镰刀菌Q7-31T内切葡聚糖酶Egn20的分离纯化鉴定及酶学特性

摘要:【目的】从镰刀菌Q7-31T燕麦秸秆诱导发酵的粗酶液中分离、纯化并鉴定内切葡聚糖酶,研究其酶学特性。为丰富和完善镰刀菌的酶系信息提供理论支持。【方法】以燕麦秸秆为碳源诱导发酵培养菌株,采用Sephacry S-100凝胶柱层析和DEAE琼脂糖弱阴离子交换柱层析对粗酶液进行分离纯化得到内切葡聚糖酶Egn20,随后对其进行了酶学性质分析和串联质谱鉴定。【结果】分离纯化得到内切葡聚糖酶Egn20,其分子量为55.37 kDa,等电点为7.44;酶学特性结果表明:Egn20对羧甲基纤维素的最适反应温度为40 ℃,最适pH为6.0,该酶在45 ℃和弱酸性环境下较稳定,Fe2+对其有激活作用,Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+和K+抑制该酶活性,Hg2+使该酶失活;酶学特性和串联质谱鉴定的结果表明Egn20属于GH7家族。【结论】从镰刀菌Q7-31T粗酶液中分离纯化得到内切葡聚糖酶Egn20,并对其进行了酶学性质的研究和串联质谱鉴定,结果表明Egn20为GH7家族内切葡聚糖酶。本研究为丰富和完善镰刀菌的酶系信息提供了理论和数据支持。     

胶质射脉革菌漆酶的复合诱导及其脱色性能

[目的]研究复合诱导对胶质射脉革菌BBEL0901产漆酶的影响及其粗酶液对染料的脱色性能。[方法]采用分光光度法测定漆酶活性及其染料脱色性能。[结果]甘草渣和Cu2+对BBEL0901产漆酶均有促进作用,于发酵的第6 d向含甘草渣的低氮培养基中添加Cu2+(0.5 mmol/L)对漆酶的协同诱导作用最显著,活性达325.1 U/m L,分别为Cu2+单独诱导、甘草渣单独诱导和未诱导的4倍、14.4倍和19.8倍。粗酶液对不同结构的染料均有较强的脱色能力,对三苯甲烷类染料的脱色效果最好,脱色率达80%以上。[结论]甘草渣与Cu2+对BBEL0901漆酶具有协同诱导作用,酶活最高可达325.1 U/m L,产业化潜力大,所得粗酶液在染料脱色方面具有良好的应用前景。     

几种薏苡的过氧化物酶和多酚氧化酶同工酶分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的方法,对薏苡,野生薏苡和水生薏苡的几个不同种质分别进行了过氧化物酶（POD）和多酚氧化酶（PPO）的同工酶酶谱分析,结果表明：POD和PPO含量丰富,活性强,酶谱复杂,酶带清晰,稳定,种间差异明显。结果可以作为薏苡研究种质亲缘关系的基础。     

中华按蚊电转化显微注射技术平台的构建及其在基因瞬时过表达中的应用

【目的】构建在中华按蚊 Anopheles sinensis 中的电转化显微注射技术平台,并利用该技术平台实现活体基因瞬时过表达对其进行验证,为开展系统的基因功能研究奠定基础。【方法】以CUY21EDIT Ⅱ电转仪为主体构建中华按蚊中的电转化显微注射技术平台;使用同源重组法构建 EGFP 和 Bm-iAANAT 基因的瞬时过表达质粒,在中华按蚊化蛹3 h时注射该质粒进入蛹体,随即使用电转仪对注射后的蛹进行电击,待注射个体发育至化蛹39 h时,利用体视荧光显微镜观察蛹体表皮着色和发光情况,并通过荧光定量PCR检测 EGFP 和 Bm-iAANAT 的表达。【结果】构建了用于显微注射的 PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV 40和 PIZ-modi-Aepub-AANAT- T2A-EGFP-SV 40过表达载体。 PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV 40注射组中华按蚊在化蛹39 h时约87.5%的个体成活并正常黑化,这其中约92.7%的个体的表皮检测到明显的绿色荧光,注射无启动子载体 PIZ-modi-EGFP-SV 40并进行电击的阴性对照组和注射过表达载体 PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV 40但未进行电击的阳性对照组个体则没有明显的绿色荧光;并且荧光定量PCR结果显示,注射组中发光个体的 EGFP 基因明显高表达。 PIZ-modi-Aepub-AANAT-T 2 A-EGFP-SV 40注射组的蛹在化蛹39 h时有80.4%个体存活,这其中92.2%的个体相对于注射无启动子载体 PIZ-modi-AANAT- T2A -EGFP-SV 40的阴性对照组和注射过表达载体 PIZ-modi-Aepub-AANAT- T2A -EGFP-SV 40但未进行电击的阳性对照组个体黑化明显受阻,且有明显的绿色荧光;并且荧光定量PCR结果显示,报告基因 Bm-iAANAT 和 EGFP 的表达明显提高。【结论】成功构建了在中华按蚊中的电转化显微注射技术平台;通过此技术平台能够便捷、快速和高效地实现报告基因在活蛹中的瞬时过表达,并产生了目的表型。这为中华按蚊功能基因组研究奠定了基础。     

长白山寒温带风灾区植被受损与灾后变化程度及其影响因素

1986年台风袭击了长白山,在西、南坡的寒温带针叶林和岳桦林带形成了大量林窗.为了探究在强风干扰下寒温带森林植被受损和变化特征,揭示植被受损与灾后变化规律及其影响因子,2017年在长白山海拔1600～1800 m设立研究区.利用遥感资料,对研究区依据植被破坏程度和灾后变化程度进行植被差异分区,并布设了40个样方进行植被调查.结果表明: 按森林结构的受损程度可将长白山寒温带风灾区分为3个等级,轻度破坏、中度破坏和重度破坏,其中,中度破坏区的面积最大,其次是轻度破坏区、重度破坏区.乔木受损差异显著,轻度破坏区、中度破坏区和重度破坏区乔木优势种的数量分别减少20%、50%和85%,岳桦的抗风性大于鱼鳞云杉,大径级岳桦的抗风性大于小径级的岳桦.植被受损程度与坡度的相关性最强,随着坡度的增加,受风灾破坏程度减小.1987—2017年间,长白山寒温带风灾区的植被发生明显变化,根据变化的程度可将研究区分为3个等级:变化快、变化中等和变化慢,其中,变化中等的区域面积最大,其次是变化慢、变化快的区域;植被变化程度与海拔的相关性最强,随着海拔的增加,植被变化变慢.乔木的恢复较慢,鱼鳞云杉略好于岳桦;植被变化主要表现在灌木层和草本层,变化快的区域灌木层发育好于草本层;变化中等的区域草本层发育好于灌木层;变化慢的区域灌木层发育差异大,但草本层总体上表现为低矮稠密.     

怀姜的化学成分及其抗炎活性研究CSCD

首次对国家地理标志产品怀姜的化学成分进行系统分离,为怀姜的物质基础研究和开发利用提供依据。综合应用硅胶柱色谱,ODS柱色谱和半制备型高效液相色谱,对怀姜的70%乙醇提取物中乙酸乙酯部位的化学成分进行分离纯化,根据核磁共振波谱数据及相关文献数据对化合物进行结构鉴定,从怀姜中分离鉴定出12个化合物,分别为(-)-muurola-4,11-diene(1)、邻苯二甲酸二丁酯(2)、(2Z)-neral acetal-[6]-gingerdiol(3)、6-姜酚(4)、6-姜烯酚(5)、8-姜烯酚(6)、10-姜烯酚(7)、10-姜酚(8)、6-paradol(9)、dihydroferulic acid ethyl ester(10)、(3R,5S)-3,5-diacetoxy-1-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)decane(11)、p-hydroxybenzaldehyde(12)。化合物1、2、10、12为首次从姜属植物中分离得到,化合物1~4、6~12均为首次从怀姜中分离得到。对从怀姜中分离出的化合物1、3、6、7、9、11进行抗炎活性筛选,化合物3、6、9、11对LPS诱导的RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞中NO的产生有明显的抑制作用。     

血卟啉单甲醚对食管癌细胞 Eca-109 的光动力学杀伤效应

目的:探讨血卟啉单甲醚(HMME)介导的光动力疗法(PDT)对人食管癌细胞杀伤效应的最佳作用参数,为HMME-PDT的临床应用提供一定的参考依据。方法:以4μg·m L-1HMME与人食管癌Eca-109细胞孵育不同时间后,利用形态学软件分析其荧光强度;进一步予不同浓度(0.5μg·m L-1~8μg·m L-1)HMME与细胞孵育1.5小时后,在特定波长下以不同能量的激光(2、4、8 J·cm-2)照射,采用CCK8法检测细胞的存活率。结果:HMME在细胞内的荧光强度于给药1.5 h后达到高峰。在一定范围内,随着HMME浓度与激光剂量的增加,细胞存活率逐渐下降,当HMME浓度增高到4μg·m L-1时,光照强度增高到4 J·cm-2,进一步提高药物浓度与激光剂量,细胞存活率并不随之降低。结论:不同的孵育浓度、不同的孵育时间及不同的光照剂量密度可以显著的影响HMME-PDT对人食管癌Eca-109细胞的体外效应。     

副干酪乳酪杆菌BD5115代谢产物对肠上皮屏障完整性的增强作用及其效应物质的初步研究

目的 筛选具有改善肠上皮屏障功能潜力的益生菌,并进一步探究其作用机制及其生物效应物质。方法 以Caco-2细胞单层跨上皮电阻（transepithelial electrical resistance,TEER）和异硫氰酸荧光素―葡聚糖（FITC-Dextran）的透过率为评价指标,比较不同乳酪杆菌发酵脱脂乳上清对细胞单层完整性的影响及发酵时间对副干酪乳酪杆菌BD5115发酵乳上清活性的影响;采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测乳酪杆菌发酵乳上清及其代谢产物对Caco-2细胞间紧密连接相关基因表达的影响;采用超高效液相色谱和四极杆―静电场轨道阱高分辨质谱仪联用对发酵24 h和6 h的BD5115发酵乳上清中的差异代谢物进行筛选;采用细胞免疫荧光对Caco-2细胞中紧密连接蛋白Occludin进行定位。结果 干酪乳酪杆菌ATCC334和副干酪乳酪杆菌BD5115发酵乳上清能显著增加细胞单层TEER及降低FITC-Dextran的透过率,上调Occludin基因表达,且BD5115发酵乳上清对细胞单层完整性的增强作用优于ATCC...     

蛋白质二级结构预测服务器PSRSM

蛋白质二级结构预测是蛋白质结构研究的一个重要环节,大量的新预测方法被提出的同时,也不断有新的蛋白质二级结构预测服务器出现。试验选取7种目前常用的蛋白质二级结构预测服务器:PSRSM、SPOT-1D、MUFOLD、Spider3、RaptorX,Psipred和Jpred4,对它们进行了使用方法的介绍和预测效果的评估。随机选取了PDB在2018年8月至11月份发布的180条蛋白质作为测试集,评估角度为:Q3、Sov、边界识别率、内部识别率、转角C识别率,折叠E识别率和螺旋H识别率七种角度。上述服务器180条测试数据的Q3结果分别为:89.96%、88.18%、86.74%、85.77%、83.61%,79.72%和78.29%。结果表明PSRSM的预测结果最好。180条测试集中,以同源性30%,40%,70%分类的实验结果中,PSRSM的Q3结果分别为:89.49%、90.53%、89.87%,均优于其他服务器。实验结果表明,蛋白质二级结构预测可从结合多种深度学习方法以及使用大数据训练模型方向做进一步的研究。