培养36小时。RT-PCR检测小胶质细胞中miR-9、miR-21和miR-199的表达。Western Blot测定TLR4信号途径相关蛋白的表达。结果:miR-9、miR-21在分子氢作用后明显下调,而miR-199在分子氢作用后下调不明显。并且,小胶质细胞活化后TLR4途径相关信号蛋白的表达增加,在分子氢处理后Myd88和IKKβ蛋白的表达明显减少,而NF-κB蛋白的表达前后没有明显的变化。结论:分子氢对视网膜小胶质细胞的炎症损伤具有明显的保护作用,氢作为一种信号分子对Myd88介导的TLR4炎症信号通路的调节及通路中部分miRNA的调节作用可能是其抗炎作用的机制。     

嗜酸古菌Cuniculiplasma divulgatum来源的GH1家族中温β-葡萄糖苷酶CdBglA的原核表达及酶学性质分析

葡萄糖苷酶在食品、医药、生物质转化等领域具有重要的应用价值,因此发掘适应性强、性质优良的β-葡萄糖苷酶是国内外研究的热点。本文对尚未报道的来源于嗜酸古菌(Cuniculiplasmadivulgatum)GH1家族的葡萄糖苷酶进行了克隆表达和酶学性质测定,以期找到更优的β-葡萄糖苷酶。从NCBI数据库中获取了C. divulgatum来源的GH1葡萄糖苷酶氨基酸序列,然后制备重组质粒pET-30a(+)-CdBglA,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白,对纯化后的CdBglA进行酶学性质研究。结果发现,重组酶CdBglA的分子量为56.0 kDa,最适pH为5.5,最适温度为55℃。该酶具有良好的pH稳定性,在pH 5.5-11.0范围内处理1 h,仍维持92.33%以上的酶活力。以p NPG为底物时的酶促反应动力学参数Km、Vmax和Kcat/Km分别为0.81 mmol、291.99μmol/(mg·min)和387.50s-1mmol-1。其在终浓度5mmol/L重金属离子的影响下均能保持90.33%以上的酶活力;在15%的乙醇溶液中酶活力被提高了28.67%,在2...     

Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表达及其免疫血清的制备

目的原核表达、纯化II型登革病毒NS1A蛋白(NS1蛋白1～180氨基酸即DENV2 NS1A),将其免疫动物制备免疫血清并鉴定。方法构建重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG低温诱导表达。表达的融合蛋白经Hitrap Talon crude柱亲和层析纯化后,免疫雌性日本长耳兔获得抗DENV2 NS1A兔抗血清,用Western blot和免疫荧光检测免疫血清对重组麻疹病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6Xhis的识别和结合特性。结果重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组融合蛋白相对分子质量为100 000,纯化后蛋白纯度在85%以上,免疫获得的抗DENV2 NS1A兔抗血清可识别重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis表达的DENV2 NS1蛋白。结论原核表达并纯化了DENV2 NS1A蛋白,建立了基于NS1蛋白的重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的Western blot和免疫荧光检测方法,为登革热疫苗研制中重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的质检奠定了基础。     

术前预后营养指数、炎症标志物与结直肠癌患者预后及术后并发症的关系研究

摘要 目的：探讨术前预后营养指数（PNI）、炎症标志物与结直肠癌患者预后、术后并发症的关系。方法：纳入我院2017年12月～2019年12月收治的结直肠癌患者150例行回顾性分析。在手术前,评估患者的PNI,并采血检测血小板计数（PLT）、中性粒细胞数（NE）,计算PLT与淋巴细胞比值（PLR）、NE与淋巴细胞比值（NLR）。分析患者术后并发症情况,并分成并发症组、无并发症组,根据术后12个月的预后情况,分成生存组、死亡组。比较术后有无并发症及不同预后患者的PNI、PLR、NLR,分析影响结直肠癌患者术后并发症及预后的影响因素。结果：在150例患者中,术后有26例（17.33%）发生并发症,124例（82.67%）无并发症;术后12个月内死亡19例（12.67%）,生存131例（87.33%）。并发症组术前PNI低于无并发症组,PLR、NLR高于无并发症组（P＜0.05）,死亡组术前PNI低于生存组,PLR、NLR高于生存组（P＜0.05）。Logistic多元回归模型分析显示：开腹手术、术前营养风险、术中出血量≥200 mL、PLR≥147.98、NLR≥2.86是患者术后并发症发生的危险因素,PNI≥51.94是预防术后并发症的保护性因素（P＜0.05）。COX多因素模型分析显示：临床分期为Ⅲ期、肿瘤直径＞4 cm、脉管癌栓、浸润深度为T3+T4、PLR≥147.98、NLR≥2.86是患者死亡的危险因素,PNI≥51.94是预防死亡的保护性因素（P＜0.05）。结论：术前PNI下降以及PLR、NLR升高会增加结直肠癌患者术后并发症以及死亡风险,三者是患者术后并发症与预后不良的影响因素。     

日本中部不同放牧条件下人工草地地上枯死量的时间变化*

日本国立草地研究所位于日本中部的西那须地区,为了提示草地生态系统的能流和碳循环与气象因素与人为干扰之间的关系的规律,在其所辖人工草地的放牧试验场内,自1974a至1994a间,进行了不同放牧条件的长期实验。对该人工草地在21a间的地上枯死量(包括立枯部和地面凋落物)随时间变化规律以及不同放牧处理(不同放牧强度和施肥量)对其影响进行了评价和分析。结果表明,地上立枯部分和凋落物的量随季节和年度变化很大,并与地上部现存生物量有显著的正相关关系;协方差分析结果表明放牧压力、季节和年度等变化因素对地上立枯部分和凋落物的量有着极强的影响(p<0.01),而施肥量的影响则无显著性差异。