重组肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)突变体的构建、表达与活性分析

A型肉毒神经毒素的轻链(BoNT/A LC)是一种锌依赖性的金属内肽酶.通过X射线分析其结构并结合一些文献报道表明,轻链上的Arg362和Tyr365直接参与了酶的催化作用,而Glu350则处于其活性位点的中心位置.采用定点突变技术,对编码这3个关键性的氨基酸位点的碱基进行突变(Arg362Ala、Tyr365Phe、Glu350Ala),获得了BoNT/A LC突变体.突变体蛋白与BoNT/A的底物蛋白SNAP-25进行切割反应,结果表明,未经突变的BoNT/A轻链蛋白能够特异性地识别SNAP-25蛋白上的Q197-R198位点,而突变体蛋白则完全无法识别该位点,不具有金属内肽酶活性,成功地去除了肉毒神经毒素的毒力,为下一步的全长肉毒神经毒素重组疫苗的研究打下了基础.     

免疫毒素的抗肿瘤研究

免疫毒素是由具有导向能力的载体（抗体或细胞因子）和具有细胞毒性的分子（毒素）偶联而成的具有特异性细胞杀伤能力的杂合分子,是一种靶向药物。免疫毒素首先利用肿瘤细胞上导向分子的受体与细胞结合,然后进入细胞,再由毒素发挥蛋白质合成抑制作用,最终导致靶细胞死亡。与其他抗肿瘤药物相比,免疫毒素具有毒性强和特异性高的优点,在肿瘤治疗中显示出巨大的应用前景。简要概述了免疫毒素的作用机理、制备及其抗肿瘤研究进展。     

小麦与珍珠粟远缘杂交的受精作用和胚胎发育

对波斯小麦、“中国春”小麦与珍珠粟远缘杂交的受精作用和胚胎发育进行了研究。珍珠粟花粉管能在小麦柱头上萌发,并且有多个花粉管进入花往及胚囊。波斯小麦已授粉的207个子房中,11．11％既形成胚又形成胚乳,7．25％只形成胚,而1．93％只形成胚乳,在这个杂交中受精率和成胚率分别为20．29％和18．36％。“中国春”小麦已授粉的167个子房中,相应的数字是299％、5．99％、0、8．98％和8．98％。杂交后形成的胚和胚乳核型极不稳定,来自珍珠粟的染色体很快被排除,最后产生的是单倍体的小麦胚。但因无胚乳或胚乳败育,幼胚缺乏营养供应而停止发育或夭亡。探讨了影响小麦×珍珠粟受精率的可能因素以及通过远缘杂交染色体排除法进行单倍体诱导和珍珠粟基因向小麦转移的可能性。     

草地早熟禾假受精现象的研究

本文运用石蜡切片法、整体透明法研究了草地早熟禾的假受精现象。结果表明,草地早熟禾在两极核清晰可见时,卵细胞就已自发分裂成原胚,此现象占观察总数８８％;但是,其极核必需经过受精过程才能发育为胚乳。     

小麦与赖草远缘杂交的受精和胚胎发育

小麦与赖草远缘杂交的受精和胚胎发育王景林（首都师范大学生物系,北京１０００３７）通过远缘杂交向小麦导入亲缘种属的抗性基因,越来越受到育种学家的重视。赖草属（Ｌｅｙｍｕｓ）植物分布广、适应性强,具有很多小麦不具备的优良性状,如抗盐碱、耐干旱、抗病害等。...     

大黍无融合生殖现象的研究

大黍无融合生殖现象的研究冀朝辉,王景林（首都师范大学生物系,北京１０００３７）大黍（Ｐａｎｉｃｕｍｍａｘｉｍｕｍ）是一种热带牧草。据报导,它具有无融合生殖特性。其无融合生殖类型为体细胞无孢子生殖,并且属于兼性无融合生殖。我们运用石蜡切片法和整体透明法...     

重组蓖麻毒素A链蛋白的可溶性表达、纯化与抗原性分析

用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后,亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coliBL21(DE3)plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA。该工程菌在30℃经0.4mmol／LIPTG诱导4h后获得可溶性表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的18.45％,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与RTA相对分子量相符,约32kDa左右。表达产物经Ni-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度约达97.53％,并可得到约18mg/L重组RTA蛋白。Western印迹和间接ELISA结果证明,重组RTA蛋白与抗天然蓖麻毒素多抗可发生特异性的抗原抗体反应,具有良好的抗原性,这为制备RT特异性抗体及建立RT的检测方法奠定了基础。     

高活力纤维素酶菌株康氏木霉B—7的选育与产酶条件的研究

野生型康氏木霉８５４－Ｂ＿２分别经物理化学诱变因子,ＴＤＰ辐射器和空间微重力辐射等因素的多级处理,得到１株形态发生明显改变的变异株Ｂ—７,其固体培养物的纤维素酶各组分酶活力,如滤纸糖酶活力（ＦＰＡ）为３４ｕ／ｇ,羧甲基纤维素酶活力（ＣＭＣ—ａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ,β－葡萄糖苷酶活力（β－Ｇｌａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ,与８５４－β２相比,分别提高５．９倍,７．６倍和４．２倍。其固体培养的最佳条件是：ｐＨ６．０,２８～３０℃,９６小时,最适培养基成分为：青草粉：麸皮＝７：３,１．５～２．０倍水和（ＮＨ４）２ＳＯ４１．５～２．０％（均以固体料计）。     

基于荧光检测的新型细胞传感器

主要介绍了一类基于荧光检测的新型细胞传感器,这类传感器利用免疫细胞表面分子特异性识别、结合抗原的特性和生物(或化学)发光技术,通过检测荧光信号在数分钟内达到检测病原体或其他抗原的目的.这类传感器的发光原理主要是利用钙离子敏感型化学荧光探针发光,如Fluo-4等,或钙离子敏感型发光蛋白发光,如水母发光蛋白、绿色荧光蛋白等.现在已经应用的主要是B细胞传感器和肥大细胞传感器.这类传感器具有灵敏度高、检测准确、反应速度快的优点.同时又存在交叉反应、细胞不易保存等不足之处.这类传感器在疾病诊断、环境监测、生物战剂检测等领域具有较大的应用前景.     

根癌农杆菌转化桥楼及植株再生

用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）菌株C58感染栝楼（Trichosanthes kirilowii Maxim.）无菌苗诱导冠瘿瘤,获得其冠瘿组织;栝楼冠瘿组织经除菌后能在无激素的MS培养基上良好生长,纸电泳检测结果表明其合成了冠瘿碱,表明Ti质粒转化成功,栝楼冠瘿组织在MS培养基上形成完整植株,移栽后良好生长。