高表达人源SP15对小鼠生长和生殖的影响

目的:探究高表达人源SP15对小鼠生长和生殖的影响,为研究NYD-SP15在生物体中的功能提供动物模型。方法:将人源NYD-SP15 cDNA以及Cre序列插入PCAG启动子下游,构建NYD-SP15转基因表达载体,并通过原核注射,构建全身性表达NYD-SP15的转基因小鼠;将获得的NYD-SP15转基因小鼠与C57/BL6小鼠交配,PCR鉴定转基因小鼠是否有Cre插入,筛选出人源NYD-SP15表达的小鼠,统计转基因小鼠体重变化和后代阳性情况。结果:通过PCR鉴定及公司测序验证,我们成功构建了NYD-SP15转基因过表达载体。并通过PCR鉴定小鼠基因型,筛选出可以表达人NYD-SP15的转基因小鼠。比较转基因小鼠与同窝野生型小鼠体重,发现转基因小鼠体重与同窝野生型小鼠相比无明显区别,说明在体内过表达NYD-SP15对小鼠体重无明显影响。通过对后代阳性小鼠出生情况统计发现F2代阳性小鼠出生率较F1代明显降低。结论:人源NYD-SP15在小鼠体内能正常表达,对其生长无明显影响,但其后代阳性出生率呈逐代下降趋势,推测该原因可能与NYD-SP15在睾丸中表达有关。     

转基因小鼠过表达人Lin28A/Lin28B对小鼠体重的影响

目的:Lin28是一种高度保守的RNA结合蛋白,对生物体的生命活动具有重要的调节作用.为了研究人Lin28A与Lin28B基因的功能,我们构建了分别过表达人Lin28A或Lin28B基因的两种转基因小鼠,表型分析发现小鼠体重变化,为研究Lin28A和Lin28B基因的生物学功能提供模型动物.方法:分别将人类Lin28A与Lin28B cDNA插入PCAG启动子下游,构建Lin28A与Lin28B转基因表达载体,通过显微注射方法,分别建立Lin28A转基因小鼠与Lin28B转基因小鼠.PCR鉴定转基因小鼠的基因型,筛选出人类Lin28A与Lin28B表达的小鼠,统计两种转基因小鼠体重变化.结果:①经PCR鉴定与公司测序证明Lin28A和Lin28B两种载体构建成功.②PCR鉴定小鼠基因型,筛选出可以特异性表达人Lin28A或Lin28B的转基因小鼠,并比较转基因小鼠与同窝野生型小鼠体重,发现两种转基因小鼠体重均大于同窝野生型小鼠,说明在小鼠体内过表达Lin28A或Lin28B均能引起小鼠体重增加.结论:人Lin28A与Lin28B在转基因小鼠体内能正常表达,并且能发挥生物学功能.又因为Lin28A和Lin28B在小鼠体内过表达会引起小鼠体重增加,我们推测其可能通过影响小鼠糖代谢过程引起小鼠体重改变.构建的Lin28A和Lin28B的转基因小鼠为进一步研究Lin28A和Lin28B在人新陈代谢、生长和发育过程中的作用提供了动物模型.     

温度对以截形叶螨为猎物的斯氏钝绥螨生长发育的影响

测定了斯氏钝绥螨Amblyseius swirskii（Athias—Henriot）在14、17、20、23、26、29、32、35℃和RH=85％的条件下,以截形叶螨为猎物各螨态的发育历期,分析发育速率与温度的关系。结果表明,14℃不适宜斯氏钝绥螨的生长发育,存活率仅17．5％;在17～35℃之间其生长发育正常,存活率均100％,各螨态的发育历期与温度均呈负相关关系,发育历期随着温度的升高明显缩短,未成熟期总发育历期从21．36d缩至3．97d。采用线性日度模型拟合温度与发育速率的关系表明,该模型能较好地描述其发育速率在适宜温度范围内随温度升高而加快的现象。斯氏钝绥螨不同发育阶段的发育起点温度和有效积温不同,未成熟期的发育起点温度和有效积温分别为11．92℃和94．69日·度。     

柑橘木虱及分泌物对胡瓜新小绥螨的吸引作用研究

在25℃温度条件下,在九里香(Murraya panicuata)嫩枝条上研究柑橘木虱Diaphorina citri Kuwayama混合虫态、卵、低龄若虫、高龄若虫、柑橘木虱分泌物对胡瓜新小绥螨Neoseiulus cucumeirs(Oudemans)雌螨的吸引作用,以探索与评价捕食螨对柑橘木虱各虫态及分泌物的趋向性。研究发现:1.柑橘木虱混合虫态对胡瓜新小绥螨的吸引作用在试验后第2小时经测验达到显著水平(P<0.05),第3小时达极显著水平(P<0.01),表明柑橘木虱混合虫态对胡瓜新小绥螨有很强的吸引作用;2.柑橘木虱卵对胡瓜新小绥螨雌成螨无吸引作用;3.试验开始后第1⁵小时在试验区胡瓜新小绥螨数量分别高于空白区25.00%、18.33%、13.33%、15.00%和23.33%,柑橘木虱低龄若虫对胡瓜新小绥螨有较强烈的吸引作用;4.柑橘木虱高龄若虫对胡瓜新小绥螨吸引作用在第1小时最高,第25小时在试验区胡瓜新小绥螨数量分别高于空白区25.00%、18.33%、13.33%、15.00%和23.33%,柑橘木虱低龄若虫对胡瓜新小绥螨有较强烈的吸引作用;4.柑橘木虱高龄若虫对胡瓜新小绥螨吸引作用在第1小时最高,第2³小时最低,第4小时开始回升,第5小时可达到51.67%。可见柑橘木虱高龄若虫对胡瓜新小绥螨有一定的吸引作用;5.柑橘木虱分泌物对胡瓜新小绥螨吸引作用在第1小时最高,试验区胡瓜新小绥螨数量高于空白区33.33%、胡瓜新小绥螨不能取食柑橘木虱分泌物,第2小时胡瓜新小绥螨向外逃跑的比率增加。但胡瓜新小绥螨在试验区数量仍高于试验区,柑橘木虱分泌物对胡瓜新小绥螨也有一定的吸引作用。本试验环境开放,模拟自然状态。在柑橘木虱混合虫态发生的情况下,胡瓜新小绥螨对其具备搜寻能力。     

几种常用杀菌剂对胡瓜钝绥螨的影响

采用3种不同的方法测定了5种常用杀菌剂对天敌胡瓜钝绥螨Neoseiulus cucumeris（Oudemans）的影响。结果表明5种杀菌剂中,86．2％铜大师可湿性粉剂8001200倍对胡瓜钝绥螨有较低的影响,喷雾法测定最高浓度800倍校正死亡率为15．00％,而让胡瓜钝绥螨取食经86．2％铜大师可湿性粉剂各浓度药液处理过的山楂叶螨Amphitetranychus viennensis（Zacher）均无二次中毒现象,80％代森锌可湿性粉剂、80％大生M-45可湿性粉剂、50％代森锰锌可湿性粉剂和50％普雅图可湿性粉剂在3种试验方法中各浓度对胡瓜钝绥螨死亡率均与清水对照相当,因此释放捕食螨生防园防治病害可选用对胡瓜钝绥螨影响小的80％代森锌可湿性粉剂800～1000倍、80％大生M-45可湿性粉剂500-600倍、50％代森锰锌可湿性粉剂600-800倍、86．2％铜大师可湿性粉剂12001500倍、50％普雅图可湿性粉剂800-1000倍。     

北五味子果实中果胶的超声提取工艺研究

采用超声波法提取北五味子果实中的果胶成份,咔唑-浓硫酸显色法测果胶得率,并应用正交试验设计对其提取工艺参数进行了优化。试验结果表明:各因素对北五味子果胶提取的影响顺序依次为超声功率提取温度料液比提取时间,最佳工艺参数为超声功率200 W,提取温度为65℃,料液比为1∶30,提取时间为50 min,果胶提取率为6.32%。     

表达分泌型脑源性神经营养因子的腺相关病毒载体的构建及其表达的检测

采用PCR和体外连接的方法构建了带有信号肽的脑源性神经营养因子(BDNF)的融合基因, 将此基因插入到腺相关病毒载体穿梭质粒pSNAV, 然后用重组质粒pSNAV-Ig-BDNF转染包装细胞, 筛选出永久细胞株后, 用携带腺相关病毒rep及cap基因的单纯疱疹病毒超感染包装细胞, 成功包装出含有目的基因的一型血清型腺相关病毒。经PCR鉴定该病毒含有目的基因片段, 被该病毒感染的细胞裂解液经Western blotting 证实有BDNF表达, 其培养液经ELISA检测证实含有高水平的BDNF蛋白。该病毒与小量的非复制型腺病毒Ad-null联合应用时, 其BDNF蛋白的表达水平显著提高。可弥补腺相关病毒起效慢、对细胞转导效率低的弱点, 为今后应用AAV作基因治疗提供了实验证据。     

DNA分子标记技术在濒危物种保护中的应用

近20年来,随着分子生物学技术的迅猛发展,涌现出一批高效、可靠的DNA分子标记技术.本文论述了限制性片段长度多态性、微卫星DNA、随机扩增多态性DNA、扩增片段长度多态性等DNA分子标记技术的基本原理及技术特点;同时,介绍了DNA分子标记在濒危物种种群遗传学研究、致危因素分析及保护策略的制定等保护生物学方面的应用.     

树轮稳定碳同位素分析的采样方法——以天目山柳杉为例

树轮稳定碳同位素在重建气候和环境方面得到了越来越多的应用,可是采样的方法却是多种多样,限制和影响了不同结果之间的比较。究竟在几个方位采样,在什么方位采样,既经济方便又能比较好的反映一棵树的稳定碳同位素变化过程与趋势,还没有确切的答案。研究利用来自天目山的两个柳杉树盘的多方位的和整轮的碳同位素测试数据（共计642个）,通过不同方位和不同方位组合的平均碳同位素序列与整轮碳同位素序列的关系的多角度的考查、分析发现,并不是采样的方位数越多越好,选择2～4个方位采样合并分析树轮稳定碳同位素,既经济方便又能比较好的反映一棵树的δ^13C变化过程与趋势。在两个或者3个方位采样时,方位之间呈钝角关系时,其代表性最好。4个方位采样时,一般使用的“十字交叉法”并不是最好的选择,建议采样的方位之间尽可能多的成钝角关系。如果条件限制只能采集一个方位的样品,采集向阳一侧的树芯,其代表性最好。