多倍体罗汉果PCR-RFLP参数的优化与应用

以多倍体罗汉果DNA为材料,采用L16(4~5)正交组合试验和单因素梯度试验,研究Mg~(2+)、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA浓度和退火温度、循环次数等对PCR扩增结果以及内切酶量、酶切时间对酶切反应的影响。结果表明,多倍体罗汉果RFLP最优PCR反应体系和扩增参数为:在25μL扩增反应体系中,10×Buffer 2.5μL,MgCl_2 1.5 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,引物0.1μmol/L,Taq DNA聚合酶2.0 U,模板DNA 60 ng;退火温度为56℃,循环次数为35次。酶切反应体系:内切酶10×Buffer 2.0μL,内切酶5.0U,PCR产物15μL,超纯水补至20μL;酶切时间2 h。     

黄霉素高产菌株的选育

目的:为了获得黄霉素高产菌株。方法:进行了一系列的诱变筛选。以加纳链霉菌(Streptomyces ghanaesis)SgWE-11为出发菌株,采用紫外线诱变,以其自身代谢物黄霉素作为筛选因子。结果:获得一株遗传稳定且黄霉素发酵效价比出发菌株高出170.25%的菌株。对该菌株采用亚硝酸诱变,并以链霉素作为筛选因子时得到一株效价值为875u/mL的高产菌株SgWE-25,比出发菌株SgWE-11提高了4.4倍。传代结果表明,在传代的同时结合自然分离,可以保持稳定的产抗特性。     

福莫特罗对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化基因表达的影响

目的:研究β2肾上腺素能激动剂福莫特罗(Formoterol)对大鼠的体外骨髓间充质干细胞(MMSC)向成骨细胞分化的影响,进而探讨其作用机制。方法:取SD大鼠的骨髓间充质干细胞,用条件培养液诱导分化后分别加入不同浓度药物,在不同时间点采用RT-PCR法检测细胞分化中Runx2和Osterix的mRNA的表达,采用westernblot法检测细胞中MEK和ERK1/2的磷酸化。结果:在细胞分化早期,加入已知浓度10-7mol/L的Formoterol可抑制成骨样细胞细胞特异性转录因子Runx2mRNA表达;在细胞分化晚期,浓度10-7mol/L的Formoterol也可抑制成骨样细胞OsterixmRNA表达。在加入浓度10-7mol/的Formoterol作用30min后,MEK和ERK1/2的蛋白磷酸化表达均下降。结论:β2受体激动剂可抑制MMSC细胞体外向成骨样细胞的分化,并且可抑制MEK和ERK1/2磷酸化的表达。     

不同序贯的索拉非尼与化疗药物联用对人肝癌细胞Bel一7402的增殖抑制作用

应用MTT法检测了靶向性药物索拉非尼（Sorafenib）分别与阿霉素（ADM）、氟尿嘧啶（5一FU）、顺铂（DDP）和紫杉醇（PTX）等4种化疗药物按照不同给药序贯联合作用对肝癌细胞Bel-7402增殖的影响。结果表明,索拉非尼与4种化疗药物联用对Bel-7402细胞增殖的抑制作用效果均要好于单独用药,对细胞的Ic,。明显低于单独用药。联合用药效果受到给药序贯的影响,索拉非尼先于化疗药物给药,cI值（除与紫杉醇联用）均大于1,表现为拮抗效应;索拉非尼后于化疗药物给药,cI值均小于1,表现为明显的协同效应。研究结果可供肝癌f临床治疗参考,有助于lI缶床降低用药剂量,减轻药物毒副作用。     

头孢羟氨苄甲氧苄啶胶囊致固定性药疹1例

目前,头孢羟氨苄甲氧苄啶胶囊致固定性药疹尚未见有文献报道,作者2012年1月10日诊治1例,现报告如下。1临床资料患者,男,49岁,干部。因口腔、包皮及龟头红斑、糜烂,伴痒痛2天入院。患者2天前因咽痛、咳嗽在个体门诊诊治,诊断：上呼吸道感染。     

SDS-PAGE分析肝癌细胞和正常肝细胞膜蛋白

目的:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法获得肝癌细胞株HepG2和人正常肝细胞株L-02蛋白质表达谱,期待找到与肝癌细胞相关的差异蛋白。方法:体外培养肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株L-02,分离提取细胞膜蛋白,用SDS-PAGE分析细胞膜蛋白。结果:2种细胞膜蛋白的疏水相和亲水相蛋白区带位置基本相同,但肝癌细胞株HepG2膜蛋白在相对分子质量66×103处有较清晰的异常蛋白区带。结论:肝癌细胞HepG2除了具有与正常肝细胞相同的组成物质外,还有自己独特的蛋白质表达谱,这一实验可为癌症的研究提供一定的参考。     

中国茶梅内生真菌一新记录种*

In survey of diversity of endophytic Pestalotiopsis associated with Theaceae in Nanning, Guangxi Pestalotiopsis karstenii, a dominant endophytic fungus from stem of Camellia sasanqua, is a new record in China. (Saccardo & P. Sydow) Steyaert, Bull. Jard. Bot. Etat. Bruxelles 19 : 305, 1949. Fig. 1 Pestalotia inquinans P. Karsten, Hedwigia 30: 301, 1891, [non Pestalotia inquinans Cooke & Pestalotia karstenii Saccardo & P. Sydow in Saccardo, Syll. Fung. 14:1030, 1899. Monochaetia …     

结合GAL4/UAS系统与CyO-GFP平衡子获取表达RNA干扰序列果蝇幼虫并有效干扰Tis11表达

TIS11是转录后调控因子TTP在果蝇中的同源物,在果蝇幼虫免疫、发育和代谢等多种生理过程中都发挥重要作用.为研究TIS11的功能,需要利用GAL4/UAS系统获得整体高干扰效率的Tis11 RNAi果蝇幼虫．为平衡GAL4转基因果蝇高活性启动子的致死效应,需要使用带有成蝇卷翅标记CyO的第二染色体的平衡子,但CyO标记在幼虫中无可见表型,因此无法区分杂交幼虫的基因型．为解决这一问题,引入了带有CyO-GFP标记的平衡子．携带CyO-GFP平衡子的G-Actin果蝇与携带Tis11 RNAi序列的101765果蝇杂交,杂交幼虫可以通过GFP标记进行区分,剔除带有CyO-GFP平衡子的幼虫,从而挑选出表达Tis11 RNAi序列的幼虫,最后经real-time PCR检测所得幼虫具有整体高干扰效率．     

古DNA证据支持曹操的父系遗传类型属于单倍群O2

人类Y染色体是研究父系血缘的最佳材料。得益于近年来二代测序技术的发展,以及本实验室在东亚范围内大规模的遗传调查,我们获得了大量具有区分力的Y染色体新遗传标记,并构建了约20万份含有Y-STR和Y-SNP信息的遗传数据库,从而可以根据Y-STR单倍型推断出需要测试的样本的单倍群归属。因此,我们可以有针对性地选择较少的SNP组成"微检版"(mini-panel)去确定样本的真实遗传类型。本次对元宝坑一号墓曹操叔祖父曹鼎古DNA实验,证明曹操及其后人的遗传类型属于O2-M268+,F1462+,PK4-,弥补了之前通过现代人家系推测曹操遗传类型和Y-STR推测Y-SNP的缺陷。这一技术改进将使历史人类学的研究工具更加完善和有效。